杨琨
- 作品数：5 被引量：19H指数：4
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- BMP9联合NGF对C3H10T1/2间充质干细胞骨向分化能力影响的实验研究被引量：4
- 2017年
- 目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)与神经生长因子(NGF)联合处理对间充质干细胞(MSCs)骨向分化的影响。方法:以重组腺病毒法将BMP9导入C3H10T1/2细胞,构建MSCs骨向分化实验模型,设定分组为绿色荧光(GFP)对照组、NGF单独处理组、BMP9单独处理组以及BMP9+NGF联合处理组,分别在处理3 h、12 h、24 h、48 h、3 d、7 d后检测早期成骨分化标志物I型胶原、Runt相关转录因子2(RUNX2)和碱性磷酸酶(ALP)在细胞中的表达。检测方法采用ALP染色、实时定量RTPCR检测mRNA转录水平以及Western blot检测蛋白表达。结果:BMP9+NGF组较各单独处理组ALP活性显著增加,I型胶原、RUNX2的mRNA水平在BMP9+NGF组的表达明显高于其他各单独处理组,且各组在3 h即出现显著差异;RUNX2蛋白在各实验组均表达,BMP9+NGF组表达最高。结论:BMP9联合NGF在成骨诱导间充质干细胞分化早期,协同促进其骨向分化。
- 刘骏宇杨琨李刚王莹莹温秀杰谭颖徽
- 关键词：骨向分化
- 大鼠胚胎下颌磨牙发育初期p75NTR及RUNX2时空表达被引量：2
- 2017年
- 观察p75神经营养受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)及Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)在SD大鼠下颌第一磨牙成牙发育初期不同发育阶段的表达分布情况,并探讨两者在SD大鼠出生后下颌第一磨牙发育矿化的作用。我们首先制备SD大鼠下颌第一磨牙发育初期标本(E13.5 d,E14.5 d,E15.5 d,E16.5 d,E18.5 d和P0.5 d),免疫组织化学检测p75NTR和RUNX2的表达分布情况。并用表达强度差异较大的天数P0.5 d的大鼠外胚间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSC)进行体外矿化诱导,同时本实验采用蛋白质印迹法检测0 d、7 d、14 d和21 d的p75NTR和RUNX2的表达情况。我们发现p75NTR在蕾状期(E13.5 d)开始表达于成釉器旁边的间质;帽状期(E14.5 d,E15.5 d)广泛表达在内釉上皮、釉结、星网状层、牙乳头、牙囊;钟状期(E16.5 d,E18.5 d,P0.5 d)表达在内釉上皮、釉结、星网状层、中间层、牙乳头,牙囊。RUNX2在蕾状期、帽状初期(E13.5 d,E14.5 d)表达在成釉器下方间质;帽状末期(E15.5 d)达在在内釉上皮、釉结、星网状层、牙乳头、牙囊;钟状期(E16.5 d,E18.5 d,P0.5 d)表达在在内釉上皮、釉结、星网状层、中间层、牙乳头、牙囊;在帽状末期到钟状期(E15.5 d,E16.5 d,E18.5 d)RUNX2与p75NTR的表达范围和强度是相似的,但在钟状分化期(P0.5 d)RUNX2的表达范围类似于p75NTR但强度下降。P0.5 d EMSC蛋白质印迹法结果显示:随着矿化诱导时间的上升,p75NTR和RUNX2的表达均呈上升趋势。这些结果提示我们p75NTR和RUNX2在成牙初期不同天数表达位置及变化,具有时空特异性,可能与牙齿矿化发育相关,矿化诱导后变化趋势趋于一致说明二者在SD大鼠成牙发育初期下颌第一磨牙的发育及矿化中都起到一定的作用,可能存在正相关关系。
- 刘畅杨琨李刚温秀杰赵曼竹易青洁唐明
- 关键词：P75NTRRUNX2牙胚发育
- p75NTR敲除对小鼠股骨矿化发育的抑制作用被引量：5
- 2017年
- 目的对比野生型和p75 neurotrophin receptor(p75NTR)敲除小鼠股骨骨质的改变,探讨p75NTR敲除对小鼠股骨矿化发育的影响。方法取同窝p75NTR^(+/+)(野生型)和p75NTR^(-/-)(敲除型)雄性小鼠,出生后8周龄时行股骨Micro-CT扫描,检测股骨松质骨的骨量(BV)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨表面积/骨量(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和皮质骨的骨量(Ct.BV)、骨皮质厚度(Ct.Tb Th)、骨皮质的骨表面积/骨量(Ct.BS/BV);出生后40 d分别取同窝两种基因型雄性小鼠行钙黄绿素荧光双标实验,以检测股骨的矿化沉积速率;提取4周龄大小鼠股骨总RNA及蛋白质,RT-PCR和Western blot检测ALP、Runx2的表达。