王娇
- 作品数：11 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 膜蛋白研究中表面等离子体共振（SPR）技术的应用进展
- 2015年
- 膜蛋白是一类能与生物膜结合或整合的蛋白质，承担着细胞内外物质交换、信号转导和调控等多种重要的生物学功能，是生物膜功能的主要执行者。膜蛋白依据结构和功能的不同可分为内在膜蛋白、外在膜蛋白和膜锚定蛋白，其中内在膜蛋白占膜蛋白总数的70％～80％。膜蛋白是目前最重要的药物靶标，其靶向药物约占市场药物的50％以上。然而膜蛋白的研究还面临诸多困难：（1）膜蛋白的丰度低、疏水性强，膜蛋白的表达和鉴定难度大；（2）膜蛋白的稳定性和功能受两亲性环境影响，一般蛋白质分析手段中使用的增溶剂很容易破坏膜蛋白的结构和功能。
- 王娇胡秦李泽琳曾毅
- 关键词：表面等离子体共振膜蛋白生物学功能蛋白质分析药物靶标
- 以HIV-1病毒Vpu蛋白为靶点的抗HIV新药发现
- Vpu蛋白是人类免疫缺陷病毒cn型(HIV-1)特有的辅助调节蛋白,在病毒感染过程中通过降解CM受体、拮抗BS丁一2的抗病毒功能、在细胞表面形成离子通道等机制促进新生病毒颗粒的出芽和释放,提示Vpu蛋白可作为抗川V药物研...
- 朱莹王娇李泽琳胡秦
- 文献传递
- 中国人乳头瘤病毒30型分布及型下分类研究
- 2023年
- 目的了解国内人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)30型(HPV30)的感染情况及型下系(lineage)分类。方法收集就诊于中国人民解放军总医院妇产科,并在30d内进行新柏氏薄层液基细胞学检测女性患者宫颈脱落细胞样品,从中提取DNA并进行HPV30型特异性聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)检测;对HPV30阳性样本进行病毒基因组全长PCR扩增和序列分析。结果1600例受试者中,共获得HPV30阳性样品9例(0.56%,9/1600),其中6例HPV30基因组全长PCR扩增成功;9例HPV30毒株在型下系分类上都属于A,其中A1占66.7%(6/9)、A4占22.2%(2/9)、A5占11.1%(1/9)。结论国内女性中存在HPV30感染,型下系分类上全部HPV30毒株都属于A。
- 李颖郭一帆王慧王娇张杰琼刘宏图
- 关键词：宫颈癌
- 自噬受体蛋白p62的表达及功能研究被引量：5
- 2022年
- 目的:构建人自噬受体蛋白p62的真核表达质粒,初步探索p62在氧化应激中的功能。方法:从HeLa细胞系中扩增SQSTM1基因,插入真核表达载体nFLAG/pRK5,构建p62的重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5。采用HEK293T细胞表达带有FLAG标签的重组p62蛋白,免疫共沉淀法观察p62和核因子E2相关因子2(Nrf2)相互作用。结果:重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5经琼脂糖凝胶电泳和测序对比均与预期结果一致,Western blot实验中p62蛋白可正常表达,且大小与预期结果一致。免疫共沉淀和蛋白质谱证明p62与氧化应激转录调控蛋白Nrf2可相互作用。结论:采用真核表达系统成功表达p62蛋白,并发现其与Nrf2可相互作用,为进一步研究p62与Keap1-Nrf2通路关系提供依据。
- 王娇张莉李颖王慧王湛刘宏图
- 关键词：自噬真核表达
- 突发急性传染病数据脱敏方法
- 本发明是一种突发急性传染病数据脱敏方法，该方法包括如下步骤：101、输入文件数据；点击选择数据原始数据，选取需要脱敏文件；102、字段脱敏设置；设置数据保存模式，选择脱敏字段，并选择脱敏方式；103、输出脱敏后文件数据；...
