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丁利: 作品数：17 被引量：61H指数：4; 供职机构：海南师范大学生命科学学院更多>>; 发文基金：海南省自然科学基金国家自然科学基金海南省高等学校科学研究项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>

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实时荧光定量RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒方法的建立及应用被引量：1: 2015年; 本研究将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因部分片段克隆并连接到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒,以此为标准模板进行SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR扩增并制作标准曲线,建立TGEV的荧光定量RT-PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,具有良好的特异性和重复性;对20份临床疑似病料进行检测,发现14份为荧光定量RT-PCR阳性,而常规RT-PCR只能检测出10份。结果表明,建立的实时荧光定量RT-PCR方法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床TGEV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。; 方振华丁利; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量RT-PCR SYBR

中华草龟恶臭假单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析被引量：4: 2019年; 为探明海口某龟鳖养殖场送检的发病中华草龟的病原,本试验从患病中华草龟体内分离得到一株优势生长菌(命名为J1)。经菌落培养、革兰氏染色观察、生理生化鉴定及16S rRNA序列比对分析,并进行攻毒及耐药性试验验证其致病性及药物敏感性。结果显示,该分离菌株在普通营养琼脂培养基上形成圆形、光滑、湿润黏稠、灰黄色、不透明的菌落;革兰氏染色镜检结果显示,该分离菌为革兰氏阴性短杆状;生理生化试验结果显示,分离菌具有运动性,果糖、柠檬酸盐、硝酸盐、氧化酶、接触酶和精氨酸双水解酶呈阳性,而葡萄糖产气、葡萄糖产酸、鸟氨酸脱羧酶、乳糖、麦芽糖、V-P试验等呈阴性;16S rRNA基因序列分析显示,该分离菌株与GenBank中登录的假单胞菌同源性最高;系统进化树显示,该分离菌与恶臭假单胞菌聚为一簇;人工攻毒试验证实分离菌可使中华草龟发病并死亡,临床症状和病理变化与自然发病龟相似;耐药性分析发现,分离菌株对妥布霉素、头孢拉定、庆大霉素等药物敏感,对克林霉素、四环素、氨苄西林、头孢克洛等多种药物耐药。本试验结果可为龟鳖疾病的诊断、预防和治疗提供有力的技术支撑和实践指导。; 方振华代小梅丁利洪美玲; 关键词：恶臭假单胞菌 RRNA 药敏特性

环境盐度对红耳龟卵孵化及稚龟形态表型和行为的影响: 2023年; 为了探究全球气候变化背景下淡水和沿岸土壤盐化对龟类生存造成的威胁和挑战,了解盐度变化对龟类早期生活史的影响,以红耳龟(Trachemys scripta elegans)为研究对象,设置淡水对照组(CK)、0.5盐度组(S_(0.5))、2.5盐度组(S_(2.5))和5盐度组(S_(5)),分析盐度变化对其受精卵孵化、稚龟表型及行为特征的影响。结果显示,随着基质中盐度的升高,CK、S_(0.5)、S_(2.5)、S_(5)组红耳龟稚龟孵化率(80.00%、83.33%、60.00%、43.33%)基本呈下降趋势,孵化时间(51、52、54、53 d)略有增加,稚龟在30 d时的存活率(95.83%、95.83%、94.44%、81.80%)逐渐下降,并导致孵出个体的畸形率增加,且以龟甲畸形占比最高(S_(5)组为100%)。高盐度(S5)基质中孵出的稚龟,其体重极显著低于对照组(P<0.01),背、腹甲的长度和宽度也显著低于对照组(P<0.05)。稚龟的运动速度及耐力受到显著抑制,翻身速度变慢,摄食能力显著降低(P<0.05)。研究表明,红耳龟作为一种耐受性较强的淡水龟代表,上升的环境盐度可直接影响其受精卵的孵化率、初生幼体的存活率及适合度,对红耳龟卵孵化和稚龟行为具有显著的负面效应。由此推断淡水咸化对其他淡水龟类的影响可能更为严重。; 孔雨晨梁方槟王晓丹黄鹏张苗苗洪美玲史海涛丁利; 关键词：红耳龟盐度孵化

