孙继鹏
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：国家海洋局更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 一种海洋生物源高效重金属脱除剂金属硫蛋白提取分离工艺
- 一种海洋生物源高效重金属脱除剂金属硫蛋白提取分离工艺，步骤为：经匀浆处理的鱼内脏，按比例加入缓冲溶液，调节提取液pH至7.0～9.0，控制提取温度，搅拌提取1～4小时；提取液经加热处理去除杂蛋白，冷却后经离心去除沉淀物，...
- 孙继鹏王俊坤易瑞灶李诗逸杨婷
- 文献传递
- 基于枯草芽孢杆菌重组菌株构建技术制备海洋源金属硫蛋白被引量：1
- 2018年
- 为构建安全高效表达海洋源金属硫蛋白的益生菌重组菌株,以海洋源褶牡蛎内脏团为模板,PCR克隆得到褶牡蛎金属硫蛋白基因(Op-MT),大小为324 bp,经pMD19-T载体亚克隆到融合表达载体pHT43-SUMO中,然后通过电转化法将重组质粒转入八种蛋白酶缺陷的宿主枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WB800N中。SDS-PAGE电泳显示诱导表达的融合蛋白SUMO-Op-MT分子量约为23 kD,与预期一致,说明可溶性融合蛋白SUMO-Op-MT在宿主菌中得到了表达,且通过Western blotting进一步得到验证。同时,HPLC检测重组枯草芽孢杆菌发酵液,结果也表明重组枯草芽孢杆菌成功表达了可溶性目的蛋白Op-MT。通过对重组工程菌中MT活性检测发现,其对重金属镉耐受力增强,说明重组工程菌成功表达出有活性的金属硫蛋白。这为以后开发天然、高效海洋源重金属解毒剂提供理论基础。
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- 关键词：枯草芽孢杆菌
- 褶牡蛎金属硫蛋白基因的克隆及组织表达分析被引量：3
- 2017年
- 金属硫蛋白是一类广泛存在于生物体中的低分子质量、富含半胱氨酸、高度诱导性的内源金属结合蛋白。采用RACE技术,首次获得了褶牡蛎金属硫蛋白基因的全长cDNA序列。该序列全长500bp,由长54bp的5′非翻译区,122bp的3′非翻译区和324bp的开放阅读框组成,共编码107个氨基酸。该蛋白序列中半胱氨酸含量丰富(28%),不含芳香族氨基酸,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构,存在软体动物等无脊椎动物金属硫蛋白特征序列,是金属硫蛋白家族成员。荧光定量PCR法,测定褶牡蛎体内3种组织(内脏团、鳃、外套膜)中金属硫蛋白mRNA组织特异性表达以及重金属(Cd^(2+)、Zn^(2+))慢毒胁迫效应。结果表明,金属硫蛋白mRNA在褶牡蛎内脏团中相对表达量最高;褶牡蛎内脏团金属硫蛋白mRNA表达量与重金属胁迫时间呈现出一定时间效应关系,从胁迫开始至7d表现为正调,而7~10d开始为负调,Cd^(2+)胁迫和Zn^(2+)联合Cd^(2+)胁迫下金属硫蛋白mRNA表达量显著增加,最大表达量为对照组的42.5倍(Cd),Zn^(2+)联合Cd^(2+)胁迫表现为拮抗作用。本试验结果为生产实践上在多种重金属污染下应用金属硫蛋白作为生物标志物监测水域污染状况,保护水生生态环境提供了依据。
- 阎光宇阎光宇易瑞灶孙继鹏
- 关键词：褶牡蛎金属硫蛋白基因
