付瑶 作品数:4 被引量:6 H指数:2 供职机构: 哈尔滨医科大学公共卫生学院劳动卫生与职业病学教研室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
镍冶炼烟尘染毒致NIH/3T3细胞线粒体损伤及L-抗坏血酸的干预作用 2016年 目的研究镍冶炼烟尘对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)线粒体损伤的影响及L-抗坏血酸的保护作用。方法将NIH/3T3细胞分为染毒组和L-抗坏血酸干预组。染毒组加入镍冶炼烟尘配制浓度分别为0.00、25.00、50.00、100.00g/ml的混悬液,干预组在染毒前额外加入L-抗坏血酸(100mmol/L)。利用MTT法检测细胞生长抑制率,钙黄绿素-AM荧光探针检测细胞线粒体膜通道孔(MPTP)变化,JC-1荧光染色观察并检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化,比色法定量检测细胞线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性变化。结果随着染毒浓度升高,染毒组和干预组细胞生长抑制率均明显增加。在25.00、50.00、100.00μg/ml浓度时干预组抑制率均低于染毒组,差异有统计学意义(P〈0.05)。在50.00、100.00μg/ml浓度时,染毒组MPTP荧光强度为564.940±14.015、436.613±31.275;干预组MPTP荧光强度为611.203±20.053、498.840±21.308,干预组的荧光强度均高于染毒组,差异有统计学意义(P〈0.05);荧光显微镜下干预组绿色荧光强度低于染毒组,干预组红色荧光强度高于染毒组。在25.00、50.00、100.00±g/ml浓度时,染毒组MMP绿色与红色荧光比值分别为16.579±0.220、14.453±0.280、11.133±1.007;干预组MMP绿色与红色荧光比值分别为18.697±0.163、16.260±0.520、13.703±0.715,干预组绿色与红色荧光比值均高于染毒组,差异有统计学意义(P〈0.05)。在25.00、50.00、100.00μg/ml浓度时,干预组的复合物Ⅰ、Ⅳ活性均高于染毒组,在100μg/ml浓度时,复合物Ⅱ染毒组活性为0.754±0.013,干预组活性为0.827±0.032,干预组的复合物Ⅱ活性高于染毒组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论随着镍冶炼烟尘浓度升高,NIH/3T3细胞线粒体损伤程度上升,L-抗坏血酸对镍冶炼烟尘� 潘昱霖 王玥 付瑶 王声远 谭文乔 陈嘉述 吴永会关键词:冶炼烟尘 线粒体 L-抗坏血酸 白藜芦醇对镍染毒NIH/3T3细胞COX-2 mRNA表达影响的实验研究 2017年 研究白藜芦醇对镍染毒小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)损伤的保护作用。将NIH/3T3细胞分为镍染毒组和白藜芦醇干预组,染毒组给予终浓度分别为0.00、100.00、200.00、400.00μg/ml的三氧化二镍(Ni_2O_3)混悬液。干预组在染毒前加入白藜芦醇溶液(终浓度为20μmol/L)预处理2 h,其他处理与染毒组一致。采用MTT法检测细胞生长抑制率;实时定量PCR(real time PCR,RT-PCR)法检测细胞中环氧合酶-2(COX-2)mRNA的表达水平。结果显示,随着染毒浓度的升高,染毒组和干预组细胞生长抑制率均明显增加。在Ni_2O_3染毒浓度100.00、200.00、400.00μg/ml时,干预组抑制率均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05);干预组COX-2mRNA相对表达量分别为4.18±0.18、5.25±1.10、7.34±0.96。干预组COX-2基因相对表达量均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。提示,随着镍染毒浓度的增加,NIH/3T3细胞损伤程度增加,COX-2 mRNA表达水平增高,白藜芦醇对镍所致的细胞损伤具有一定的保护作用。 辛芮 王玥 李昶 周艾佳 杨越 付瑶 吴永会关键词:镍 COX-2 白藜芦醇 镍冶炼烟尘对NIH/3T3细胞bcl-2和bax蛋白表达水平的影响 被引量:3 2015年 目的 研究镍冶炼烟尘对NIH/3T3细胞bcl-2和bax蛋白表达水平的影响.方法 取生长对数期的NIH/3T3细胞,置于镍冶炼烟尘浓度分别为0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 μg/ml的培养液中培养24 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞LDH活力、Hoechst33342法观察细胞凋亡形态学改变以及蛋白免疫印迹法(western blot)检测NIH/3T3细胞bcl-2和bax蛋白表达水平.结果 与对照组比较,各时点各染毒组细胞相对存活率明显降低,除作用7d6.25 μg/ml染毒组外,差异均有统计学意义(P<0.05).胞外LDH活力随染毒浓度的增加而升高,各染毒组胞外LDH活力明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).经100.00 μg/ml镍冶炼烟尘作用24 h细胞呈现染色质浓缩、细胞体积缩小等凋亡早期形态学特征.6.25、12.50、25.00μg/ml染毒组细胞bcl-2蛋白表达分别为0.58±0.01,0.63±0.01,0.57±0.01,均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),50.00、100.00 μg/ml染毒组细胞bcl-2蛋白表达分别为0.35±0.01,0.27±0.01,均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).6.25μg/ml染毒组细胞bax蛋白表达量为0.58±0.00,明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),50.00、100.00μg/ml染毒组bax蛋白表达量分别为0.71±0.01,0.78±0.02,均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 NIH/3T3细胞暴露镍冶炼烟尘24h后能够引起细胞凋亡的启动,并且氧化应激可能诱导其凋亡的发生. 张琳 王玥 马文翰 付瑶 韩丹 吴永会关键词:氧化性应激 BCL-2 BAX 镍暴露致A549细胞损伤及L-抗坏血酸干预作用 被引量:3 2015年 目的 研究镍冶炼烟尘对人肺腺癌细胞(A549)损伤的影响及L抗坏血酸的保护作用.方法 将A549细胞分为染毒组和L-抗坏血酸干预组.染毒组加由镍冶炼烟尘配制的浓度分别为0.00、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00pg/ml的混悬液,干预组在染毒组的基础上加含有L-抗坏血酸(100mmol/L),作用24h.利用MTT法检测细胞存活率.受试物浓度选取0.00、25.00、50.00、100.00μg/ml进行实验时,用于Flou-3荧光探针检测细胞内Ca2+浓度,DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量,实时定量PCR (real time,RT-PCR)法检测细胞内HIF-1α基因表达.结果 随受试物浓度的升高,25.00,50.00,100.00 μg/ml染毒组细胞生长抑制率增加,与0μg/ml染毒组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).镍浓度为25.00,50.00,100.00μg/ml时,染毒组Ca2荧光强度分别为727.70±8.62、777.70±5.50、870.30±13.01,干预组Ca2+荧光强度分别为697.30±15.01、731.70±7.76、825.00±10.54;染毒组ROS荧光强度分别为779.70±4.93、824.30±11.68、899.30±3.06,干预组ROS荧光强度分别为751.30±4.50、789.30±5.67、879.70±7.10;染毒组HIF-1α基因相对表达量分别为2.66±0.28、6.45±0.43、27.42±0.44,干预组HIF-1α基因相对表达量分别为2.10±0.06、5.59±0.27、11.62±0.22;干预组Ca2+荧光强度、ROS荧光强度、HIF-1α基因相对表达量均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 随镍浓度增加,A549细胞损害增加,L-抗坏血酸对镍引起的细胞损伤有一定保护作用. 付瑶 王玥 韩丹 张琳 马文瀚 潘昱霖 吴永会关键词:镍 抗坏血酸