张静怡
- 作品数：7 被引量：30H指数：4
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤和肝衰竭模型中线粒体基因组转录改变被引量：7
- 2016年
- 目的通过探索对乙酰氨基酚（APAP）诱导的急性肝损伤和急性肝衰竭模型中线粒体基因组转录水平的改变与疾病进展之间的关联,为AILI预后的预测提供新的生物标记。方法将90只小鼠随机分为3组：对照组、APAP导致的DILI组（AILI,300 mg/kg）和APAP导致的急性肝衰竭组（AILF,750 mg/kg）。禁食16 h后,腹腔注射体积相近的0.9%氯化钠溶液和不同剂量APAP,在0、1、3、6、12 h等不同时间点时,每组随机选取6只小鼠处死,留取小鼠的血浆和肝脏组织。检测每只小鼠ALT、AST、ROS变化水平;提取肝脏总RNA,采用RT-PCR技术检测线粒体基因组基因的转录水平。结果与对照组相比,腹腔注射APAP后,两组均可见转氨酶明显升高,AILI组在6-12 h时ALT达到峰值（5 000~10 000 U/L）;AILF组12 h时ALT水平超过10 000 U/L,明显高于AILI组（P〈0.05）。APAP处理后,两组小鼠均可见典型的3区微泡性脂肪变,AILF组可见典型的急性肝衰竭的大块性坏死。与对照组相比,AILI和AILF组肝脏中ROS从1 h开始,各时间点均可见显著升高,且1 h时,AILF组ROS的生成量约为AILI组的2.5倍（P〈0.05）。AILI组COX1在6 h时显著升高（P〈0.05）,而对照组和AILF组均未见显著升高。与对照组相比,3 h时,AILI组和AILF组可见CYTB、COX2和ATP8显著降低（P〈0.05）;6 h时,AILI组和AILF组COX1、ND1、ND5和ATP8转录水平显著降低（P〈0.05）;12 h时,AILI组和AILF组中NADH各亚基均可见显著降低（P〈0.05）。AILI组与AILF组相比,6 h时,AILF组中ATP6的转录水平显著低于AILI组和对照组（P〈0.05）;12 h时,AILF组的肝脏中CYTB、COX2、ATP8以及NADH的2、3、5和6亚基的转录水平显著低于AILI组（P〈0.05）。结论线粒体基因组除COX1在AILI组明显上调,其他存在明显改变的基因均出现降低趋势,且AILF组变化更明显。线粒体基因组转录水平改变对于预测AILI预后有潜在价值。
- 明雅南李春敏张静怡刘晓琳茅益民
- 关键词：对乙酰氨基酚肝损伤肝衰竭
- 对乙酰氨基酚诱导急性肝衰竭小鼠动物模型的建立被引量：4
- 2016年
- 目的通过腹腔注射高剂量对乙酰氨基酚(APAP)构建稳定的用于研究药物导致急性肝衰竭的动物模型。方法本研究首先进行生存率实验,取60只C57BL/6小鼠随机分为4组,每组15只,分别腹腔注射0.9%氯化钠溶液及不同剂量(300 mg/kg、500 mg/kg、750 mg/kg)APAP后,观察不同组别72 h内小鼠的精神、活动状态和生存率。根据生存率分析结果,另选取180只C57BL/6小鼠,随机分为3组,分别腹腔注射0.9%氯化钠溶液、低剂量(300 mg/kg)和高剂量(750 mg/kg)APAP,每组分别在0、1、3、6、12 h等时间点随机选取12只小鼠,留取血清和肝组织,验证小鼠的生化和组织学是否符合急性肝衰竭的表现。结果生存率实验结果显示,0.9%氯化钠溶液组、300 mg/kg以及500 mg/kg组72 h内无小鼠死亡;750 mg/kg组72 h死亡率为100%,推测750 mg/kg组可能为急性肝衰竭导致的死亡。生化和组织学验证实验结果发现,对照组各时间点转氨酶均无明显升高;APAP处理的两组动物模型ALT3 h时开始升高,6 h时低剂量组ALT升高达到峰值[(6766.5±2001.27)IU/L],而高剂量组ALT于12 h达到(11707.58±1882.45)U/L(P<0.01)。