张志杰
- 作品数：10 被引量：29H指数：4
- 供职机构：广州医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省中医药管理局基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 干扰TGFβRⅠ增加乳腺癌细胞MDA-MB-231对化疗药物的敏感性被引量：1
- 2014年
- 转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)与其受体(transforming growth factorβreceptor,TGFβR)结合激活下游信号通路,在肿瘤的发生发展和转移中具有重要意义,且已有迹象表明该通路可能介导肿瘤的化疗耐受.本研究构建了干扰转化生长因子βⅠ型受体(transforming growth factor receptor typeⅠ,TGFβRⅠ)的重组质粒pRNAT-U6.1/TGFβRⅠ-sh1,发现其可在mRNA和蛋白质水平均显著下调TGFβRⅠ的表达,P<0.01.后将该干扰质粒转染乳腺癌细胞MCF-7/5Fu、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-453,建立了稳定的乳腺癌TGFβRⅠ干扰模型;MTS法检测上述4种细胞模型对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)和紫杉醇(taxol,TAX)的敏感性.结果显示,MCF-7、MCF-7/5Fu和MDA-MB-453细胞在干扰TGFβRⅠ之后对5-FU和TAX敏感性并未发生改变;但是间质表型的MDA-MB-231细胞在干扰TGFβRⅠ之后对5-FU和TAX的敏感性显著增加.由此可见,干扰TGFβRⅠ的表达阻断TGFβ信号通路,进而显著增加间质型乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性,这为临床乳腺癌治疗提供了一定的理论依据.
- 张子娟郑国沛张志杰贺智敏
- 关键词：短发夹RNA乳腺癌细胞耐药
- 人CDK14基因表达荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2017年
- 目的建立一种人细胞周期蛋白依赖性激酶14(CDK14)基因表达荧光定量PCR检测方法。方法利用Trizol法提取不同人肺癌细胞株中总RNA,以β-Actin和CDK14分别为内参和目的基因,分别设计特异性扩增引物,建立人CDK14基因表达荧光定量PCR检测系统并评估其检测性能。同时将其应用于不同细胞系siRNA干扰前后的CDK14基因相对表达水平检测。结果经电泳分析、熔解曲线、产物测序确认人CDK14基因表达荧光定量PCR检测系统已建立,其特异性良好,重复性佳(CV=7.13%),线性范围较宽(CDK14与β-Actin分别在Ct值范围22.47~32.96与15.14~27,55间具有良好的相关性,r^2=0.9844。)。利用该体系检测发现:在HCC827 D5和H1650细胞中CDK14基因高表达;在1~3号干扰片段中,1号片段为有效片段。结论人CDK14基因表达荧光定量PCR检测方法已成功建立。
- 罗凯黎谢梦丹石兴源贾晓婷王倩邓敏仇秦威张志杰贺智敏
- 关键词：基因实时荧光定量PCR
- CXCR4在乳腺癌组织芯片中的表达及其临床意义
- 2015年
- 目的检测趋化因子受体4(CXC chemokinereceptortype4,CXCR4)在各种乳腺癌组织及相应正常乳腺组织中的表达并分析其临床病理意义。方法组织芯片中标本收集于2010年5月—2014年9月,应用免疫组化法检测组织芯片中204例乳腺癌组织和36例正常乳腺组织CXCR4蛋白的表达,以棕色颗粒为阳性标准计算染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比进行半定量处理。结果 CXCR4蛋白主要表达于细胞膜和细胞浆,在相应正常乳腺组织、小叶原位癌、导管内原位癌和浸润性导管癌中的阳性表达率依次升高,分别为8.3%(3/36)、25.0%(1/4)、10.0%(5/50)、72.0%(108/150),4组间差异有统计学意义(P<0.001);在I、II和III级以上分级的乳腺癌组织中,CXCR4蛋白的阳性表达率分别为18.2%(2/11)、80.4%(78/97)、69.8%(30/43),3组间差异有统计学意义(P<0.001);CXCR4蛋白在有转移的肿瘤组织和无转移的乳腺癌组织中的阳性率分别为88.4%(61/69)和11.1%(15/135)。结论 CXCR4在部分乳腺癌组织中高表达,且与乳腺癌组织类型及乳腺癌组织侵袭转移能力密切相关。
- 张杨王成昆彭波朱欢张志杰
- 关键词：CXCR4乳腺癌组织芯片免疫组织化学法
- miR-181b/c靶向调控SRGN抑制乳腺癌细胞侵袭转移被引量：4
- 2014年
- 目的 研究糖蛋白丝甘蛋白聚糖（SRGN）的表达与乳腺癌细胞侵袭转移的关系,及小分子RNA在SRGN表达调控中的作用.方法 应用实时定量PCR和Western blot检测SRGN在侵袭转移增强的乳腺癌MCF-7/5-Fu细胞与亲本转移能力弱的MCF-7细胞中的表达差异,利用siRNA干扰技术结合体外Transwell实验检测SRGN对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响.运用生物信息学软件预测可靶向SRGN的miRNA,并对接乳腺癌细胞MCF-7 vs MCF-7/5-Fu的miRNA差异表达芯片数据,同时利用miRNA定量PCR确定候选miRNA的表达差异.通过转染miRNA模拟物结合western blot实验验证候选miR-NA对SRGN靶向调节作用,最后通过Transwell实验检测候选miRNA对肿瘤细胞侵袭转移的影响.结果 SRGN在侵袭转移增强的MCF-7/5-Fu细胞中表达明显增高,干扰SRGN可抑制肿瘤细胞的侵袭转移.此外,miR181b/c在MCF-7/5-Fu细胞中表达明显降低与SRGN表达呈负相关,并且miR181 b/c可靶向抑制SRGN表达,进而抑制肿瘤细胞的侵袭转移.结论 miR181 b/c可靶向抑制SRGN表达,抑制乳腺癌细胞的侵袭转移.
