方煜翔
- 作品数：13 被引量：13H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划上海市教育委员会创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种重组单纯疱疹病毒遗传操作系统及其应用
- 本发明属于医药生物技术领域，提供了一种重组单纯疱疹病毒遗传操作系统。该重组单纯疱疹病毒遗传操作系统，包括HSV骨架载体和穿梭质粒；所述的HSV骨架载体包含HSV基因组DNA、BAC质粒骨架、多克隆位点、真核抗性基因以及原...
- 田聆方煜翔薛京伦陈金中
- 文献传递
- 翻译起始的调控与肿瘤靶向基因治疗被引量：3
- 2008年
- 真核细胞主要通过高度结构化的5′端非翻译区(5′untranslated region,5′UTR)实现mRNA翻译起始的调控,其主要作用方式有3种,即通过本身高度复杂的二级结构在空间上阻碍翻译起始、通过其包含的上游AUG密码子(uAUG)和上游开放阅读框(uORF)元件来抑制翻译起始,以及通过其包含的内部核糖体进入位点(IRES)元件的"非帽依赖"(cap-indepen-dent)起始途径来抑制翻译起始。肿瘤细胞通常会过表达真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor4E,eIF4E)、eIF4A、eIF4G等,这些因子可以通过解开5′UTR的复杂结构特异性地解除5′UTR的翻译抑制作用。目前应用5′UTR进行肿瘤靶向性基因治疗的思路是把肿瘤杀伤基因置于5′UTR调控之下,利用肿瘤细胞过表达翻译起始因子来发挥5′UTR在肿瘤细胞中的翻译竞争优势,实现治疗基因在肿瘤细胞中的特异性表达,从而达到靶向杀伤肿瘤的目的。
- 方煜翔薛京伦田聆
- 关键词：翻译调控肿瘤基因治疗靶向调控
- 人釉原蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建含人釉原蛋白(hAm)成熟肽基因的重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达重组人釉原蛋白,鉴定经纯化获得的融合蛋白。方法利用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ将hAm基因插入原核表达载体PGEX4T1,对重组表达质粒PGEX4T1-hAm进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒转化E.coli.RosettaTM,用终浓度0.3 mmol/L的IPTG诱导表达带有亲和标记谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的重组hAm。经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-hAm,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定原核表达的重组hAm。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误。在大肠杆菌RosettaTM中经IPTG诱导表达并纯化得到的融合蛋白GST-hAm,经SDS-PAGE鉴定分子量约为46000,主要以包涵体形式存在,与预测一致;Western blotting证实该融合蛋白能被特异性抗hAm多克隆抗体识别。结论成功构建含有hAm成熟肽基因的重组原核表达质粒,表达的融合蛋白GST-hAm可通过纯化获得,经鉴定为hAm。大量纯化的hAm成熟肽的获得为开展其功能研究奠定了基础。
- 程岚束蓉薛京伦陈金中田聆方煜翔
- 关键词：原核表达载体融合蛋白
- 微RNA-378a-3p靶向SUFU基因促进乳腺癌细胞的增殖和迁移被引量：1
- 2021年
- 目的:研究微RNA(microRNA,miRNA,miR)-378a-3p对乳腺癌细胞体外增殖、凋亡和迁移能力的影响,以及可能的作用机制。方法:利用GEO(Gene Expression Omnibus)数据库分析乳腺癌miR-378a-3p高表达患者与低表达患者的生存情况。使用实时荧光定量PCR法检测人乳腺癌细胞系以及正常人乳腺上皮细胞中miR-378a-3p的表达水平。采用慢病毒感染的方法将携带miR-378a-3p-模拟物(miR-378a-3p-mimics)的重组慢病毒转入人乳腺癌MCF-7细胞,构建稳定过表达miR-378a-3p的MCF-7细胞;将携带miR-378a-3p-抑制子(miR-378a-3p-inhibitor)的重组慢病毒转入人乳腺癌MDA-MB-231细胞,构建稳定抑制miR-378a-3p表达的MDA-MB-231细胞。采用CCK-8法、Transwell小室法和FCM法检测过表达miR-378a-3p或抑制其表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。通过生物信息学分析以及双荧光素酶报告系统验证miR-378a-3p对其靶基因SUFU(Hedgehog信号通路负调控因子)的直接靶向调控作用。miR-378a-3p表达水平改变后,通过免疫共沉淀法验证SUFU蛋白与人GLI家族锌指蛋白1(GLI family zinc finger 1,GLI1)之间的相互作用,并采用蛋白质印迹法检测2者在细胞核和细胞质中表达水平的变化情况。在过表达miR-378a-3p或抑制其表达的基础上,使用Hedgehog信号通路抑制剂或激活剂处理乳腺癌细胞,然后采用CCK-8法、Transwell小室法和FCM法检测过表达miR-378a-3p或抑制其表达是否通过激活或抑制Hedgehog信号通路调控乳腺癌细胞的增殖、凋亡和迁移。结果:高表达miR-378a的乳腺癌患者的预后较低表达miR-378a的乳腺癌患者的差。miR-378a-3p在多种乳腺癌细胞中的表达水平均明显上调(P值均<0.001)。乳腺癌MCF-7细胞稳定过表达miR-378a-3p后,MCF-7细胞的体外增殖(P<0.05)和抗凋亡(P<0.01)能力均明显增强;反之,在乳腺癌MDA-MB-231细胞中沉默miR-378a-3p表达后,MDA-MB-231细胞的体外增殖(P<0.000 1)、抗凋亡(P<0.05)和迁移(P<0.0
- 王嘉琳高维强方煜翔
- 关键词：微RNAS细胞运动HEDGEHOG信号通路
- 一种嵌合的肿瘤特异性基因表达调控盒及其应用
- 本发明属于生物医药技术领域，具体提供一种嵌合的肿瘤特异性基因表达调控盒。它包含肿瘤特异性基因启动子、肿瘤特异性翻译调控元件5’端非翻译区、多克隆位点、基因表达增强子和多聚腺苷酸信号区；肿瘤特异性基因启动子、肿瘤特异性翻译...