结果 Micro-CT结果显示:p75NTR^(-/-)小鼠股骨的BV、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Ct.BV、Ct.Tb Th明显低于同窝p75NTR~(^(+/+))小鼠(P<0.05),同时,p75NTR^(-/-)小鼠的BS/BV、Tb.Sp、Ct.BS/BV明显高于p75NTR^(+/+)小鼠(P<0.01);钙黄绿素荧光双标检测结果显示:p75NTR^(-/-)小鼠股骨的矿化速率明显低于同窝p75NTR^(+/+)小鼠(P<0.01);RT-PCR及Western blot结果显示:p75NTR~(^(-/-))小鼠的ALP、Runx2表达均明显低于p75NTR~(^(+/+))小鼠(P<0.01)。结论 p75NTR敲除对小鼠股骨的矿化发育有一定的抑制作用。
- 王莹莹储庆杨琨温秀杰李刚刘骏宇刘畅刘鲁川
- 关键词：神经生长因子受体股骨矿化小鼠
- p75神经营养受体阳性外胚间充质干细胞的体外获取与生物学特性研究被引量：7
- 2015年
- 目的 研究鼠胚胎颌面组织中外胚间充质干细胞（ectomesenchymal stem cells,EMSC）的生物学特性,探讨p75＋EMSC的体外分化及影响因素,为揭示牙齿发生、发育机制提供实验依据.方法 通过提取12.5 d SD鼠胚胎颌面组织,用免疫荧光染色方法显示EMSC的迁移位置;用p75神经营养因子受体标记EMSC,通过流式细胞技术分选出p75＋EMSC,并检测细胞周期和干细胞相关细胞表面抗原.结果 免疫荧光染色结果说明颅神经嵴源性干细胞在鼠胚胎12.5 d迁移到颌突中.p75＋EMSC的阳性分选率为6.1％,细胞呈均匀成纤维细胞形态,生长曲线呈“S”型,在传代过程中S期的比例稳定.细胞特异性标志物CD29、CD146、Stro-1标记p75＋EMSC,其在p75＋EMSC中的表达均较高（＞90％）.结论 SD鼠受孕12.5 d时,胚胎的牙齿启动尚未发生;分选后的p75＋EMSC在传代过程中具有稳定的增殖能力和干细胞特征,尚未开始分化.
- 赵曼竹温秀杰李刚杨琨李琳唐明
- 关键词：间充质干细胞生物学特性
- p75神经营养受体在胎鼠颌突外胚间充质干细胞体外矿化过程中表达变化的研究被引量：8
- 2016年
- 目的 探讨不同胚龄SD大鼠胎鼠颌突外胚间充质干细胞（ectomesenchymal stem cells,EMSC）的体外矿化能力,以及p75神经营养受体（p75 neurotrophin receptor,p75NTR）在矿化过程中的表达变化,揭示p75NTR在牙齿硬组织矿化中的调控作用与机制.方法 分离培养孕12.5 d （E12.5 d）、E15.5 d和E18.5 d的SD大鼠胎鼠颌突EMSC,通过流式检测技术对比各组细胞群的细胞表型;分别对E12.5 d、E15.5 d和E18.5 d的EMSC进行体外矿化诱导,7d后进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性检测,21d后茜素红染色观察矿化结节形成情况,同时采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测0、7、14和21 d的Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor2,RUNX2）、Ⅰ型胶原、ALP和p75NTR的表达情况.结果 细胞表面特异性标志物CD29、CD146和p75NTR在E12.5 d、E15.5 d和E18.5 d的EMSC中均呈阳性表达,CD45为阴性表达,其中p75NTR在E18.5 d的EMSC中阳性表达率为84.04％,高于E12.5 d（22.53％）和E15.5 d（81.43％）;诱导21 d后茜素红染色显示,E18.5 d的EMSC实验组矿化能力较强,ALP活性变化趋势与茜素红染色结果一致;蛋白质印迹法结果显示：RUNX2、Ⅰ型胶原表达量在E18.5d的EMSC实验组（RUNX2：1.92±0.20,Ⅰ型胶原：1.85±0.66）显著高于E12.5 d（RUNX2：0.38±0.02,Ⅰ型胶原：0.33±0.94）和E15.5 d组（RUNX2：0.72±0.22,Ⅰ型胶原：0.64±0.07）（P＜0.05）,p75NTR的表达在诱导21d的实验组（E12.5 d：0.79±0.23、E15.5 d：0.84±0.29、E18.5 d：1.35±0.22）均显著高于相同时间点对照组（E12.5 d：0.42±0.12、E15.5 d：0.43±0.13、E18.5 d：0.48±0.15） （P＜0.05）,其余各组间差异无统计学意义;实时定量PCR结果进一步印证了蛋白质印迹法结果.结论 p75NTR参与EMSC的矿化过程,E18.5 d的EMSC矿化能力最强,p75NTR表达量最高,是牙组织工程较理想的种子细胞.
- 鞠迎新温秀杰杨琨李刚-刘骏宇刘鲁川
- 关键词：间质干细胞矿化
