李明
- 作品数：7 被引量：36H指数：4
- 供职机构：大连海洋大学水产与生命学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省高校创新团队支持计划辽宁省科技厅基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学医药卫生更多>>
- 仿刺参补体AjC3部分基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2017年
- 通过制备仿刺参补体C3(AjC3)多克隆抗体,为进一步研究仿刺参补体AjC3免疫机制奠定基础。利用PCR技术扩增AjC3部分基因片段(4556~5110bp),将该片段与原核表达载体pGS-21a连接。将重组表达质粒转化到Transetta(DE3)中经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱纯化后,作为抗原免疫小鼠制备AjC3多克隆抗体。分别用间接ELISA,Western blot检测抗体的效价和特异性。结果显示,PCR扩增得到约555bp的目的片段,重组蛋白分子量大小约56ku;间接ELISA检测抗体效价达1∶25600,Western blot结果显示,多克隆抗体具有良好的特异性。该试验成功的制备了补体AjC3多克隆抗体,为补体AjC3的进一步研究提供了检测工具。
- 张思李明张建清卢亚楠翟钰张峰
- 关键词：仿刺参多克隆抗体原核表达
- 刺参机体酵母菌组成及其拮抗活性的研究被引量：17
- 2012年
- 采用PDA、YPD、MEA培养基从刺参Apostichopus japonicus的体表、肠道和呼吸树分离出23株酵母菌,使用玻璃珠破碎方法提取其DNA,然后用酵母菌通用引物NL-1/NL-4从DNA中成功扩增出26S rDNA片段,将PCR产物进行测序,将各菌株序列在GenBank数据库中进行检索,从Blast比对结果中取相似性最高的序列,用Mega 4.0软件对所有序列进行聚类分析,采用邻接法构建系统发育树。结果表明:从大连柏岚子海域刺参中分离出的菌株分别属于红酵母属、梅奇酵母属和丝孢酵母属,从大连市黑石礁海域刺参中分离出的菌株分别属于红酵母属、假丝酵母属、德巴利氏酵母属、有孢汉逊酵母属和毕赤酵母属;以8株刺参病原菌作为指示菌,采用双层琼脂扩散法对分离菌株的拮抗活性进行测定,获得拮抗酵母菌17株,占总测试菌株的73.9%,从刺参机体的体表、肠道和呼吸树可以筛选出不同得率的活性菌株,其抗菌谱和活性强度各不相同,其中C11菌株的抗菌谱最广,抗菌活性最强;从肠道分离出的拮抗菌C11、C14和C21菌株的胞外产物经硫酸铵沉淀后也具有抗菌活性,C14菌株胞外产物经65%硫酸铵沉淀获得的粗提物对热和蛋白酶K敏感,表明其拮抗物质为蛋白质。
- 李明马悦欣刘志明杨志平包鹏云宋坚
- 关键词：刺参酵母菌抗菌活性
- 抗鲶爱德华氏菌多克隆抗体的制备及特性分析被引量：5
- 2010年
- 利用2株黄颡鱼"红头病"病原菌——鲶爱德华氏菌的灭活疫苗作为免疫原,免疫新西兰大白兔,制备了高效价的多克隆抗体。通过间接酶联免疫、间接免疫荧光和免疫印迹等技术对多克隆抗体特性进行了分析。测定获得多抗效价分别为1∶215和1∶214,2株病原菌之间存在很强的交叉反应,且2种多抗均与鲶爱德华氏菌、迟钝爱德华氏菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、火神弧菌、河流弧菌、创伤弧菌标准菌株存在交叉反应,与粪肠球菌、大肠杆菌、酿脓链球菌、海豚链球菌、杀鲑气单胞菌、嗜水气单胞菌、类产碱假单胞菌标准菌株均无交叉反应。免疫印迹实验结果表明,2株病原菌的主要抗原决定簇相同,分子量分别为61.1,46.6,41.3,28.8和19 kDa。本实验得到了黄颡鱼"红头病"致病菌高效价的多克隆抗体,可以作为初步筛选"红头病"病原菌的工具,为建立快速有效的疾病监测方法和进一步的免疫学防病研究提供了依据,奠定了基础。
- 李华李重实李明李强叶仕根
- 关键词：黄颡鱼红头病多克隆抗体