- 张志杰邓印根尹江卢敏莹贺智敏
- 关键词：微RNAS蛋白聚糖类肿瘤浸润
- SRGN诱导乳腺癌细胞EMT改变促进肿瘤侵袭转移被引量：4
- 2017年
- 目的研究糖蛋白丝甘蛋白聚糖（SRGN）促进乳腺癌细胞侵袭转移的机制及SRGN表达调控的可能机制。方法运用实时定量PCR和信息检索检测SRGN在淋巴结转移与未转移乳腺癌临床标本中的表达差异；利用慢病毒shRNA干扰及过表达技术，建立稳定降低和过表达SRGN的乳腺癌细胞系MDA-MB-231shRNA及MCF-7-SRGN；体外Transwell实验检测SRGN对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响；Western blot实验检测上皮-间质转化（EMT）相关标志物的改变；最后通过West—ern blot实验检测SRGN可能的表达调控机制。结果SRGN在淋巴结转移的乳腺癌临床标本中表达明显增高，干扰SRGN可抑制肿瘤细胞的侵袭转移，并且SRGN可促进乳腺癌细胞发生EMT改变，TGFβ1可促进SRGN的转录表达。结论SRGN可诱导乳腺癌细胞发生EMT改变，进而促进乳腺癌细胞的侵袭转移。
- 张志杰仇秦威叶嘉慧邱霓贺智敏
- 关键词：蛋白聚糖类生物转化肿瘤侵润
- 肝细胞生长因子诱导人肝癌细胞上皮间质转化被引量：6
- 2015年
- 上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与肿瘤侵袭转移密切相关.虽然肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)已被证实为肿瘤EMT的主要诱导剂,但是HGF诱导肿瘤EMT发生的分子机制尚不完全清楚.本研究旨在探讨Snail在HGF诱导肝癌细胞上皮间质转化中的作用.用HGF处理肝癌Hep G2和Hep3B细胞,显微镜观察细胞形态变化,划痕试验及Transwell试验检测细胞迁移能力,Western印迹检测Met,AKT的磷酸化及蛋白质表达的变化,Western印迹与real-time RT-PCR检测上皮细胞表面标志E-Cadherin和间质细胞表面标志NCadherin、Fibronectin的表达变化,以及EMT相关转录因子的表达变化.经HGF处理的Hep G2、Hep3B细胞,Met和AKT的磷酸化水平显著增强;相差倒置显微镜下观察细胞形态向间质型细胞形态转化;细胞划痕和Transwell试验检测细胞的迁移能力较对照组显著增强;Real-time RT-PCR和Western印迹实验显示HGF的诱导能上调间质标记蛋白的表达及下调上皮型标志蛋白的表达.进一步发现,HGF能上调转录因子Snail的表达,干扰Snail能逆转HGF对Hep G2和Hep 3B细胞EMT发生的诱导作用.由此可见,HGF可能通过诱导Snail的表达促进肝癌细胞EMT的发生.这为阐明肝癌细胞侵袭转移机制,以及肝癌的防治提供新线索.
