王绮雯 作品数:16 被引量:44 H指数:5 供职机构: 广州医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 广东省医学科学技术研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 更多>>
维生素E琥珀酸酯联合5-氟尿嘧啶和5′-脱氧氟脲苷促进人结肠癌细胞凋亡 被引量:5 2018年 目的探讨维生素E琥珀酸酯(VES)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)和5′-脱氧氟脲苷(5′-DFUR)对人结肠癌细胞株LS174T凋亡的影响。方法 LS174T细胞常规培养,分6组(0,20μmol/L VES,1μmol/L 5-FU,2μmol/L 5′-DFUR,20μmol/L VES+1μmol/L 5-FU,20μmol/L VES+2μmol/L 5′-DFUR),处理24 h,倒置显微镜观察细胞形态,MTS法检测细胞的增殖情况;Western blot法检测细胞bid、bax、bcl-2蛋白的表达情况;流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况。结果 VES分别与5-FU、5′-DFUR联合能够抑制人结肠癌细胞的增殖,增强bid、bax蛋白的表达,降低bcl-2蛋白的表达,促进细胞发生凋亡。结论 VES分别与5-FU、5′-DFUR联合作用时能抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其中VES+5′-DFUR联合作用效果最为显著。这可能与细胞中促凋亡蛋白bid、bax表达的增加、抗凋亡蛋白bcl-2表达的降低有关。 王绮雯 张继民 李爱群 邹湘才关键词:维生素E琥珀酸酯 5-氟尿嘧啶 凋亡 转移灶不可切除结直肠癌切除原发灶对预后的影响 被引量:3 2018年 目的分析转移灶不可切除的结直肠癌手术切除原发灶对总生存的影响,探讨转移灶不可切除的结直肠癌患者手术切除原发灶的价值。方法回顾性分析2008年1月至2015年12月本院收治的96例转移灶不可切除的结直肠癌患者的临床和随访资料。KaplanMeier生存曲线分析手术组(初始切除原发灶+术后规范化疗)与化疗组(单纯规范化疗)的生存时间差异,COX多因素回归模型分析影响两组预后的独立危险因素。结果手术组总生存(OverallSurvival,OS)率分别是1年71.9%、3年29%和5年24.8%,化疗组OS分别是1年40.6%、3年18.8%、5年0%,中位生存时间分别为手术组18个月和化疗组4个月。KaplanMeier生存曲线显示手术组两组患者0s有明显差异(P=0.02)。COX多因素回归模型分析显示原发灶切除(OR=0.478;95%CI=0.284—0.804;P=0.005)、原发灶位于直肠(OR=0.427;95%CI=0.226—0.810;P=0.009)是影响转移灶不可切除结直肠癌患者0s的独立预后因素。结论初始切除原发灶+术后规范化疗比单纯规范化疗预后好,转移灶不可切除的结直肠癌患者应初始行原发灶切除。对于转移灶不可切除的结直肠癌患者,原发灶位于直肠比原发灶位于右半结肠预后好。 郎产浩 魏宜胜 梁志华 王绮雯 洪楚原关键词:结直肠癌 不可切除 预后因素 5’-脱氧氟尿苷联合干扰素对转染TP基因结肠癌细胞株裸鼠实验模型的影响 被引量:1 2017年 背景与目的:人结直肠癌细胞基本无胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)表达。本实验主要探讨人结肠癌细胞株LS174T转染TP基因后,在裸鼠肿瘤组织中对抗癌药物5’-脱氧氟尿苷(5’-deoxy-5-fluorouridine,5’-DFUR)、氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)和干扰素-α2a(interferon-α2a,INF-α2a)干预效果的影响。方法:以慢病毒为载体转染TP基因至结肠癌细胞株LS174T,得到稳定传代的高TP表达株。将96只BALB/c裸鼠分成2组,分别应用野生型及转染TP基因后的LS174T细胞株接种裸鼠背部皮下,制成结肠癌TP低、高表达模型。每组再随机分为6组,分别应用0.9%Na Cl溶液、INF-α2a、5-FU、5-FU+INF-α2a、5’-DFUR和5’-DFUR+INF-α2a干预5 d,2周后处死裸鼠,分离肿瘤称重后,分别应用鼠抗人CD34、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和抗PD-ECGF单克隆抗体进行免疫组织化学染色。判定是否有TP表达及对微血管进行计数。结果:在野生型LS174T裸鼠荷瘤模型中,使用抗肿瘤药物的3~6组肿瘤质量与对照组相比均明显降低,抑癌率分别为48%、27%、48%和57%,差异有统计学意义(P<0.05)。其中5’-DFUR组(48%)与5’-DFUR+INF-α2a组(57%)、5-FU+INF-α2a组与5’-DFUR+INF-α2a组(27%与57%)相比,抑癌率差异有统计学意义(P<0.05)。