急性氨氮胁迫和恢复后中华条颈龟主要器官组织结构的变化被引量：2: 2022年; 氨氮是水产养殖过程中最主要的环境污染物之一。为探究急性氨氮胁迫对中华条颈龟主要器官组织结构的影响,以体质量(218.26±12.65)g的1龄中华条颈龟为对象,应用苏木精—伊红染色的方法研究氨氮(200 mg/L)胁迫(24、48 h)及去除氨氮(48 h)对其脑、肝脏、心脏、肾脏和脾脏组织结构的影响。试验结果显示,氨氮胁迫后脑组织出现间质增宽、疏松,神经元细胞核发生偏位,神经元变性、坏死等现象,恢复48 h后神经元肿胀与细胞核偏位现象减少;肝脏出现肝细胞肿胀、颗粒变性、水泡变性、坏死等病理现象,肝血窦缩小甚至消失,恢复48 h后肝细胞肿胀减少,肝血窦基本恢复到胁迫前水平,但肝细胞颗粒变性、水泡变性现象依旧存在;心脏间质血管充血,恢复48 h后心肌细胞间隙缩小趋于胁迫前水平,充血现象消失;肾脏肾小管上皮细胞发生颗粒变性,部分细胞从基膜脱落,细胞膜破裂,肾小球体积增大、毛细血管网扩张,细胞核固缩甚至溶解消失,间质中有炎性细胞浸润,恢复48 h后炎性细胞基本消失,但肾小管管腔不规则和颗粒变性等病理现象依旧存在;脾脏白髓区域增大,恢复48 h后白髓与红髓趋于正常水平。试验结果表明,急性氨氮胁迫对中华条颈龟脑、肝脏、心脏和肾脏均会造成不同程度的损伤,恢复48 h后中华条颈龟主要脏器的病理变化呈现出不同程度的缓解,其中心脏恢复能力较好,脑、肝脏和肾脏恢复能力相对较差;脾脏免疫细胞增殖,表明机体在胁迫后会启动免疫防御机制,以增强机体的免疫能力。试验结果从病理学角度阐述了氨氮胁迫对中华条颈龟的影响,为龟鳖类的健康养殖提供一定的理论依据。; 黄祖彬梁龄月李维昊李娜丁利洪美玲; 关键词：氨氮胁迫病理学

猪轮状病毒与猪传染性胃肠炎病毒混合感染的实验室诊断被引量：3: 2017年; [目的]对海南省某猪场腹泻病死仔猪病原进行实验室诊断。[方法]通过临床症状观察与病理剖检,结合RT-PCR方法和病毒的分离培养进行病原鉴定。[结果]经过RT-PCR扩增,获得了PRV和TGEV阳性目的片段;应用MA-104细胞与PK-15细胞分别进行PRV与TGEV的分离培养后,可见典型的细胞病变,经过RT-PCR进一步鉴定最终确诊为PRV和TEGV混合感染。[结论]通过采用紧急接种和保守治疗等综合防治措施,获得了较好的防控效果。; 方振华沈振国孙倩丁利; 关键词：猪轮状病毒猪传染性胃肠炎病毒

面向应用创新型本科生培养的生物化学实验教学设计——以GFP蛋白的表达分离纯化为例被引量：10: 2022年; 为提高生物化学实验的教学效果,培养学生的创新性、应用性思维,在生物化学实验中以绿色荧光蛋白为对象,设计蛋白质表达与纯化的综合性实验,并以该实验为基础创新了自主实验考核方式。通过实验材料的优化、实验教学内容的改进,提升了该课程的教学质量;以学生自主设计实验并实施的方式对其进行考核,通过考核方式和规则的完善,增强了学生的创新能力和综合运用知识的能力,提升了学生进行科学研究的热情和能力,取得了较好的教学效果。; 徐志霞孙杰杨勇丁利; 关键词：生物化学绿色荧光蛋白

学前教育专业人体解剖生理学教学改革与研究被引量：1: 2015年; 人体解剖生理学课程是学前教育专业必不可少的专业基础课,针对学前教育专业学生特点,在人体解剖生理学课程教学中充分利用现代信息化技术,重视学生的教学实践,并通过合理分配教学内容、提高学生学习兴趣等方法,以期获得更好的教学效果。; 丁利方振华; 关键词：学前教育人体解剖生理学教学改革与研究