- 壳寡糖对仿刺参体腔液细胞免疫的影响
- 2016年
- 考察了三种抗凝剂对仿刺参体腔细胞的抗凝效果,研究了壳寡糖作为免疫添加剂对仿刺参体腔液细胞吞噬能力的影响,利用化学发光法检测壳寡糖对吞噬过程中活性氧作用的影响。结果发现,无菌海水对刺参体腔细胞具有一定的抗凝效果,且细胞形态和活性保持较好,将壳寡糖以1%、3%的质量浓度添加入到基础饲料中,分别检测体腔液细胞吞噬情况和呼吸氧爆发情况,结果表明壳寡糖可显著提高仿刺参体腔液细胞吞噬能力和活性氧水平(P<0.05),总体表现为1%壳寡糖组>3%壳寡糖组>对照组。
- 卢亚楠王武李明张建清王丽丛玉婷
- 关键词：仿刺参壳寡糖活性氧
- 孔雀绿分子印迹96孔检测板的制备及应用研究被引量：4
- 2016年
- 为更加快速、灵敏、简单地检测水产品中的孔雀绿（MG）残留,通过原位聚合法,以乙腈/甲苯溶液（V/V=3∶1）为溶剂、甲基丙烯酸（MAA）为功能单体、二甲基丙烯酸乙二醇酯（EGDMA）为交联剂（模板分子与之比例为1∶4∶20）,制备了分子印迹聚合物（MIP）。通过包被MIP到96孔板上研发了以化学发光免疫分析法（CLIA）检测的MG-MIP-96孔检测板,其标准曲线为y=-29197.49x＋1945998.45,R2=0.9416,线性范围为30~66.64 ng/m L,检测限为3.355ng/m L。批内变异系数范围为7.38%~18.07%,批内回收率范围为103.41%~144.45%;批间变异系数范围为12.45%~17.52%,批间回收率范围为100.07%~143.20%。以孔雀石绿结构类似物副品红（PA）和结晶紫（CV）进行特异性检测的交叉率分别为27.97%、30.97%。说明此新型检测方法具有很大的研究价值和实际应用价值。
- 张建清李明张思张峰卢亚楠
- 关键词：孔雀绿分子印迹聚合物化学发光
- 两种鮰爱德华菌ELISA快速检测方法的建立与应用被引量：3
- 2013年
- 为了对水产动物致病菌鮰爱德华菌进行早期、快速地检测,以鮰爱德华菌单克隆抗体5D11作为检测抗体,分别建立了间接ELISA和竞争ELISA两种快速检测鮰爱德华菌的方法,并用棋盘滴定法进行了条件的优化。结果显示,间接ELISA实验中采用37℃过夜这种包被方法能有效促进酶标板对细菌的吸附作用,单克隆抗体和二抗的最佳稀释倍数分别为1∶80和1∶1 000,病原菌的检测灵敏度为5×106cells/mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,并且可用于对鮰爱德华菌标准菌株及其分离株的快速检测;同时采用棋盘滴定法确定了竞争ELISA实验中包被抗原-抗体最佳工作组合为5×108～1∶80、抗体和竞争抗原比例为3∶7,并制作出了相关系数为0.990 1的标准曲线,该方法特异性强,最低检出限106cells/mL,可在一定范围内对鮰爱德华菌进行定性和定量检测,弥补了间接ELISA的不足。
- 张显昱李强李明黄华叶仕根李华
- 关键词：间接ELISA竞争ELISA
- 温度、盐度和pH对仿刺参体腔细胞活性氧产生的影响被引量：6
- 2016年
- 无脊椎动物主要依靠天然免疫进行自身防御,而活性氧在保护宿主免受病原侵害方面发挥重要作用。本文研究了环境因子温度,盐度和pH对仿刺参体腔细胞吞噬过程中活性氧产生的影响。不同环境条件处理暂养7d的仿刺参,于不同时间点抽取体腔液,然后用鲁米诺化学发光法检测仿刺参体腔细胞体外吞噬酵母细胞时活性氧的产生。试验结果表明,与对照组相比(17℃),6℃和26℃水温中的仿刺参分别从第1d和第15d极大地增加了活性氧的产生。盐度25和盐度35两组仿刺参体腔细胞比对照组吞噬过程产生更多的活性氧,而盐度16和40两组第1d时活性氧的产生亦显著增强。较低pH同样极大增强了吞噬作用中活性氧的产生。研究结果表明,温度、盐度和pH均可影响仿刺参体腔细胞吞噬过程中活性氧的产生。该试验为进一步研究仿刺参在适应不同环境时的生理生化过程及无脊椎动物免疫机制奠定了基础。
- 李明张思张建清张峰翟钰卢亚楠
- 关键词：温度盐度活性氧仿刺参
