程正阳
- 作品数：11 被引量：15H指数：3
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- TgROP18对神经干细胞分化的影响及机制研究
- 弓形虫是一种重要的生物致畸因子，其导致的先天性脑病严重损害婴幼儿健康。神经干细胞(NSC)在神经系统发育和病理机制中起关键作用。弓形虫棒状体蛋白18(ROP18)作为具有激酶活性的毒力因子，是否对神经干细胞的生物学行为产...
- 张贤程正阳苏蕊李婧旸余莉沈继龙
- 弓形虫棒状体蛋白2家族成员研究进展被引量：5
- 2015年
- 弓形虫是引起人兽共患弓形虫病的顶复门专性细胞内寄生原虫,感染的宿主范围广泛,严重危害人类的健康及畜牧业的发展。近年来随着对弓形虫研究的不断深入,弓形虫棒状体蛋白2家族在虫体入侵、纳虫泡修饰及毒力作用方面发挥的重要作用得到进一步的证实。棒状体蛋白ROP18作为该家族的重要成员,是弓形虫重要的毒力分子,在IRGs通路中发挥着重要作用。它可以定位在PVM上,清除IRGs,从而在弓形虫入侵细胞的过程中发挥着逃避免疫细胞清除的作用。另一家族成员蛋白假性激酶ROP5与ROP18之间发挥着协同作用,可以提高激酶活性来控制弓形虫的急性毒力,保护弓形虫免于清除。本文就ROP18与ROP5等毒力因子的分子作用机制进行了综述。
- 张贤甘小凤程正阳余莉
- 关键词：弓形虫毒力
- TgROP18对神经干细胞分化的影响及机制研究
- 张贤程正阳苏蕊余莉沈继龙
- 弓形虫抑制神经干细胞向神经元分化的研究
- 2014年
- 目的探讨弓形虫排泄分泌抗原(ESA)对神经干细胞分化的影响。方法分别用含5%马血清、10%胎牛血清DMEM完全培养液,无血清DMEM培养液及含2%N2的DMEM/F12培养液培养诱导神经干细胞系C17.2分化,分别于诱导分化后1、3、5d收集细胞,提取RNA,采用RT-PCR检测神经元标志蛋白βⅢ-tubulin基因的转录;用含ESA的2%N2DMEM/F12培养液培养C17.2细胞5d,收集细胞,提取总蛋白,采用Western blot检测βⅢ-tubulin蛋白水平。结果用含2%N2的DMEM/F12培养液培养5d,C17.2细胞βⅢ-tubulin基因转录水平为3.93±0.13,另两组分别为(0.08±0.34)%和0,差异有统计学意义(P<0.05);2%N2诱导分化后5d,弓形虫ESA能显著降低βⅢ-tubulin蛋白水平(P<0.05)。结论弓形虫ESA能抑制C17.2神经干细胞向神经元分化。
- 甘小凤张贤程正阳沈继龙罗庆礼余莉
- 关键词：弓形虫神经干细胞分化
- 弓形虫棒状体蛋白ROP18表位肽抗体的制备与初步应用被引量：1
- 2023年
- 设计并制备兔抗弓形虫棒状体蛋白ROP18的特异性表位肽抗体,并对其进行鉴定及初步应用。运用在线蛋白质分析软件Bepi Pred 1.0 Server预测和分析ROP18的抗原表位,人工合成选定的两段优势表位肽,与载体蛋白BSA偶联后分别免疫新西兰兔制备抗ROP18血清,通过ELISA鉴定其效价,Western blot鉴定其特异性,并将这两种抗体应用于免疫荧光和免疫共沉淀技术。间接ELISA结果显示两种抗体效价分别为1∶16 000、1∶64 000;Western blot结果显示,两种抗体均能够特异性识别弓形虫速殖子中的内源性天然ROP18蛋白和外源重组ROP18蛋白;免疫荧光检测到ROP18定位于弓形虫速殖子顶端及感染细胞的纳虫泡膜上;免疫共沉淀未能成功下拉目标蛋白。成功获得ROP18的两种表位肽多克隆抗体,效价高且特异性强,并成功应用于免疫荧光定位,为进一步探究ROP18在弓形虫中的功能和作用奠定了基础。
- 朱进进程正阳余莉
- 关键词：弓形虫免疫荧光免疫共沉淀
- 弓形虫抑制Wnt/β-catenin通路干扰C17.2神经干细胞的分化
- 目的:弓形虫是一种重要的嗜中枢先天性致畸因子。然而,其对神经干细胞分化的影响及其分子机制所知甚少。本研究旨在探讨弓形虫排泄分泌抗原(excretory-secretory antigens,ESAs)对神经干细胞分化的影...