在LS174T-TP细胞株裸鼠模型中,5’-DFUR组和5’-DFUR+INF-α2a组抑癌率分别为27%和48%,而使用5-FU的两组未显示出良好的抗肿瘤效果(7%和3%)。免疫组织化学染色显示,野生型LS174T接种形成的肿瘤组织中TP表达阴性,微血管数目较少,而转染TP基因后,肿瘤组织中TP表达明显上升,微血管密度明显增多(P<0.05)。结论:结肠癌细胞株LS174T转染TP基因后,在裸鼠实验肿瘤模型中,TP表达明显增加,使细胞内激活抗癌药物5’-DFUR的抗癌作用明显增强,联合应用INF-α2a能进一步增强这种抗癌作用。而转染TP基因或联合应用INF-α2a对常规抗癌药物5-FU的抗癌效 方耿 王绮雯 张继民关键词:胸苷磷酸化酶 干扰素-Α2A 熊果酸通过促进自噬保护H_(2)O_(2)诱导的H9C2大鼠心肌细胞氧化应激损伤 被引量:5 2021年 目的研究熊果酸(Ursoic acid,UA)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的H9C2大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及对细胞自噬的调节作用。方法以200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)诱导24 h建立H9C2心肌细胞氧化应激损伤模型。将H9C2细胞随机分为6组:正常组、溶剂组、模型组及熊果酸高、中、低剂量(10、5、2.5μmol·L^(-1))组。采用CCK-8法检测细胞存活率;EdU法检测细胞增殖能力;TBA法检测丙二醛(MDA)脂质氧化水平;WST-8法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western Blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及p62的表达水平。结果与正常组比较,模型组细胞的存活率及EdU阳性细胞(红色荧光)百分比均明显降低(P<0.05);细胞内MDA脂质氧化水平明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05);LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值明显上调(P<0.05),p62蛋白表达明显下调(P<0.05)。与模型组比较,熊果酸高、中、低剂量均能明显提高H9C2的细胞存活率及EdU阳性细胞百分比(P<0.05);降低MDA水平(P<0.05),提高SOD活性(P<0.05);上调LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值(P<0.05),下调p62蛋白表达水平(P<0.05)。结论熊果酸对H_(2)O_(2)诱导的H9C2大鼠心肌细胞氧化应激损伤具有明显保护作用,可能与其促进细胞自噬有关。 王绮雯 陈志健 张旺发 王浩 李爱群关键词:熊果酸 H9C2细胞 P62 慢病毒转染TP基因到结肠癌细胞稳定性研究 目的 慢病毒转染TP基因到结肠癌细胞HT29和LS174T,得到能稳定传代的带有TP基因HT29-TP和LS174T-TP细胞.方法 通过包含TP基因的慢病毒转染结肠癌细胞HT29和LS174T,免疫组织化学染色法检测转... 叶钿均 刘奇 王绮雯基于基因转染法的胸苷磷酸化酶高表达结肠癌细胞株的建立 被引量:3 2015年 目的构建表达高度胸苷磷酸化酶(TP)活性并可以稳定传代的结肠癌细胞株。方法合成包含TP c DNA全长的真核细胞表达载体,用慢病毒包装后转染人结肠癌细胞株SW480、LOVO、HT29和LS174T,流式细胞仪检测转染效率,实时荧光定量RT-PCR方法检测TP的m RNA表达,蛋白印迹法(Western blot)检测TP蛋白表达。结果转染TP c DNA后,SW480、LOVO、HT29与LS174T在传代5代后转染效率仍稳定在95%左右。与未转染TP基因的亲代细胞相比,SW480-TP、LOVO-TP、HT29-TP与LS174T-TP的TP m RNA的表达分别提高了(694.56±171.53)、(282.46±86.85)、(8.45±0.15)和(2 615.02±253.97)倍,差异有统计学意义(P<0.05);并且TP蛋白的表达水平也显著提高。结论慢病毒载体能够高效地将TP c DNA转染至人结肠癌细胞SW480、LOVO、HT29和LS174T中,所得克隆能够稳定传代,并能显著提高4株结肠癌细胞TP的m RNA和蛋白表达水平。 王绮雯 刘剑 叶钿均 张继民关键词:胸苷磷酸化酶 基因转染 慢病毒 结肠癌细胞株 结直肠癌组织中成纤维细胞激活蛋白的表达及临床意义 被引量:3 2012年 目的探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)在结直肠癌组织中的表达及其与各病理学指标之间的关系。方法应用免疫组织化学染色法检测55例结直肠癌组织和50例正常结直肠组织中FAP的表达,观察阳性细胞在不同组织中的分布数量,结合肿瘤分期、有无淋巴结转移及不同浸润深度等病理学指标,评价FAP表达与结直肠癌病理特征的相关性。结果正常结直肠组织中几乎无FAP表达,少数癌细胞有微弱表达。FAP阳性细胞主要为结直肠癌间质组织中的肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)。