- 田聆方煜翔陈金中薛京伦
- 一种嵌合的肿瘤特异性基因表达调控盒及其应用
- 本发明属于生物医药技术领域，具体提供一种嵌合的肿瘤特异性基因表达调控盒。它包含肿瘤特异性基因启动子、肿瘤特异性翻译调控元件5’端非翻译区、多克隆位点、基因表达增强子和多聚腺苷酸信号区；肿瘤特异性基因启动子、肿瘤特异性翻译...
- 田聆方煜翔陈金中薛京伦
- 文献传递
- 靶向极性分子Par3抑制前列腺癌侵润及转移
- 本发明涉及靶向极性分子Par3抑制前列腺癌侵润及转移。本发明通过构建稳定敲降Par3的前列腺癌细胞亚克隆细胞系，并建立相应的裸小鼠前列腺原位植瘤动物模型，在体外及体内验证了稳定敲降Par3抑制前列腺癌侵润及转移的作用。本...
- 高维强方煜翔周培杰
- 文献传递
- 下调转录因子KLF4抑制前列腺癌细胞上皮-间质转化及细胞迁移和侵袭被引量：4
- 2017年
- 目的:探讨下调Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF 4)对前列腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:构建稳定敲降KLF 4的前列腺癌LNCaP-shKLF4细胞和对照组LNCaP-con细胞。应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测LNCaPshKLF4和LNCaP-con细胞中KLF4 mRNA和蛋白的表达,以及稳定敲降KLF 4的前列腺癌PC3-shKLF4细胞、对照组PC3-con细胞、LNCaPcon细胞和LNCaP-shKLF4细胞中EMT相关分子mRNA和蛋白的表达。Transwell小室法检测PC3-con、PC3-shKLF4、LNCaP-con和LNCaPshKLF4细胞的迁移及侵袭能力。结果:成功构建LNCaP-shKLF4和对照组LNCaP-con细胞。LNCaPshKLF4细胞中KLF4 mRNA及蛋白表达水平均低于对照组LNCaP-con细胞(P<0.01,P<0.05)。PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)mRNA的表达水平分别高于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.01),而PC3-shKLF4和LNCaPshKLF4细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)、锌指E-盒结合同源异体框1(Zinc finger E-box-binding homeobox 1,Zeb1)、Snail1、波形蛋白(vimentin,Vim)和基质金属蛋白酶1(matrix metallopeptidase 1,MMP1)mRNA的表达水平均分别低于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.05)。PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中E-cad的表达水平分别高于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.05),而PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中N-cad、Zeb1、Snail1、Vim和MMP1蛋白的表达水平均分别低于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.05)。PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞的迁移和侵袭能力均分别低于对照组PC3-con和LNCaP-con细胞(P<0.01,P<0.05)。结论:下调前列腺癌细胞中KLF4表达可促进上皮相关基因的表达,抑制间质相关基因的表达,从而在体外抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭。
- 魏莲子方煜翔高维强
- 关键词：前列腺肿瘤上皮-间质转化肿瘤侵润
- 溶瘤单纯疱疹病毒的叶酸-聚乙二醇化修饰及其生物学活性检测
- 2010年
- 溶瘤单纯疱疹病毒(oncolytic HSV)是一种重要的具有临床应用前景的病毒,但是该病毒的感染缺乏肿瘤细胞靶向性,因而在相当程度上限制了其进一步的临床应用。首先把特异结合肿瘤细胞表面叶酸受体的叶酸(FA)与聚乙二醇(PEG)进行化学交联,然后用PEG化的叶酸对溶瘤单纯疱疹病毒G207进行共价表面化学修饰,并检测修饰后的病毒FA-PEG-HSV和PEG-HSV的物理和生物学活性。结果显示,FA-PEG-HSV和PEG-HSV的稳定性较未修饰的HSV有所提高,但病毒活力则分别下降为未修饰HSV的22.5%和27.5%,而FA-PEG-HSV对叶酸受体过表达的肿瘤细胞KB的感染效率则比叶酸受体低表达A549细胞提高了300%。以上结果表明,FA-PEG-HSV是一种成功的叶酸受体靶向性溶瘤病毒复合体。
- 韦炜郭冬薇方煜翔薛京伦郭圣荣田聆
- 关键词：叶酸聚乙二醇化基因治疗
- 应用microRNA-7抑制前列腺肿瘤生长及其肿瘤进程
- 本发明涉及应用microRNA-7抑制前列腺肿瘤生长及其肿瘤进程。本发明通过构建稳定过表达miR-7的前列腺癌细胞亚克隆细胞系，并建立相应的裸小鼠皮下荷瘤动物模型，在体外及体内验证了miR-7抑制前列腺肿瘤细胞生长以及前...
- 高维强方煜翔常云丽
- 文献传递