- 甘小凤张贤程正阳沈继龙罗庆礼余莉
- 关键词：弓形虫神经干细胞分化
- 文献传递
- 弓形虫ROP18重组腺病毒载体的构建及其对神经干细胞C17.2凋亡的影响被引量：3
- 2016年
- 目的构建弓形虫棒状体蛋白ROP18重组腺病毒载体,研究其对神经干细胞C17.2凋亡的影响。方法将弓形虫ROP18从PEGFP-G2-ROP18重组质粒上亚克隆至腺病毒载体pHBAd-MCMV-GFP,重组腺病毒载体pHBAd-MCMVGFP-ROP18经PCR、测序鉴定正确后,与骨架质粒pHBAd-BHG共转染HEK293细胞进行包装,收获、扩增重组腺病毒并对其滴度进行测定。以MOI=70的重组腺病毒感染神经干细胞C17.2,转染不同时间荧光显微镜观察基因的表达情况。转染48h用CCK-8法检测C17.2的增殖情况;转染24h采用Annexin V-APC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot法检测半胱天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白水平。结果重组ROP18过表达腺病毒在C17.2神经干细胞内能有效表达。转染48h,与空载体对照组相比,C17.2细胞增殖活性明显降低(P<0.05);转染24h,流式细胞术检测结果显示,ROP18基因转染组C17.2细胞凋亡率明显增加(P<0.001);Western blot检测显示caspase-3活性片段的表达明显增加(P<0.05)。结论成功构建了弓形虫ROP18重组腺病毒并在神经干细胞C17.2中表达,ROP18重组腺病毒能诱导C17.2神经干细胞凋亡。
- 张贤甘小凤程正阳都建罗庆礼沈继龙余莉
- 关键词：刚地弓形虫重组腺病毒细胞凋亡
- 弓形虫抑制Wnt/β-catenin通路干扰C17.2神经干细胞的分化
- 弓形虫是一种重要的嗜中枢先天性致畸因子.然而,其对神经干细胞分化的影响及其分子机制所知甚少.本研究在优化神经干细胞系C17.2分化条件的基础上,用不同剂量的弓形虫排泄分泌抗原(excretory-secretory an...
- 甘小凤张贤程正阳沈继龙罗庆礼余莉
- GST pull-down和免疫共沉淀联合质谱分析筛查弓形虫ROP18相互作用蛋白的研究
- 目的：筛选神经干细胞内与弓形虫ROP18相互作用的蛋白，为ROP18致病的分子机制研究奠定基础。 方法：第一部分 GST Pull-Down筛选C17.2神经干细胞内与弓形虫ROP18的互作蛋白： (1)运用RT-P...
- 程正阳
- 关键词：弓形虫免疫共沉淀细胞病变
- 弓形虫棒状体蛋白ROP18的优化表达被引量：1
- 2017年
- 目的构建弓形虫棒状体蛋白ROP18原核表达载体,并通过密码子优化等方法优化其表达。方法运用RT-PCR扩增ROP18基因,将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18重组质粒;运用OptigeneTM密码子优化分析平台对弓形虫ROP18编码基因进行优化,合成优化后的全长基因(ROP18u)并将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18u重组质粒;以优化后的ROP18u基因为模板,PCR扩增去除N端信号肽和前功能区序列的截短ROP18片段(ROP18uc),将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18uc重组质粒。所有重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白,并进行Western blot鉴定。结果 pGEX-ROP18、pGEX-ROP18u和pGEX-ROP18uc于30℃诱导培养4h-6h,分别检测到分子质量约为88ku和77ku的重组蛋白,该蛋白能被GST单克隆抗体和ROP18多克隆抗体识别。结论成功构建了pGEX-ROP18、pGEX-ROP18u和pGEX-ROP18uc原核表达载体,密码子优化未能显著提高ROP18重组蛋白的表达量,但提高了可溶性蛋白的含量。
- 程正阳苏蕊张贤李叶林朱万博余莉
- 关键词：弓形虫原核表达
