陈平
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 人CXCL9重组腺病毒的制备及其表达产物生物活性检测
- 2012年
- 目的构建携带人CXCL9基因的重组腺病毒,分析其表达产物的生物学活性。方法采用PCR法从pBLAST2-hCXCL9质粒上扩增出hCXCL9基因,再将其克隆至pENTR11载体上,构建pENTR11-hCXCL9质粒,通过同源重组将hCXCL9基因片段重组至pAd/CMV/V5-DEST上,最后在293A细胞内进行包装、扩增后得到携带hCX-CL9基因的重组腺病毒。用包装好的病毒感染Hela细胞,分析目的基因的表达及其生物学活性。结果成功地将hCXCL9基因片段克隆至重组腺病毒载体上,并经293A细胞包装出病毒颗粒。该病毒感染Hela细胞后,可在培养上清液中检测到显著表达的hCXCL9。通过趋化活性分析发现,该表达产物对T淋巴细胞具有明显的趋化活性。结论成功构建了hCXCL9重组腺病毒,并可在体外高效表达具有生物活性的目的产物。
- 陈平罗珊钟静
- 关键词：重组腺病毒趋化因子
- 柯萨奇病毒A组16型毒株的分离及其生物学特性初步分析
- 2014年
- 目的 对柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）毒株进行分离、鉴定,并分析其生物学特性,为CA16疫苗候选毒株的筛选奠定基础.方法 从手足口病患者的咽拭子或疱疹液样本中分离CA16毒株,经噬斑纯化后,用逆转录-聚合酶链反应进行病毒鉴定.将病毒连续传代后,对其VP1基因进行序列测定,分析VP1基因和氨基酸序列的同源性和遗传稳定性.结果 通过Vero细胞适应传代和噬斑纯化,获得遗传稳定的CA16毒株,感染Vero细胞后引起典型的细胞病变.病毒分离株经CA16特异性引物扩增后可见208 bp的特异性条带,经VP1基因测序进一步确定这些分离株为CA16.同源性和系统进化树分析表明,各毒株与shzh04-J31株的同源性最高,为92.4％～96.1％,均属于C基因亚型.病毒分离株在Vero细胞上连续传12代后,仅1株病毒的1个氨基酸发生改变.结论 成功分离到CA16毒株,其生物学特性稳定,可用于CA 16疫苗的研发.
- 曾献武陈平李玫颖何婷刘杰孙艳范凤鸣何敏
- 关键词：肠道病毒属VP1基因氨基酸序列手足口病
- 肠道病毒71型细胞感染灭活验证方法的建立被引量：3
- 2013年
- 目的建立肠道病毒71型细胞感染灭活验证的方法,为肠道病毒71型灭活疫苗的安全性提供技术保障。方法将不同浓度的肠道病毒71型接种于五种不同细胞选择敏感性好的细胞,然后将制备的8批肠道病毒71型灭活样品接种在筛选到的敏感细胞上,35℃,5%CO2连续培养21 d,观察细胞病变情况。结果 Vero细胞感染法最低能检测到1CCID50/ml的肠道病毒71型,该方法检测8批肠道病毒71型灭活样品均为阴性。结论本研究建立的肠道病毒71型细胞感染灭活验证方法具有良好的敏感性和重复性,可用于肠道病毒71型疫苗的灭活验证。
- 刘杰潘海龙孙艳牟建超陈平刘辉何敏曾献武葛永红杨莉
- 关键词：肠道病毒71型
- 比浊法检测疫苗中TritonX-100残留量的方法学验证被引量：4
- 2012年
- 目的建立检测疫苗中Triton X-100残留量的比浊法,并进行方法学验证。方法将TritonX-100与5%苯酚溶液充分混匀后,室温静置15 min,采用比浊法测定340 nm处吸光度值,与经同样处理的标准品绘制的标准曲线比较,计算样品中残留TritonX-100的浓度。由4名试验人员连续3 d测定12次,评价不同试验人员建立标准曲线的成功率;由同一试验人员在同一试验内和不同时间内及由4名试验人员在不同时间内分别测定低（15μg/ml）、中（25μg/ml）、高（45μg/ml）3个不同浓度的TritonX-100的浓度,验证该方法的精密度和准确度;并检测BSA对试验准确度和精密度的影响。结果 4名试验人员连续3 d的12次检测结果均满足标准曲线的成立条件,成功率为100%;同一试验人员在同一试验内对低、中、高3个不同浓度的TritonX-100溶液重复测定10次,变异系数分别为分别为5.33%、1.19%和1.39%,回收率分别为99.33%、105.60%和110.67%;同一试验人员在不同时间内连续测定3次,变异系数分别为4.94%、7.49%和3.46%,回收率分别为87.75%、93.85%和95.51%,4名试验人员在不同时间内连续测定3次,变异系数在1.73%~12.17%之间,回收率在89.55%~99.26%之间,灵敏度为10μg/ml,具有良好的精密度和准确度;BSA对试验准确度和精密度无显著影响。结论该方法快捷、简便,可灵敏、准确地定量检测TritonX-100的含量,可用于疫苗样品中残留TritonX-100的质量控制。
- 陈平罗珊钟静刘杰孙艳何敏范凤鸣曾献武
- 关键词：比浊法疫苗聚乙二醇辛基苯基醚残留量
- CA16滴度微量检测方法的建立及其验证被引量：1
- 2014年
- 目的建立用Vero细胞检测柯萨奇病毒A组16型（CAl6）滴度的方法，并对其适用性进行初步验证。方法通过对细胞种类的选择、细胞接种浓度和细胞病变判定时间的优化，建立测定CAl6滴度的半数细胞感染剂量法（CCID50法），并对其进行初步验证。结果通过对病毒感染后细胞病变情况的观察，确定了以Vero细胞作为CAl6病毒滴度检定用细胞。Vero细胞的最佳接种浓度和结果判定时间分别为5×10^4-1×10^5细胞／mL（即96孔板内每孔加入的最终细胞量为5×10^3-1×10^4细胞）和7d。由4组人员对6批CAl6病毒液进行重复检测，实验结果表明不同实验人员测定结果的变异系数（CV）在1．739％-4．974％之间，说明该方法测定结果重复性好，准确度高。结论该法简便、稳定，可以灵敏、准确地检测CA16病毒的滴度，可用于相关疫苗生产过程中的质量控制。
- 曾献武陈平李玫颖孙艳范凤鸣何敏刘杰
- 关键词：柯萨奇病毒A组16型病毒滴度