- 宋莹刘浩尹江张志杰贺智敏
- 关键词：肝癌肝细胞生长因子SNAIL
- 人非小细胞肺癌NCI—H1975细胞的异质性研究
- 2016年
- 目的探讨人非小细胞肺癌NCI-H1975细胞的异质性及其与药物反应性的关系。方法利用有限稀释法获得NCI-H1975细胞单克隆化子细胞，并对母细胞和部分单克隆化子细胞行表型、药物反应性和表皮生长因子受体（EGFR）基因突变检测，分析NCI-H1975细胞的克隆异质性特征及其与药物反应性的关系。结果获得13个单克隆化的NCI-H1975子细胞，与母细胞相比，各子细胞在细胞增殖能力、吉非替尼敏感性和顺铂敏感性方面差异有统计学意义（P〈0．05），在EGFR基因突变状态方面未见差异。结论NCI-H1975细胞存在细胞增殖能力等表型指标和药物反应性指标的异质性，并与药物治疗的反应性和耐药相关。
- 罗凯王倩仇秦威彭聪邓应根黎谢梦丹贾小婷张志杰郑国培谷依学贺智敏
- 关键词：遗传异质性生物学标记药理学
- 微阵列芯片Meta分析序列相似家族72成员A mRNA水平与乳腺癌预后关系被引量：2
- 2017年
- 目的探讨序列相似家族72成员A(FAM72A)mRNA表达水平与乳腺癌患者预后的关系。方法在NCBI的GEO数据库中检索乳腺癌基因表达谱的数据集,对数据进行预处理后,对数据集进行标准化合并。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用单因素Cox模型分析乳腺癌患者以及不同分型乳腺癌患者的总体无事件生存期与FAM72A mRNA表达的相关性。结果总共纳入10个微阵列数据集,包含1 720例乳腺癌患者癌组织样本。在所有乳腺癌患者中,FAM72A mRNA高表达者无事件生存期低于FAM72A mRNA低表达者(P<0.05);在雌激素受体阳性乳腺癌患者中,FAM72A mRNA高表达者无事件生存期低于FAM72A mRNA低表达者(P<0.05);在乳腺管腔B型患者中,FAM72A mRNA高表达者无事件生存期低于FAM72A mRNA低表达者(P<0.05)。结论 FAM72可以作为预测乳腺管腔B型乳腺癌患者预后的潜在标志物。
- 仇秦威余丽华罗凯张志杰黎谢梦丹贺智敏
- 关键词：乳腺癌微阵列
- 鼠源乳腺癌多药耐药细胞株的建立及耐药机制的初步研究被引量：1
- 2016年
- 目的构建鼠源性乳腺癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞株,为研究乳腺癌耐药与体内免疫微环境的关系提供细胞模型。方法通过体外以浓度递增的方法诱导小鼠乳腺癌4T1细胞对5-Fu产生耐药,MTS法确定其耐药性,平板克隆检测其增殖活性,实时定量和半定量PCR检测其中5-Fu代谢相关酶TS、MTHFR、TK、OPRT、DPD及药泵蛋白MDR1、MRP1的表达,通过流式细胞术检测其周期及CD44+CD24-干细胞亚群的比例。结果耐药细胞4T1/5-Fu与4T1细胞相比,4T1/5-Fu细胞对5-Fu、吉西他滨和顺铂耐药的耐药指数(RI)明显升高;5-Fu合成代谢相关酶TK、OPRT表达明显降低(P<0.05),代谢抑制性相关酶TS、MTHFR明显升高(P<0.05),药泵蛋白MDR1、MRP1表达明显升高(P<0.05);流式细胞术结果显示,CD44表达明显升高,肿瘤干细胞群增多。结论成功构建小鼠乳腺癌多药耐药细胞株,耐药发生可能与5-Fu代谢酶类、药泵蛋白表达以及干细胞比例改变相关。
- 邓印根张志杰卢敏莹贾小婷彭聪贺智敏
- 关键词：肿瘤耐药5-氟尿嘧啶肿瘤干细胞
- 非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变的异质性被引量：9
- 2017年
- 目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的异质性。方法:收集本院165例NSCLC患者有成对肺癌石蜡包埋组织标本,采用ARMS-PCR技术进行EGFR突变分析,并统计EGFR突变异质性情况。结果:165例成对的NSCLC标本中,女性患者的EGFR基因突变异质性率显著高于男性,差异有统计学意义(P<0.05);年龄、吸烟情况和异质性组别的异质性率均无差异(P>0.05);病例的总异质性率为20.0%(33/165),多发肺部结节患者的肿瘤异质性发生率最高(26.8%,19/71);EGFR突变异质性病例以腺癌居多,69.7%的病例出现一个部位样本为EGFR突变阳性,另一部位为EGFR突变野生型的现象。结论:NSCLC患者中存在EGFR基因突变异质性,多发性肺结节患者的异质性比例明显较高。
- 李志阳张志杰谭小军徐岗
- 关键词：表皮生长因子受体基因突变