TNMⅢ~Ⅳ期标本中FAP阳性细胞为(40.1±15.9)个,多于Ⅰ-Ⅱ期的(18.3±7.7)个(P〈0.01);且阳性细胞数量与分期程度相关(r=0.544,P〈0.01)。淋巴结转移组中阳性细胞为(44.4±13.3)个,多于无淋巴结转移的(18.5±8.1)个(P〈0.01);且阳性细胞数量与有无淋巴结转移相关(r=0.793,P〈0.01)。不同浸润深度T2、T1和T4组标本中FAP阳性细胞数分别为(25.2±8.9)、(32.4±19.3)和(29.2±16.5)个(P〉0.05);阳性细胞数量与浸润深度无关(r=0.003,P〉0.05)。结论FAP在正常结直肠组织中无表达.而主要表达于结直肠癌组织中的CAFs中。FAP阳性细胞与结直肠癌的TNM分期及淋巴结转移相关。 崔博 王绮雯 方瑞 杜军 张继民关键词:结直肠肿瘤 成纤维细胞激活蛋白 肿瘤相关成纤维细胞 转染胸苷磷酸化酶基因对5'-脱氧氟脲苷抗结肠癌细胞株活性的影响 被引量:4 2013年 目的 探讨人结肠癌细胞系SW480和LOVO细胞株转染胸苷磷酸化酶(TP)基因后转化5′-脱氧氟脲苷(5′-DFUR)为氟尿嘧啶(5-FU)能力的变化及5′-DFUR抗癌细胞株活性的变化.方法 构建包含TP cDNA的真核表达载体,用慢病毒包装后转染结肠癌细胞株SW480和LOVO.转染5代后以免疫荧光法和流式细胞技术检测转染效率;RT-PCR和Western blot法分别检测2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达.然后以高效液相色谱法(HPLC)检测2株细胞转染前后转化5′-DFUR为5-FU的量;MTT法检测5′-DFUR对2株细胞转染前后半数抑制浓度(IC50).结果 转染TP基因后SW480-TP与LOVO-TP 5代细胞转染效率稳定在95%左右.2株转染细胞的TP mRNA表达分别比野生型细胞增加(695±172)倍(t=-7.00,P=0.002)和(282±87)倍(t=-5.61,P=0.030),Western blot显示TP蛋白表达也明显增强.转染后的SW480-TP与LOVO-TP在培养基中分别使5′-DFUR转化为5-FU的量增加(t=19.406 ~66.921,P<0.01).5′-DFUR对SW480的IC50由(1641±53) μmol/L降至(587±17) μmol/L(t=-32.59,P<0.01);对LOVO的IC50由(1607±57) μmol/L降至(1088±89) μmol/L(t=-8.52,P<0.01).结论 慢病毒载体能够高效地将TP cDNA转染至人结肠癌细胞SW480和LOVO并稳定传代,转染后2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达明显增高,使5′-DFUR转化为5-FU的量增加,对结肠癌细胞株SW480和LOVO的抑制作用增强. 刘剑 张继民 高庆 王绮雯 叶钿均 刘影关键词:结肠肿瘤 胸苷磷酸化酶 氟尿嘧啶 治疗前血清癌胚抗原对Ⅰ~Ⅲ期结直肠癌患者预后的评估 2020年 目的探讨治疗前血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)评估结直肠癌患者预后的最佳截断值。方法收集221例结直肠癌手术患者的临床资料、随访结果,根据接受者操作特性曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)得出治疗前血清CEA评估患者无病生存期以及总生存期的最佳截断值。Kaplan-Meier(K-M)法进行单因素分析并计算生存率、多变量Cox比例风险模型及χ^2检验评估治疗前血清CEA与预后的关联。结果ROC曲线显示治疗前CEA与术后复发、死亡均有明显关联,结合敏感度及特异度得出预测结直肠癌患者复发、死亡的最佳截断值分别为5.44 ng/ml和2.48 ng/ml。根据多变量Cox比例风险模型结果,治疗前CEA水平是影响患者无病生存以及总生存的独立危险因子。结论治疗前CEA水平有助于预测结直肠癌患者的预后。 张啸 孔连广 王绮雯 陈志健 魏宜胜 张旺发关键词:血清癌胚抗原 结直肠癌 敏感度 特异度 预后 熊果酸对过氧化氢诱导大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用 被引量:8 2017年 目的观察熊果酸(ursolic acid,UA)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠心肌细胞氧化应激损伤模型的保护作用,并探讨其作用机制。方法冷消化法原代培养SD大鼠心肌细胞,3 d后将细胞随机分为5组:正常对照组、H2O2模型组、UA低(2.5μM)、中(5μM)、高(10μM)浓度组。UA预处理心肌细胞后,加入H2O2作用,分别检测心肌细胞存活率、LDH、CAT、SOD的变化,ROS的水平。结果 UA低、中、高浓度组对比模型组OD值明显降低,LDH含量明显下降,CAT、SOD活性升高,ROS水平下降,且P<0.05。结论 UA对大鼠心肌细胞氧化损伤具有保护作用,可减轻氧自由基对心肌细胞的氧化损伤。 李爱群 王绮雯关键词:大鼠心肌细胞 熊果酸 过氧化氢