李运清
- 作品数：12 被引量：39H指数：3
- 供职机构：济宁医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 一种核苷酸序列及其用途
- 本发明涉及一种核苷酸序列及其用途，具体涉及将IL‑2的cDNA序列和LMP2A的cDNA序列融合、优化后获得的核苷酸序列，本发明获得活体疫苗的以病毒基因及基因产物为靶点，利用EBV阳性肿瘤细胞与正常细胞的差异，选择性地杀...
- 薛庆节闫迎春李运清吕厚东陈廷
- 文献传递
- CpG ODN协同MAGE-3抗原肽致敏DC疫苗对膀胱癌细胞BIU-87的抑制作用被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨含未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤(CpG)序列的细菌寡核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)免疫佐剂在增强黑色素瘤抗原基因-3(melanoma antigen gene-3,MAGE-3)抗原肽致敏DC抗膀胱肿瘤细胞的作用及其分子机制。方法:采用Ficoll法从健康志愿者HLA-A2型外周血中分离单个核细胞,常规方法诱导培养制备成熟DC。MTT法检测不同方式(MAGE-3、CpG ODN、MAGE-3+CpG ODN和无关抗原对照)致敏DC对T淋巴细胞增殖和CTL对靶细胞BIU-87的杀伤作用。CpG ODN+MAGE-3抗原肽致敏DC抗裸鼠BIU-87膀胱癌细胞移植瘤治疗7、11 d测定移植瘤质量变化,MTT和Western blotting法分别检测移植瘤细胞的增殖水平及其凋亡蛋白表达的变化。结果:CpG ODN+MAGE-3抗原肽致敏DC能够促进T淋巴细胞增殖(P<0.05),并显著提高活化T淋巴细胞的CTL对靶细胞BIU-87的杀伤活性(P<0.05)。体内实验表明,致敏DC治疗7、11 d的各组移植瘤质量均明显降低(均P<0.05),移植瘤的增殖能力下降也较明显(P<0.05);与其他致敏DC方式相比较,尤以CpG ODN+MAGE-3致敏DC组在治疗11 d时的移植瘤质量降低非常显著(P<0.01),且明显促进荷瘤小鼠脾脏单个核细胞的增殖能力(P<0.01);该组在治疗第3天起移植瘤组织Bcl-2表达水平明显降低、Bax水平明显升高(均P<0.05或P<0.01)。结论:CpG ODN能促进MAGE-3抗原肽致敏DC对膀胱癌BIU-87细胞的抑制作用,为膀胱癌DC疫苗的临床应用提供了实验依据。
- 李秀真薛庆节路海聂尚丹王晖李运清赵龙玉谭文彬
- 关键词：膀胱癌
- 重组BCG的抑瘤活性及免疫学机制研究被引量：3
- 2015年
- 目的:对重组GM-CSF和EB病毒LMP2A融合基因的BCG(卡介苗)进行抑瘤活性及免疫学机制研究。方法:建立EB病毒阳性肿瘤动物模型,对小鼠成瘤时间、存活情况、肿瘤重量进行分析,检测重组BCG的抑瘤活性;用ELISA方法对重组BCG刺激机体产生的特异性抗体进行检测,乳酸脱氢酶法检测特异性CTL杀伤效应,ELISPOT法检测IFN-γ的分泌水平,流式细胞术、HE染色检测重组BCG免疫小鼠的肿瘤组织中的淋巴细胞浸润情况。用统计学方法对重组BCG免疫效果进行初步分析和评价。结果:肿瘤成瘤时间与其他对照相比明显延迟,肿瘤生长明显缓慢,小鼠生存期延长。ELISA检测结果表明,重组BCG免疫后能产生针对GM-CSF和LMP2A的特异性Ig G抗体,重组BCG免疫组的小鼠能检测到特异性CTL活性,用ELISPOT法检测到免疫小鼠淋巴细胞有IFN-γ分泌;流式细胞术及形态学观察的方法检测到重组BCG免疫的小鼠肿瘤组织中有淋巴细胞的浸润生长。结论:重组BCG诱导C57BL/6小鼠机体产生了体液免疫和细胞免疫反应,重组BCG对EB病毒阳性肿瘤细胞具有明显抑制作用。
