杨熙
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 供职机构：曼尼托巴大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 自然杀伤细胞通过树突状细胞调控衣原体肺部感染中Th17/Treg免疫应答平衡被引量：6
- 2019年
- 目的探索鼠衣原体(Cm)肺部感染中自然杀伤(NK)细胞调节Th17/Treg应答的作用机制。方法建立鼠Cm肺部感染模型,采用CD11c^+磁珠分选NK细胞去除鼠和同型对照抗体处理鼠的脾树突状细胞(DCs),转输至野生鼠体内,对应小鼠分为NK^-DCs组(n=13)和NK^+DCs组(n=13)。经Cm攻击感染后,比较两组小鼠疾病严重程度;流式细胞术分析脾和肺中Th17及Treg应答变化。结果与转输NK^+DCs小鼠相比,转输NK^-DCs的小鼠病情加重,表现为体质量下降、肺载菌量增加及病理损伤加重,同时脾和肺中Th17应答降低,Treg应答增强,Th17/Treg应答失衡,差异均有统计学意义。结论在Cm肺部感染中,NK细胞能够通过调控DCs有效启动Th17应答,抑制Treg应答,发挥抗感染免疫保护作用。
- 周小青李静赵蕾唐伟杨熙杨熙
- 关键词：衣原体自然杀伤细胞肺部感染
- 密码修饰可增强沙眼衣原体MOMP DNA质粒免疫小鼠的免疫应答
- 2006年
- 目的探讨密码修饰对沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因表达和DNA质粒免疫的影响。方法根据人类密码子使用偏好对鼠肺炎沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis mouse pneumoni-tis)MOMP基因进行优化修饰,设计合成人源化MOMP基因(HuMOMP)。构建以pcDNA3为载体的含HuMOMP及含野生型MOMP基因(WtMOMP)的真核表达质粒。瞬时转染COS-1细胞,Western blot方法比较HuMOMP基因及WtMOMP基因在哺乳动物细胞中的蛋白表达水平。DNA质粒肌内免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清特异性抗体、DTH和淋巴细胞增殖反应,比较优化密码MOMP基因和野生型MOMP基因DNA质粒免疫的免疫效果。结果人工合成HuMOMP基因,成功构建重组真核表达质粒pcDNA3-HuMOMP及pcDNA3-WtMOMP。转染细胞Western blot结果显示,HuMOMP基因的蛋白表达水平明显高于WtMOMP基因。ELISA结果表明,HuMOMP DNA质粒免疫组小鼠血清特异性IgG抗体有所升高;细胞免疫检测结果显示,HuMOMP DNA质粒免疫组小鼠足垫肿胀程度增强、淋巴细胞增殖实验刺激指数(SI)增高,两者与WtMOMP DNA质粒免疫组相比P<0.05,差异均有统计学意义。结论人源化密码修饰能够增强沙眼衣原体MOMP基因在哺乳动物细胞中的蛋白表达及DNA质粒免疫小鼠的免疫反应,这对于新型衣原体DNA疫苗的研究具有重要意义。
- 郑燕赵蔚明王红周亚滨栾怡齐眉程轶喆唐伟于晗杨熙
- 关键词：沙眼衣原体MOMP密码子
- 腺病毒介导MOMP基因转染对树突状细胞免疫功能的影响
- 2008年
- 目的探讨腺病毒（Ad）介导E型沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）基因转染对树突状细胞（DC）的表型及体内免疫功能的影响。方法用小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）及白细胞介素4（IL-4）从小鼠骨髓干细胞中诱导培养DC，并用大肠杆菌脂多糖（LPS）促进DC的成熟，流式细胞仪检测DC表型。用不同感染滴度（MOI）的含增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的重组Ad转染DC，荧光显微镜下观察EGFP的表达细胞百分率，选择最佳MOI；用最佳MOI的含MOMP基因的重组腺病毒（Ad-MOMP）转染DC，流式细胞术检测转染前后DC表型变化，并用活细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测转染前后DC刺激同种淋巴细胞增殖的能力；ELISA检测转染前后DC分泌细胞因子及DC、T细胞共同培养上清中细胞因子的水平。Ad-MOMP转染DC经尾静脉免疫小鼠，ELISA检测其脾脏淋巴细胞分泌的细胞因子。结果诱导的DC形态典型，表面高表达CD11c、MHCⅡ类分子，中度表达CD80分子。MOI=1000为重组Ad转染DC最佳滴度，此时90％以上的DC表达荧光，Ad-MOMP转染DC后能检测到MOMP的表达。Ad-MOMP转染对DC表面的特征性表型CD11c无影响，而CD80及MHCⅡ表达上调；转染后的DC分泌大量IL-12，具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力，并刺激T细胞分泌大量IFN-γ。Ad-MOMP转染DC后尾静脉免疫小鼠，其脾细胞产生高水平的IFN-γ。结论Ad载体能介导外源MOMP基因在DC中的表达，Ad-MOMP转染DC后MOMP基因的表达能增强DC抗原提呈功能，促进DC活化，转染后的DC与T细胞共孵育能诱导T细胞向TH1细胞分化，体内实验表明Ad-MOMP转染DC能诱导衣原体特异性TH1反应。这为Ad-MOMP转染的DC疫苗用于免疫治疗提供了理论依据和技术基础。
- 吕慧王红李湘新齐眉刘娟郑燕李靖赵蕾杨熙于修平赵蔚明
- 关键词：沙眼衣原体腺病毒载体树突状细胞
- E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究被引量：6
- 2006年
- 目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组腺病毒,为沙眼衣原体腺病毒疫苗的研究奠定基础。方法:根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到MOMP基因片段,克隆至pcDNAII载体,测序后连接入腺病毒穿梭载体pDC316。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至HEK293细胞,在Cre-loxP重组酶作用下进行重组,包装成重组腺病毒颗粒,用PCR和RT-PCR方法进行鉴定。并用动物免疫试验检测重组腺病毒的免疫原性。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出约1.1 kb的特异MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实穿梭载体pDC316-MOMP构建正确。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至293细胞,出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒,PCR法证实重组腺病毒含有MOMP基因,RT-PCR证实重组腺病毒在293细胞能表达MOMP基因。重组腺病毒免疫小鼠可诱导特异性抗体产生,证明重组腺病毒具有良好免疫原性。结论:成功构建了E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒,该重组腺病毒可诱导小鼠产生特异性抗体。
- 吕慧赵蔚明于修平郑燕王红周亚滨齐眉于晗杨熙
- 关键词：衣原体沙眼重组腺病毒MEMBRANE近交BALB
- E型沙眼衣原体MOMP基因重组质粒的构建与表达被引量：2
- 2005年
- 目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组真核表达质粒pVAX1-MOMP,为探索安全的E型CtDNA疫苗奠定基础。方法:根据Genebank中E型CtMOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到约1.1kb的MOMP片段,克隆至pcDNAII载体,测序后亚克隆至表达载体pVAX1,构建卡那霉素抗性真核重组表达质粒pVAX1-MOMP,并以重组质粒转染COS-1细胞进行表达,用Westernblotting方法鉴定表达产物。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出特异的MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实pVAX1-MOMP重组质粒构建正确,能在COS-1细胞内表达,表达产物能与抗MOMP单克隆抗体特异性结合。结论:成功构建E型沙眼衣原体MOMP真核表达质粒pVAX1-MOMP,并在真核细胞内获得表达。
- 吕慧赵蔚明郑燕王红周亚滨齐眉栾怡程轶喆于晗杨熙于修平
- 关键词：衣原体沙眼基因表达基因MOMP