龟致病性维氏气单胞菌和鲍曼不动杆菌双重PCR检测方法的建立被引量：1: 2016年; 应用2对特异性引物,通过对反应条件和体系的优化,成功建立了能快速检测维氏气单胞菌和鲍曼不动杆菌两种病原的双重PCR方法。研究结果表明,该方法特异性强,仅对龟鳖维氏气单胞菌和鲍曼不动杆菌有扩增,而对其他龟鳖常见病原无扩增;该方法对维氏气单胞菌最低检测核酸质量浓度为1.75×10-3 ng/μL,对鲍曼不动杆菌最低检测核酸质量浓度为3.96×10-3 ng/μL,检出率较传统检测方法高。该研究所建立的双重PCR方法灵敏度高、特异性好,可为临床龟鳖维氏气单胞菌和鲍曼不动杆菌感染的诊断和流行病学调查等提供帮助。; 丁利代小梅方振华汪继超史海涛; 关键词：维氏气单胞菌鲍曼不动杆菌双重PCR

基于转录组分析红耳龟盐度适应的离子调节被引量：2: 2018年; 外来有害入侵物种红耳龟（Trachemys scripta elegans）,原属于淡水龟类,但目前研究发现其可存活于半咸水环境中,这使得未来红耳龟可入侵的潜在范围及危害将增大。为了探究红耳龟对盐度适应的分子机制,本研究应用高通量转录组测序技术,分析其在不同盐度环境中参与离子调节的主要基因及通路。我们设计了三个处理组：对照组（自来水）、低盐度组（0.5%,即盐度5组）和高盐度组（1.5%,即盐度15组）,慢性胁迫8周后,分析血液中无机离子、葡萄糖及皮质醇含量,并对其肝脏转录组数据进行分析。结果表明,与对照组相比,盐度5组血液渗透压、[Na＋]和血糖差异不显著（p〉0.05）,而盐度15组显著升高;血液[Cl-]三组间差异均显著;两个盐度处理组血液[K＋]显著低于对照组（p〈0.05）;但血液皮质醇含量在三组之间差异均不显著。GO （Gene ontology）富集分析发现,参与离子调节的基因主要有电压门控钾通道亚家族5 （KCNH5）、电压门控钠通道I （SCN1B）、利尿肽前体A （NPPA）、ATP酶（ATPeFOA, MTATP6, ATP6）、葡萄糖激酶（GCK）、盐诱导激酶（SIK）、脂联素（ACDC）和类固醇17α-单氧酶（CYP17A）等。所筛选出的基因大多被富集到与能量代谢、脂肪代谢、碳水化合物代谢以及内分泌系统等KEGG通路类别中。综上所述,红耳龟在盐度适应过程中参与离子调节的大部分KEGG通路以及相关的生理指标均未发生显著变化,说明它能较好地适应慢性低盐度胁迫（盐度0.5%左右）。; 洪美玲李江月江爱萍丁利史海涛; 关键词：红耳龟转录组学

龟鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌双重PCR诊断方法建立被引量：1: 2021年; 为建立龟源致病性鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌双重PCR诊断方法,应用鲍曼不动杆菌rpoB基因和摩氏摩根菌gyrB基因的特异性引物,对单重和双重PCR反应的退火温度、引物浓度、MgCl2浓度、dNTP浓度等进行优化。试验结果显示,鲍曼不动杆菌rpoB基因和摩氏摩根菌gyrB基因引物分别进行PCR扩增后,均获得特异性条带,与预期结果一致;rpoB和gyrB基因的上、下游引物各为0.3μmol/L,退火温度为59.3℃,dNTP浓度为0.5 mmol/L,MgCl2浓度为5 mmol/L时,PCR扩增效果最佳;特异性试验结果显示,本方法仅对摩氏摩根菌和鲍曼不动杆菌有扩增,对其他病原菌如肺炎克雷伯氏菌、维氏气单胞菌及恶臭假单胞菌等无扩增;灵敏性结果表明,本方法对鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌最低检测质量浓度分别为4.12×10^-3 ng/μL和1.257×10^-3 ng/μL。通过对临床病料样本的检测分析证明,本方法与单重PCR检测结果一致。本试验所建立的针对两种病原菌检测的双重PCR方法特异性强、灵敏度高,可为龟鳖类鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌的鉴别诊断和临床调查提供帮助。; 方振华蒙美姑党朝晖洪美玲丁利; 关键词：龟鳖鲍曼不动杆菌双重PCR

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