- 薛庆节李秀真李运清杨媛媛胡文洁章洪华吕厚东李士根
- 关键词：重组BCG抗肿瘤细胞免疫EB病毒
- 解脂耶氏酵母中囊泡蛋白YlSec15的鉴定及功能研究
- 2019年
- 解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)进行出芽繁殖时,决定未来分裂平面的出芽位点不是随机选取的,而是选择在前一次细胞分裂位置的对侧出芽,即进行双极出芽。目前对解脂耶氏酵母双极出芽的分子调控机制并不清楚。通过观察蛋白定位及过量表达的方法研究了解脂耶氏酵母中囊泡蛋白YlSec15的功能。结果表明:YlSec15在细胞中有明显的极性定位,在细胞的小芽内以及大中芽的芽颈处富集,过量表达YlSec15抑制了菌丝的形成并使得部分细胞的出芽位点选择方式由双极出芽转变为随机出芽,而引起这一变化的原因可能是由于过量的YlSec15在细胞中不能进行正常的极性定位。此外,YlSec15可能是通过YlRas2介导的信号通路参与调控细胞的菌丝形成及双极出芽。这一发现丰富了解脂耶氏酵母中双极出芽的分子调控机制,也证明了极性生长与囊泡运输之间是相互影响的。
- 陈凯丽张付涛王东月张倩李运清
- 关键词：解脂耶氏酵母菌丝
- 融合基因重组卡介苗对肿瘤的抑制作用被引量：2
- 2020年
- 目的研究EB病毒基因BZLF1和LMP2融合基因重组卡介苗(recombinant BCG,rBCG)对肿瘤的抑制作用。方法建立EB病毒阳性肿瘤(NPRC18)荷瘤小鼠(C57BL/6J)模型,根据注射的药物不同,分为rBCG组、BCG组、转pMV261载体BCG组(pMV261+BCG)、PBS组。采取颈背部皮下多点注射方式进行免疫,对荷瘤小鼠肿瘤重量、成瘤时间、存活情况进行分析,C57BL/6J小鼠肿瘤抑瘤实验结束后,将小鼠的肿瘤裂解后用流式检测CD4+T、CD8+T细胞增殖情况,HE染色分析小鼠肿瘤组织中淋巴细胞浸润情况;使用统计学软件SPSS 19.0对rBCG抑瘤效果进行单因素方差分析(One-way ANOVA)。结果重组BCG组分别用BZLF1和LMP2一抗杂交后,出现杂交目的蛋白,其蛋白质分子量约为70 KD,与对照相比,重组卡介苗对肿瘤抑制作用明显,小鼠成瘤时间延迟,平均成瘤时间约22 d,与对照PBS注射组8 d相比,其差异均有统计学意义(P≤0.01);PBS组肿瘤重量为6.8 g,重组BCG组肿瘤重量为1.01 g,抑瘤率约为81%。经流式分析,重组BCG组产生的CD4+T、CD8+T细胞高于对照组。与对照组相比,rBCG延长了小鼠的生存时间,延缓了肿瘤生长和形成时间。结论重组卡介苗在小鼠体内对肿瘤细胞具有抑制作用。
- 闫迎春王子豪李运清杜峰刘昂陈廷薛庆节
- 关键词：重组卡介苗融合基因
- 生命教育与医学微生物学专业教育相融合的路径初探被引量：2
- 2019年
- 在医学人文教育中注重医学生敬畏生命的教育,可深化医学生对生命价值的理解,提升医学生的人文素质水平,推进医学教育改革的进程,加快实现高素质医学人才培养目标。本文以生命教育为核心,从专业基础课程“医学微生物学”的理论教学、实验教学、案例教学、创新实践教育等教学环节初步探讨了生命教育与医学专业课程教育相融合的路径。
- 李秀真薛庆节章洪华李运清陈廷
- 关键词：生命教育医学专业教育人文
- 混合式教学在医学微生物学教学中的应用被引量：16
- 2017年