从HE病理染色来看,0.9%氯化钠溶液组各时间点肝脏形态结构正常。APAP处理的两组动物模型的肝组织学,主要表现为以中央静脉为中心的肝细胞变性坏死,并随时间延长,损伤范围逐渐扩大。低剂量组坏死周围界限清楚,汇管区肝细胞结构形态正常,12 h可见坏死区周围肝细胞增生表现。高剂量组表现为典型的急性大片状坏死特点,仅汇管区残存少量变性的肝细胞,细胞快速坏死后,留下空的网状纤维支架,肝窦淤积大量红细胞,未见肝细胞增生。HAI评分结果显示,高剂量组的HAI得分(7.33±1.5)显著高于低剂量组(5.25±2.26,P<0.05)。结论 C57BL/6小鼠腹腔注射高剂量APAP(750 mg/kg)后,生化和组织学改变与急性肝衰竭相似,本研究构建的动物模型对于探索APAP导致的AHF的发病及进�
- 明雅南李春敏张静怡刘晓琳茅益民
- 关键词：对乙酰氨基酚肝衰竭动物模型
- 非酒精性脂肪性肝病不同表型的代谢组学研究被引量：6
- 2015年
- 目的本研究旨在研究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)不同表型在代谢水平的变化,从而探索其所涉及的生物学过程并为临床提供合适的诊断生物标记物。方法使用高脂饲料,蛋氨酸胆碱缺乏饲料和链脲佐菌素腹腔注射建立单纯性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和NAFL伴随2型糖尿病(NAFL+T2DM)的大鼠模型。通过液相色谱-四级杆飞行时间质谱在大鼠的肝脏和血清中检测差异表达的代谢物。结果 NAFL组大鼠肝脏出现轻度的脂肪变性并出现糖耐量异常;NASH组大鼠肝脏出现显著的大泡性脂肪变和炎症浸润,但空腹血糖和空腹胰岛素正常;NAFL+T2DM大鼠肝脏脂肪变以小泡性为主,并且空腹血糖和胰岛素显著升高(P<0.05)。代谢组学发现在NAFL组、NASH组和NAFL+T2DM组中,分别有57、49和60种肝脏代谢物发生变化,以及50、68和41种血清代谢物发生变化;它们主要参与脂质代谢和脂肪酸代谢。有17种肝脏代谢物和4种血清代谢物在NAFL,NASH和NAFL+T2DM组发生了相同的变化,其中只有硬脂酰肉毒碱含量在大鼠的肝脏和血清中都显著升高(P<0.05)。结论NASH、NAFL和NAFL+T2DM都出现了脂质和脂肪酸的代谢紊乱,硬脂酰肉毒碱在NAFLD的不同表型中都稳定升高,可以为临床提供一个更敏感的NAFLD诊断生物标记物。
- 刘晓琳明雅南张静怡曾民德茅益民
- 关键词：非酒精性脂肪性肝病代谢组学生物标记物
- 非酒精性脂肪性肝病对肠道炎症及通透性的影响被引量：1
- 2017年
- 目的通过高脂饮食建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型,观察NAFLD大鼠是否也同时伴随存在肠道炎症,并探讨NAFLD对肠道通透性的影响。方法 24只雄性大鼠以1∶1比例随机接受标准饲料和高脂饲料喂食18周,分别建立对照组和NAFLD大鼠模型。通过大鼠肝脏病理切片HE染色和油红O染色验证模型的成立,根据大鼠结肠病理切片HE染色观察是否存在肠道炎症进行进一步分组分析。使用酶联免疫吸附测定血浆二胺氧化酶、D-乳酸水平和内毒素水平,检测肠道通透性改变情况。结果与对照组相比,12只NAFLD大鼠肝脏均呈大泡和小泡性脂肪变以及气球样变,其中发现有7只大鼠的肠道存在轻度炎症细胞浸润,组织学符合肠道炎症改变;NAFLD组中另5只大鼠未见组织学上肠道炎症改变;而在对照组中未见任何肠道炎症改变。与对照组相比,NAFLD大鼠血浆中二胺氧化酶和D-乳酸水平显著升高(P<0.05)。其中,NAFLD伴肠道炎症组大鼠的D-乳酸水平较NAFLD不伴肠道炎症组显著升高(P<0.05)。NAFLD伴肠道炎症组大鼠血浆中LBP水平明显高于对照组和NAFLD不伴肠道炎症组(均P<0.05)。结论 NAFLD可增加肠道炎症发生的风险,NAFLD导致肠道炎症时肠道通透性显著增加。
