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徐欣怡
作品数:
3
被引量:3
H指数:1
供职机构:
中国科学院微生物研究所
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发文基金:
国家重点基础研究发展计划
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相关领域:
生物学
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合作作者
陶勇
中国科学院微生物研究所
刘伟丰
中国科学院微生物研究所
李春
中国科学院微生物研究所
韩莉
中国科学院微生物研究所
张莎莎
中国科学院微生物研究所
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刘伟丰
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陶勇
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徐欣怡
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胡开蕾
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张莎莎
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异戊烯基焦磷酸异构酶基因及其应用
本发明涉及一种异戊烯基焦磷酸异构酶基因及其应用,其解决了利用工程菌合成萜类化合物效率不高的技术问题,本发明提供了一种异戊烯基焦磷酸异构酶基因、其表达的蛋白质、含有异戊烯基焦磷酸异构酶基因的原核表达载体及产萜类化合物工程菌...
李春
胡开蕾
韩莉
张莎莎
赖小勤
刘伟丰
徐欣怡
高珊
陶勇
文献传递
在大肠杆菌中利用SCLM系统进行高效率λ-Red基因敲除/整合的新策略
被引量:3
2015年
【目的】传统采用的λ-Red体系在大肠杆菌染色体上进行基因敲除/整合操作时存在操作繁琐、假阳性率高、多基因连续敲除/整合不稳定等问题。本研究基于上述问题建立一种便于基因构建、高筛选效率(100%)、具有统一技术步骤的λ-Red敲除/整合系统,为提高基因功能研究和代谢工程改造工作效率奠定基础。【方法】采用新的p SC101衍生复制起始位点消除假阳性;利用高拷贝数质粒和多克隆位点实现快速遗传构建操作;采用Cre/Lox P抗性消除位点便于多基因连续整合。选择一系列初级代谢重要基因靶点进行敲除/整合。【结果】构建了一套新型λ-Red质粒系统(SC101-Cre-Lox P-MCS,SCLM系统)。打靶片段经电转化受体细胞后在双抗性平板上筛选阳性克隆,基因敲除/整合的效率均可以达到100%。【结论】新建立的基因敲除与整合方法提高了基因重组效率,大幅度减少了相关操作的步骤,缩短了研究周期。该方法的建立为基因功能研究和构建新遗传特性的工程菌株提供了有力的工具。
王瑶
许杨
陈楠
徐欣怡
刘伟丰
陶勇
关键词:
大肠杆菌
异戊烯基焦磷酸异构酶基因及其应用
本发明涉及一种异戊烯基焦磷酸异构酶基因及其应用,其解决了利用工程菌合成萜类化合物效率不高的技术问题,本发明提供了一种异戊烯基焦磷酸异构酶基因、其表达的蛋白质、含有异戊烯基焦磷酸异构酶基因的原核表达载体及产萜类化合物工程菌...
李春
胡开蕾
韩莉
张莎莎
赖小勤
刘伟丰
徐欣怡
高珊
陶勇
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