- 目的探索传统教学、翻转课堂、PBL教学相结合在临床医学专业医学微生物学教学中的有效应用。方法将基础知识及学习能力相近的2013、2014级五年制临床医学本科学生分成两组，实验组（教改班48人）进行混合式教学，对照组（平行班48人）进行传统教学。授课结束后进行期末理论考试与实验操作考核，并让学生从知识综合运用、课堂气氛活跃度、创新能力培养、教学满意度四方面进行问卷评价，应用SPSS19．0软件对数据进行￡检验。结果实验组学生期末理论成绩为（90．16±3．14）分，高于对照组的[（82．33±4．21）分]，差异有统计学意义（P=0．000）。问卷结果显示，实验组学生在知识综合运用、课堂气氛活跃度、创新能力培养、教学满意度方面评分均高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论混合式教学对培养和发展学生的综合素质和能力，以及提高医学微生物学课程成绩具有实际意义。
- 薛庆节闫迎春李秀真李运清陈廷
- 关键词：医学微生物学混合式教学
- 重组卡介苗对EB病毒阳性肿瘤的抑制作用研究被引量：1
- 2017年
- 目的 研究重组卡介苗（Recombinant BCG, rBCG）对EB病毒阳性肿瘤的抑制作用.方法 建立EB病毒阳性肿瘤（GT39）荷瘤小鼠（C57BL/6）模型,对小鼠存活情况、肿瘤重量、成瘤时间进行分析,流式细胞仪测定CD4＋T细胞增殖情况,HE染色法对小鼠肿瘤组织中淋巴细胞浸润情况进行分析;检测rBCG对肿瘤的抑制作用;使用统计学软件SPSS 11.0进行单因素方差分析（One-way ANOVA）,对rBCG抑制效果进行分析和评价.结果 与对照组相比,rBCG组肿瘤生长明显缓慢,成瘤时间延迟,小鼠生存期明显延长.结论 rBCG在小鼠体内对EB病毒阳性肿瘤细胞具有抑制作用.
- 薛庆节李运清杨春青杨媛媛陈廷李士根
- 关键词：重组卡介苗抗肿瘤EB病毒
- 人IFN-γ与GM-CSF融合基因重组BCG表达与鉴定被引量：3
- 2017年
- 目的构建人IFN-γ与GM-CSF融合基因的卡介苗(BCG)重组质粒,并在卡介苗中分泌表达人IFN-γ与GM-CSF蛋白。方法采用反转录PCR,分别获得人IFN-γ与GM-CSF基因编码序列的c DNA。将IFN-γ与GM-CSF基因进行PCR扩增,通过接头(Gly_4Ser)_3将其连接,形成融合基因,将融合基因插入到p MV261质粒HSP60启动子下游,构建一个分泌型的卡介苗-大肠杆菌穿梭表达质粒p MVGMI-γ。转化感受态细胞E.coli DH5α,在LB培养基平板上进行卡那霉素抗性选择,选择阳性克隆提取质粒后转化感受态BCG,用(NH_4)_2SO_4沉淀、分子筛层析柱Bio-Gel P-6 DG纯化目的蛋白,10%SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化结果,Western-blot检测人IFN-γ与GM-CSF基因在r BCG中的表达。结果目的基因GM-CSF和IFN-γRT-PCR产物大小分别为461 bp和432 bp,与预期值一致。构建的重组质粒经双酶切、扩增及测序鉴定,融合基因GMI-γ(462+435-45=852 bp)正确插入载体,成功转化入BCG感受态细胞,且正确表达。结论融合基因GMI-γ修饰的r BCG构建成功并表达,为进一步探讨r BCG免疫活性及发展新型抗结核杆菌疫苗奠定了基础。
- 尹国才李运清杨媛媛谭文彬薛庆节陈廷
- 关键词：卡介苗基因重组
- 解脂耶氏酵母产脂肪酶的研究进展被引量：6
- 2019年
- 解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)是一种非常规酵母,能够利用多种底物分泌产生大量的脂肪酶,因此,该物种作为一种新型的工业用菌逐渐引起了学者的广泛关注。该文总结了解脂耶氏酵母产脂肪酶的特点、脂肪酶的编码基因、脂肪酶的活性及生产方法研究进展,并分别阐述了脂肪酶在环境治理、食品工业、生物柴油以及家禽养殖业四个方面的应用,目的在于阐明酵母生产脂肪酶的研究现状及应用前景,为探究脂肪酶新的生产方式及新用途提供依据。
- 张付涛陈凯丽王东月刘雪莹李运清
- 关键词：解脂耶氏酵母脂肪酶基因活性