- 张静怡李春敏唐颖悦明雅南刘晓琳曾民德茅益民
- 关键词：非酒精性脂肪性肝病肠道炎症通透性
- COX和CPT在非酒精性脂肪性肝病不同进展阶段中的变化
- 2015年
- 目的通过NAFLD不同发展阶段的动物模型研究线粒体的细胞色素C氧化酶(COX)和肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT))在NAFLD进展中的变化。方法建立单纯性脂肪肝(NAFL)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的大鼠模型,通过大鼠肝脏病理切片HE染色和血清生化指标的检测验证模型的成立,使用RT-PCR和Western印迹检测大鼠肝脏的COX和CPT的mRNA和蛋白的表达量。同时在大鼠肝脏中提取线粒体,检测纯化的肝脏线粒体中两种酶的活性变化。结果 NAFL大鼠肝脏呈现轻度的脂肪变性和气球样变,NASH组大鼠肝脏则呈现弥漫的大泡性脂肪变和炎性浸润。与对照组相比,肝脏COX、CPT的基因和蛋白表达量在NAFL组和NASH组均降低(P<0.05)。在纯化线粒体中的检测提示,COX在NAFL和NASH组分别降低20%和35%,且NASH组显著低于NAFL组(P<0.05);CPT在NAFL和NASH组分别降低35%和50%,且NASH组显著低于NAFL组(P<0.05)。结论在NAFLD进程中,线粒体的能量转化和物质代谢功能都受到了不同程度的抑制,且随着疾病进展而加重。
- 刘晓琳明雅南张静怡曾民德茅益民
- 关键词：非酒精性脂肪性肝病线粒体酶活性
- 非酒精性脂肪性肝病对肠道菌群多样性影响的初步研究被引量：7
- 2017年
- 目的通过高脂饮食建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型,观察NAFLD对肠道菌群多样性及群落组成的影响。方法建立NAFLD大鼠模型,通过大鼠肝脏病理切片HE染色验证NAFLD模型的成立,利用16sRNA测序技术对粪便肠道微生物进行检测分析,探讨NAFLD对肠道菌群多样性及群落组成的影响。结果肝脏组织学检查显示NAFLD组大鼠肝脏脂肪变明显,提示NAFLD动物模型建立成功。对照组Shannon多样性指数显著高于NAFLD组(P<0.05)。提示对照组的肠道微生物多样性显著丰富于NAFLD组。在门水平的变化情况提示,与对照组相比,NAFLD组中厚壁菌门和变形菌门的相对丰度较高(均P<0.05),而拟杆菌门的相对丰度则较低(P<0.05)。在科水平的变化情况提示,正常对照组以毛螺菌科、瘤胃球菌科、拟杆菌科_S24-7为优势菌科,而NAFLD组则以毛螺菌科、瘤胃球菌科为优势菌科。与对照组相比,NAFLD组中的毛螺菌科、拟杆菌科、脱硫弧菌科、氨基酸球菌科、Christensenellaceae菌科等相对含量较高(均P<0.05),而拟杆菌科_S24-7、普雷沃氏菌科、乳杆菌科等相对含量较低(均P<0.05)。结论 NAFLD可降低肠道菌群的多样性,并且显著改变肠道菌群的组成和含量。
- 张静怡唐颖悦李春敏明雅南唐洁婷曾民德茅益民
- 关键词：非酒精性脂肪性肝病肠道菌群多样性
- 药物诱导的自身免疫性肝炎研究进展被引量：5
- 2016年
- 药物诱导的自身免疫性肝炎是由药物诱发的自身免疫反应所介导的肝损伤，由于与特发性自身免疫性肝炎的临床特征相似，临床上鉴别诊断往往非常困难。深入了解药物诱导的自身免疫性肝炎的发生情况、发病机制、所涉及的相关药物、风险因素、临床和组织学特点等，有助于更好地正确诊断和治疗本病。
- 李春敏张静怡唐颖悦茅益民
