目的:探讨姜黄素类似物对糖尿病肾病(DN)小鼠肾纤维化的影响及机制。方法:KKAy小鼠给予高脂饲料连续饲养2周构建DN小鼠模型,随机分为模型组和实验组,每组12只,10只C57BL/6J小鼠饲喂普通饲料,作为正常组。实验组小鼠灌胃姜黄素类似物H85 mg/kg,模型组和正常组均灌胃等量生理盐水,1次/d,连续干预6周。采用血糖仪检测小鼠空腹血糖(FBG),双缩脲法检测处死前24 h尿液尿蛋白(UP);过碘酸-无色品红染色(PAS染色)观察小鼠肾组织病理形态变化;蛋白免疫印迹(WB)法及实时荧光定量-聚合酶链式反应(qPCR)检测各组小鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和IV型胶原(Col-Ⅳ)、Twist蛋白表达情况。结果:干预后,正常组、模型组和实验组小鼠肾脏指数(KI)分别为(6.24±0.32)、(14.4±2.39)、(9.14±1.43)mg/g,FBG分别为(4.96±1.25),(35.54±3.43),(27.54±1.12)mmol/L,24 h UP分别为(31.69±5.51)、(710.54±231.28)、(410.43±130.36)μmol/L;肾小球硬化评分分别为(0.00±0.00)、(3.02±0.24)、(1.69±0.21)分,组间差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,模型组小鼠肾组织α-SMA、FN和Col-Ⅳ、Twist蛋白及mRNA相对表达量升高(P<0.05),而实验组小鼠低于模型组(P<0.05)。结论:姜黄素类似物可改善DN小鼠肾功能及肾组织损伤程度,降低纤维化蛋白表达,延缓肾组织纤维化,可能与下调Twist蛋白表达有关。
目的用二代转录组测序(RNA-seq)技术,结合差异基因GO分析、KEGG富集分析,探讨谷胱甘肽转移酶(GST)在高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用。方法14只雄性C57BL/6J小鼠随机抽样分为对照组(n=6)和模型组(n=8)。对照组小鼠喂养普通饲料;模型组喂养高脂饲料,连续7周,构建NAFLD模型。试剂盒检测血清ALT、AST活性及TG水平、苏木精-伊红(HE)和油红染色观察肝组织病理和脂滴沉积情况;提取肝组织RNA进行高通量转录组测序,将基因表达量差异倍数≥2.0且P<0.05定义为差异基因,筛选对照组与模型组肝组织差异基因,应用GO、KEGG数据库进行功能分析,并采用qRT-PCR验证差异基因表达。符合正态分布的计量资料两组比较采用独立样本t检验。结果对照组与模型组小鼠体质量、血清ALT、AST差异无统计学意义(P值均>0.05)。与对照组相比,模型组血清TG水平明显高于对照组[(2.02±0.50)mmol/L vs(1.00±0.29)mmol/L,t=-4.45,P=0.001]。HE染色提示:模型组可见弥漫性脂肪变性和气球样变。油红染色显示:模型组肝细胞胞浆内橘红色脂滴明显增多,且肝细胞脂肪变分级明显高于对照组(1.88±0.64 vs 1.00±0.00,t=-3.86,P=0.006)。转录组测序提示两组差异基因1367个,其中上调基因数608个、下调基因数759个;且两组中GST基因差异表达17个。选择差异倍数最明显的前10个GST基因进行验证。与对照组相比,GSTa2、GSTa3、GSTa4、GSTm1、GSTm2、GSTm3、GSTm4、GSTp1、GSTo1表达下调,GSTk1表达上调。实验结果与测序结果一致。结论GST通过参与类固醇代谢过程、脂肪酸代谢过程、胆固醇代谢过程等多个生物学过程影响脂质代谢,与NAFLD发病密切相关。
