公共文化服务平台

一种特异性结合CD15的全人源抗体及应用: 本发明提供了一种全人源抗CD15抗体，其重链可变区具有SEQID NO：2所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO：4所述的氨基酸序列，本抗体分子与细胞粘附分子(CD15抗原)特异性地结合，其亲和力大于10<S...; 何明跃王明蓉高强杜天飞张勇侠代云见何勇智丛聪; 文献传递

Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表达及其免疫血清的制备: 2018年; 目的原核表达、纯化II型登革病毒NS1A蛋白(NS1蛋白1～180氨基酸即DENV2 NS1A),将其免疫动物制备免疫血清并鉴定。方法构建重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG低温诱导表达。表达的融合蛋白经Hitrap Talon crude柱亲和层析纯化后,免疫雌性日本长耳兔获得抗DENV2 NS1A兔抗血清,用Western blot和免疫荧光检测免疫血清对重组麻疹病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6Xhis的识别和结合特性。结果重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组融合蛋白相对分子质量为100 000,纯化后蛋白纯度在85%以上,免疫获得的抗DENV2 NS1A兔抗血清可识别重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis表达的DENV2 NS1蛋白。结论原核表达并纯化了DENV2 NS1A蛋白,建立了基于NS1蛋白的重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的Western blot和免疫荧光检测方法,为登革热疫苗研制中重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的质检奠定了基础。; 张勇侠高雅丽康庄丛聪罗心梅代云见陈宗香李立李桂华刘兰军; 关键词：登革病毒 NS1蛋白原核表达免疫荧光

一种防止幼兔逃逸的食盒: 本实用新型公开一种防止幼兔逃逸的食盒，包括食槽、投食道，食槽水平设置，投食道竖向设置，投食道与食槽的上端连通，食槽侧板与投食道侧板竖向固连为一体，食槽后板与投食道后板竖向固连为一体，投食道前板固连在食槽侧板的上端；投食道...; 刘兰军杨澜赵兆刘志鹏丛聪陶金; 文献传递

一种新的大肠埃希菌蛋白质快速合成方法: 2019年; 目的在大肠埃希菌中建立同时进行PCR克隆和重组蛋白快速表达的方法。方法通过TA载体将包含目的基因和全部蛋白表达元件的蛋白表达单位引入大肠埃希菌后,无需使用任何限制性酶,直接在大肠埃希菌中表达编码的蛋白质。结果通过小规模或大规模表达多种不同蛋白质,证实了该方法的有效性和可靠性。使用该方法获得的绿色荧光蛋白和血管内皮生长因子特异性VH的可溶性蛋白表达量分别达到30和20 mg/L。结论该法设计灵活,且易于进行多种蛋白质的平行表达,为快速筛选理想的蛋白突变体提供了新途径。; 何勇智余馨丛聪代云见王明蓉何明跃; 关键词：大肠埃希菌聚合酶链反应

一种兔用冻精稀释液和冻存兔精液的方法: 本发明提供了一种兔用冻精稀释液和冻存兔精液的方法，属于人工授精技术领域。该兔用冻精稀释液包括以下成分：三羟甲基氨基甲烷，柠檬酸，葡萄糖，蔗糖，抗生素，二甲基亚砜，蛋黄，水和pH调节剂。该冻存兔精液的方法包括以下步骤：在兔...; 杨澜刘志鹏张玲赵兆杨硕赵世虎丛聪刘兰军

应用核糖体展示技术高效筛选人源抗IgE单链抗体被引量：4: 2012年; 本研究从哮喘患者外周血分离淋巴细胞、提取总mRNA,采用RT-PCR技术分别构建重链可变区VH(variable region of heavy chain)和轻链可变区VL(variable region of light chain)cDNA库,然后通过连接肽(Gly4Ser)3和特定引物将VH和VL cDNA基因组装成人源单链抗体(scFv)核糖体展示模板基因库。应用兔网织红细胞核糖体展示技术,单引物原位反转录技术,经3轮展示富集并回收针对人源IgE蛋白(免疫球蛋白E)的目的单链抗体基因;回收的抗体基因经双酶切后与pET22b(+)载体连接,转化至E.coli Rosseta(DE3)宿主细胞,应用菌落PCR结合Dot blotting技术快速鉴定阳性克隆,抗原ELISA法进一步鉴定阳性克隆。VH和VL基因库得到正确的构建,长度分别为400和710 bp,库容为1013。核糖体展示模板构建正确,长度为1 100 bp。该基因库经过3轮针对IgE蛋白的核糖体展示,目的基因得到了有效富集和回收。经过高效克隆、表达和鉴定,确定1株针对人IgE蛋白显示最强亲和力的阳性克隆菌pET-IgE-6。经测序和序列分析证实该单链抗体为人源抗体,序列未见国内外报道。结果表明,采用患者外周血构建人源抗体基因库,结合核糖体展示技术,可以成功获得高亲和力的人源单链抗体分子。该技术路线为快速获得具有药用价值的人源抗体提供了参考。; 张勇侠王保成余馨代云见何勇智丛聪夏永王明蓉; 关键词：免疫球蛋白E 人源抗体核糖体展示技术过敏性疾病

腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1反向遗传系统的建立: 2019年; 目的建立腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1(JL1)反向遗传系统,获得单一成分的拯救病毒JL1R。方法将JL1全长cDNA基因序列分为7个片段(F1~F7),在F7片段的3′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,HdvRZ),分段合成后分别插入载体pT7-MCS3中,根据每段重叠区域的酶切位点拼接,构建全长表达质粒pT7-MCS3-MUVJL1(HdvRz);同时构建表达腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、聚合酶蛋白(L)的3个辅助质粒;将全长表达质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒pCDIBP-T7RNAP共同电转染Vero细胞。对获得的病毒JL1R进行测序、病毒滴度及中和抗体测定。结果拯救病毒JL1R基因组SH及HN片段与疫苗株JL1对应片段的理论序列一致;JL1R经Vero细胞连续传代培养2~10代病毒滴度均在6 lgCCID50/mL以上;JL1R与疫苗株S79诱发抗MuV抗体滴度接近。结论成功构建了MuV疫苗株JL1的反向遗传操作系统,获得的单一成分拯救病毒JL1R可作为腮腺炎疫苗株的备选株,解决了S79疫苗生产中毒种及疫苗株的成分、纯度和批间一致性等问题,进一步提高了国内腮腺炎疫苗的免疫效果。; 高雅丽张勇侠陈宗香康庄罗心梅丛聪李立刘兰军; 关键词：腮腺炎病毒疫苗株反向遗传系统

重组sTNFα-R1蛋白同义密码突变库的构建及筛选: 2013年; 目的:以重组肿瘤坏死因子-α受体1(sTNFα-R1)的基因序列为模板,构建同义密码突变库,在不改变原氨基酸序列的同时筛选获得目标蛋白产量提高的突变菌株。方法:分段设计并合成同义密码突变兼并引物,通过优化PCR反应条件,构建目的基因的完整同义密码突变库。突变库经双酶切插入到pET11(b)载体上,并电转至E.coli BL21(DE3)细胞中。阳性克隆经PCR鉴定后,细胞表达目标蛋白,应用SDS-PAGE等方法分析目标蛋白产量。结果:目的基因同义突变库的PCR扩增产物可见330bp的特征条带,突变库测序结果显示整个基因序列的第三位碱基发生预期的同义突变;完成了445株克隆筛选,针对其中产量高于对照组的45株克隆进行测序,获得42株基因序列不同但氨基酸序列未发生变化的克隆菌株,其同义密码突变阳性率高达93%;选择其中2株初筛产量较高的菌株进行放大验证,结果显示7#突变株的包涵体收率及目标蛋白相对百分含量明显高于对照株,其每升发酵液的目标蛋白总产量比对照株提高2.44倍,405#突变株比对照株提高1.44倍。结论:通过优化PCR反应条件成功构建了目标基因全序列的同义密码突变库,采用同义密码突变库技术途径,在不改变原氨基酸序列的前提下可以快速优化蛋白表达产量。; 何静丛聪代云见李坤王明蓉

一种特异性结合CD4的全人源抗体及应用: 本发明提供了一种全人源抗CD4抗体，其重链可变区具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO：4所述的氨基酸序列，本抗体分子与辅助T细胞膜上的表面抗原分化簇4(CD4抗原)特异性地结合，其...; 何明跃王明蓉高强杜天飞张勇侠代云见何勇智丛聪; 文献传递

VEGF抗体及其制备方法和用途: 本发明公开了VEGF单域抗体及其融合抗体和多聚体抗体。本发明还公开了编码前述抗体的核苷酸序列，包含该核苷酸序列的表达载体、重组菌以及前述抗体的制备方法和用途。本发明VEGF抗体分子量小，可塑性高，具有广泛的应用前景。; 何勇智丛聪代云见张勇侠李坤李春阳王保成秦娇荣赵兆王明蓉何明跃; 文献传递

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

丛聪

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

丛聪

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