王文丰
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Hrd1转基因小鼠的构建与验证被引量：1
- 2015年
- 背景 内质网应激在糖尿病视网膜病变（DR）中发挥着重要作用.羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1（Hrd1,又名Syvn1）作为一种内质网相关蛋白降解（ERAD）途径中的核心蛋白,能够减少内质网应激. 目的 构建Hrd1高表达小鼠,为今后研究Hrd1在DR中的作用提供动物模型. 方法 构建Hrd1系统表达重组质粒,酶切、测序后显微注射3 p1到685枚C57BL/6小鼠受精卵中,移植到代孕母鼠,得到Hrd1转基因小鼠.利用鼠尾PCR检测法鉴定F0代小鼠的基因型.得到Hrd1基因检测阳性鼠后,使其分别与野生型鼠杂交,得到F1代Hrd1转基因小鼠,取鼠尾组织,用PCR检测法再次鉴定F1代小鼠基因型. 结果 成功构建了Hrd1重组载体,重组质粒pRP.ExBi-EF1 a-Syvn1-IRES-eGFP的全序列测定结果显示,cDNA序列均正确.接受了Hrd1-pcDNA显微注射的685枚受精卵中成活598枚.将存活的受精卵移植到代孕母鼠后共产子鼠41只,获F0代子鼠8只,生理活动均良好.PCR电泳显示339 bp处阳性条带,该基因型可以传递到子代F1.结论 成功构建了Hrd1转基因小鼠.
- 杨硕刘磊万幸王文丰王娟贺恒雷蕾李斌
- 关键词：内质网应激HYDROXYMETHYLACYLCOENZYMEREDUCTASE
- HRD1在糖尿病小鼠视网膜的表达变化被引量：1
- 2015年
- 目的观察羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(Hmg Co A reductase degradation 1,HRD1)在糖尿病小鼠视网膜不同时期的表达变化。方法 STZ诱导的糖尿病C57BL/J小鼠,分别于糖尿病成功造模后1个月、3个月、6个月,选取糖尿病小鼠视网膜组织,利用免疫荧光、Western blot、RT-PCR技术检测HRD1在糖尿病不同时期的表达变化。结果免疫荧光观察到HRD1绿色荧光强度在1个月、3个月、6个月糖尿病小鼠视网膜随糖尿病进程逐渐减弱。Western blot、RT-PCR检测可见在1个月、3个月、6个月糖尿病小鼠视网膜组织HRD1基因水平和蛋白水平表达较对照组均明显减少(m RNA:P1=0.040 5;P2=0.006 2;P3=0.004 1;蛋白:P1=0.010 9;P2=0.001 3;P3=0.000 3)。结论HRD1可能在糖尿病视网膜病变发生发展过程中起到一定作用。
- 杨硕贺恒马思琪朱颖王文丰雷蕾李斌刘磊
- 关键词：糖尿病视网膜病变内质网应激
