吴康
- 作品数：7 被引量：31H指数：4
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委医学引导类科技项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素的原核表达及其在结核病血清学诊断中的应用被引量：4
- 2016年
- 目的原核表达与纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)肝素结合血凝黏附素(heparin-binding haemagglutinin adhesion,HBHA),并初步评估其在结核病血清学诊断中的价值。方法采用PCR法从M.tb H37Rv基因组中扩增hbha基因,克隆至原核表达载体p ET-28a(+),构建重组表达质粒p ET-28ah,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组HBHA(r HBHA)蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化后,Western blot法分析其抗原特异性。收集71例确诊的结核病患者和30名健康体检者血清,采用ELISA法检测血清中的抗HBHA Ig A、Ig G抗体水平,并以ESAT-6、Ag85A作为对照抗原,评估r HBHA在结核病血清学诊断中的价值。结果重组表达质粒p ET-28ah经酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,经Ni2+亲和层析柱纯化,可得到高纯度的r HBHA蛋白;纯化的r HBHA蛋白可与小鼠抗His-tag单克隆抗体特异性结合;结核病患者(TB)组血清中抗r HBHA、ESAT-6、Ag85A抗原特异性Ig G水平均显著高于健康对照(HC)组(P<0.05),且TB组的r HBHA抗原特异性Ig A水平也显著高于HC组(P<0.05),而两组间ESAT-6、Ag85A抗原特异性Ig A水平差异无统计学意义(P>0.05);ROC曲线分析显示,r HBHA抗原检测Ig A的诊断效能较好,曲线下面积为0.711,其他两种对照抗原ESAT-6、Ag85A的Ig A诊断效能一般,曲线下面积分别为0.512和0.531。结论 r HBHA抗原用于结核病的诊断效能较好,可作为结核病血清学诊断的备选抗原之一。
- 问寒利李海聪李根赵慧敏施理敏韩伟靖吴康范小勇
- 关键词：结核分枝杆菌免疫学诊断
- 结核潜伏性感染相关抗原的临床应用研究进展
- 据世界卫生组织报告显示全球约三分之一的人口感染结核分枝杆菌(Mtb),且其中绝大部分为结核潜伏性感染(LTBI).当机体抵抗力低下时,潜伏感染的Mtb被激活、增殖、播散并最终发展成为活动性结核.Mtb在潜伏感染时通过上调...
- 吉萍范小勇吴康卢水华
- 关键词：结核分枝杆菌Γ-干扰素免疫疫苗
- 文献传递
- 基于常规引物靶向结核分枝杆菌Ⅱ型分枝杆菌散在重复单位的恒温扩增
- 2020年
- 目的探讨基于特异常规引物(即引物不需折叠成特定二级结构)靶向恒温扩增重复DNA序列的方法,并测试其检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)的可能性。方法以合成的重复DNA或以抽提的细菌基因组DNA为模板,用Bst 2.0 WarmStart DNA聚合酶进行恒温扩增。用琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。结果合成的重复DNA可用其特异常规引物进行恒温扩增。进一步,Mtb H37Rv Ⅱ型分枝杆菌散在重复单位(mycobacterial interspersed repetitive units,MIRUs)可用其特异常规引物对(即Ⅱ_MIRU-F和Ⅱ_MIRU-R)或单引物(即Ⅱ_MIRU-F)进行恒温扩增。相比于非分枝杆菌菌株、非结核分枝杆菌菌株、Mtb复合物菌株和临床分离株,Ⅱ_MIRU-F能够高特异地扩增Mtb菌株。Ⅱ_MIRU-F针对Mtb H37Rv基因组DNA的检测下限较高,且不能特异地区分Mtb阴性痰液样本和Mtb阳性痰液样本。结论常规引物可恒温扩增重复DNA序列(包括MtbⅡ型MIRUs);MtbⅡ型MIRUs特异引物Ⅱ_MIRU-F不适合用于痰液样本的检测。
- 吴康屈蓉王刚薛清华吕建新Douglas BLowrie范小勇
- 关键词：结核分枝杆菌
- 人巨噬细胞应答结核分枝杆菌感染的基于分子网络的干扰素相关基因集鉴定
- 对于显著调变基因/蛋白的相互作用网络分析主要依赖于这些基因/蛋白之间的直接相互作用.然而,基于显著调变基因/蛋白直接相互作用的分析可能导致丢失一些通过关键节点基因/蛋白(虽然其未发生显著调变)而间接相互作用的显著调变基因...
- 吴康Douglas B.Lowrie黄家颖卢水华范小勇
- 结核分枝杆菌早期分泌蛋白MPT64的原核表达及其在结核病血清学诊断上的初步应用被引量：10
- 2021年
- 目的原核表达、纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)早期分泌蛋白MPT64,并初步评估其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值。方法PCR扩增Mtb标准菌株H37Rv mpt64基因,克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组质粒pET28a-mpt64,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,进行重组蛋白的原核诱导表达及纯化。将600μg纯化的MPT64蛋白经皮下多点免疫新西兰大白兔,隔周免疫1次,共4次,末次免疫2周后,耳缘静脉采血分离血清,ELISA法检测血清效价,Western blot法鉴定抗原特异性。收集44例TB确诊患者(TB组)和36名健康对照人群[HC(healthy control)组]血清,间接ELISA法检测血清中MPT64抗原的特异性IgG、IgA抗体水平,抗原对照为Gro ES和Ag85A。结果重组表达质粒pET28a-mpt64经双酶切鉴定及测序证明构建正确;表达的重组MPT64蛋白主要以包涵体形式存在,部分以可溶性形式存在,经Ni2+-NTA亲和纯化后,纯度可达90%,蛋白浓度约2.0 mg/m L;MPT64兔多克隆抗血清效价达1∶2048000,纯化的MPT64蛋白可与其发生反应,在相对分子质量约24000处可见特异性蛋白条带;TB组血清中MPT64抗原特异性IgG和IgA水平均显著高于HC组(P<0.05),而Gro ES、Ag85A抗原特异性IgA和IgG水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组MPT64蛋白具有较好的血清学诊断效能,可作为TB血清学早期诊断的候选抗原之一。
- 屈蓉吴康吴娟范小勇范小勇
- 关键词：结核分枝杆菌MPT64免疫学诊断血清学诊断
- 氧化应激与结核病被引量：5
- 2017年
- 氧化应激是指机体内产生过多的氧化物质,超出其抗氧化能力而引起的一种氧化与抗氧化失衡状态。结核病是由结核分枝杆菌感染引起的一种慢性炎症疾病,其感染程度及炎症反应的发生发展与氧化应激水平具有密切关系。正确认识并了解氧化应激与结核病之间的关系,不仅可为结核病诊断提供一些新型生物标志物或新思路,对于结核病的治疗及预后监测也具有重要的临床意义。
- 李春玲李春玲吴康
- 关键词：氧化物抗氧化物氧化应激结核病预后监测
- 结核分枝杆菌潜伏性感染相关抗原的研究进展被引量：12
- 2015年
- 结核病（Tuberculosis， TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis， Mtb）感染引起的传染性疾病。全世界范围内约1／3的人为结核分枝杆菌潜伏性感染（ latent TB infection， LTBI），其中10％的LTBI感染者最终会发展为活动性结核［1］。 LTBI感染者体内的Mtb通常以休眠菌的形式存在巨噬细胞内，通过改变自身特征和代谢途径适应宿主体内环境长期存活于人体内。
- 吉萍范小勇吴康卢水华
- 关键词：结核分枝杆菌相关抗原TUBERCULOSISTUBERCULOSISLTBI体内环境传染性疾病