- 王娇王慧李颖刘宏图
- 文献传递
- HIV-1 Vpu蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化
- 2015年
- 目的在毕赤酵母中表达并纯化人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)辅助调节蛋白Vpu。方法从质粒p CDNA3.1-vphu中PCR扩增vphu基因,插入毕赤酵母表达载体p PICZαA,构建重组表达质粒p PICZαA-vphu,转化巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达带有6×His标签的重组Vpu蛋白。表达产物经Ni-Agarose 6×His标签纯化柱纯化。表达和纯化产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒p PICZαA-vphu经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约16 000,主要存在于细胞内;纯化后杂蛋白减少,与抗VPU抗体和抗His标签抗体均可结合,浓度为224μg/ml。结论利用毕赤酵母表达系统成功表达并纯化了HIV-1 Vpu蛋白,纯化的蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究其结构和功能以及靶点药物筛选模型的建立奠定了基础。
- 王娇刘伟胡秦李泽琳曾毅
- 关键词：人类免疫缺陷病毒1型毕赤酵母纯化
- 子宫颈疱疹的诊治
- 2024年
- 子宫颈疱疹(cervical herpes)一般指子宫颈疱疹病毒感染,是由单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)感染子宫颈部位引起的生殖器疱疹(genital herpes,GH)中的一种。HSV感染子宫颈不仅可引起子宫颈炎、子宫颈溃疡、子宫颈糜烂等,而且还可能与子宫颈癌有关,也可导致子宫颈重塑,引起早产及新生儿疱疹,此外,HSV-2感染增加人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)传播风险。了解子宫颈疱疹的病因并及时诊断和治疗,对降低感染性传播疾病及保护个人和社区健康至关重要。
- 张莉刘宏图王娇刘朝晖
- 关键词：单纯疱疹病毒
- 高效分离1型单纯疱疹病毒感染细胞外泌体的研究
- 2021年
- 目的建立并优化1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染HEp-2细胞外泌体的分离方案。方法收集HSV-1感染HEp-2的细胞培养上清,经差速离心和滤膜过滤对上清液进行预处理,使用外泌体提取试剂(total exosome isolation,TEI)结合尺寸排除色谱法(size-exclusion chromatography,SEC)的组合方案对粗提的外泌体进行分离和纯化,最后经超滤浓缩,获得高纯度外泌体。使用3种检测方法对纯化的外泌体进行表征鉴定。结果Western blot结果显示,HSV-1感染或未感染HEp-2细胞外泌体均含有外泌体标志蛋白TSG101和CD9,另外,HSV-1感染细胞外泌体含有gB、VP16和ICP5等3种病毒蛋白。透射电镜观察显示,纯化的外泌体近似圆形,具有膜结构,直径50~150 nm,未发现典型HSV-1病毒颗粒。NTA结果显示,纯化的外泌体峰值粒径均为112.2 nm;单纯HEp-2细胞来源的粒子峰值浓度为3.4×10^(9)个粒子/ml,HSV-1感染细胞来源的粒子峰值浓度为4.1×10^(9)个粒子/ml。结论本研究建立了高效优化的HSV-1感染细胞外泌体分离纯化方案。
- 张莉王娇王湛李颖王慧宋敬东刘宏图
- 关键词：1型单纯疱疹病毒HEP-2细胞外泌体纯化
- 埃博拉病毒重组膜蛋白Gp-Fc表达及免疫原性研究被引量：5
- 2016年
- 本研究利用HEK293F细胞表达了埃博拉病毒重组膜蛋白,并通过免疫小鼠初步研究了其免疫原性。按照人密码子使用频度优化编码埃博拉病毒膜蛋白胞外区基因,合成后将其插入到真核表达载体pXG-Fc中,构建埃博拉病毒糖蛋白和人IgG Fc片段融合蛋白表达质粒pXG-modGP-Fc。利用瞬时转染技术,将融合蛋白表达质粒转染到高密度培养的悬浮HEK293F细胞中,实现了分泌表达。通过Protein A亲和层析,得到了纯化的重组蛋白。将纯化的融合蛋白免疫小鼠,并通过间接ELISA对小鼠抗体效价进行评价。蛋白纯化及分析结果表明,本研究构建的真核表达系统能够有效表达埃博拉重组蛋白GP-Fc,细胞培养上清中重组蛋白以二聚体形式存在。通过间接ELISA分析,纯化的重组蛋白免疫实验动物后,可以在血清中检出高滴度的抗原特异性IgG,显示该重组蛋白具有良好的免疫原性。通过该研究,我们得到了具有良好免疫原性的重组蛋白,同时,该工作为研制基于重组蛋白的埃博拉疫苗以及筛选单克隆抗体打下基础。
- 张晓光杨韧王娇王轩侯美玲安丽娜朱莹曹玉玺曾毅
- 关键词：埃博拉病毒疫苗糖蛋白免疫原性
- 扎伊尔型埃博拉重组糖蛋白GP-Fc基因疫苗构建及免疫原性研究
- 2017年
- 本实验将基于埃博拉病毒表面糖蛋白抗原GP基因序列,按照哺乳动物密码子使用频率优化,并与人IgG恒定区构建融合蛋白GP-Fc基因序列,重组蛋白序列插入基因疫苗载体pVR中,构建重组蛋白基因疫苗pVRmodGP-Fc。通过基因疫苗导入系统免疫小鼠,用间接ELISA和间接免疫荧光对抗体效价进行评估。实验结果显示,重组蛋白GP-Fc的基因疫苗可以很好的刺激小鼠产生特异性抗体,免疫周期结束后,小鼠血清中结合效价终点达到高剂量组1∶300 000及低剂量组1∶180 000,同时血清中的抗体可以很好地结合表达GP抗原的细胞表面,表现出很强的荧光信号。通过该研究我们验证重组蛋白基因疫苗pVR-modGP-Fc可以很好地诱导BALB/c小鼠产生较高滴度的抗原特异性IgG,具有较好的免疫原性。
- 杨韧张晓光王娇朱莹曹玉玺曾毅
- 关键词：埃博拉病毒基因疫苗免疫原性
