杜萍
- 作品数：4 被引量：15H指数：1
- 供职机构：广西医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人类microRNA-1246慢病毒抑制载体的构建以及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的:构建microRNA-1246慢病毒抑制载。方法针对microRNA-1246成熟体的反义核苷酸片段,应用基因重组技术将目的基因片段克隆到GV280慢病毒载体中,通过酶切、PCR、DNA测序验证重组克隆的成功构建,将GV280-mir-1246down、Helper1.0、Helper2.0共转染293T细胞获得重组慢病毒,浓缩提纯病毒液并检测病毒滴度,用病毒液感染siha细胞,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)验证GV280-mir-1246down在siha细胞的表达情况,用嘌呤霉素筛选GV280-mir-1246down稳转细胞株。用细胞计数的方法检测细胞的生长率。结果①对菌落进行PCR鉴定筛选出构建正确的慢病毒载体,DNA测序证实插入的基因序列正确;②GV280-mir-1246down、Helper1.0、Helper2.0共转染293T细胞产生重组慢病毒;③目的mir-246down被慢病毒成功导入siha细胞中,同时达到稳定表达,转到率几乎达100%,荧光显微镜下能直接观察到GFP;④细胞计数结果显示在siha细胞中microRNA-1246的下调细胞的生长速度减弱。结论成功构建microRNA-1246慢病毒抑制载体,建立siha细胞mir-1246-down的稳转株,microRNA-1246在siha细胞中下调的siha细胞的增殖能力下降.这为研究microRNA-1246在宫颈鳞癌siha细胞的作用及其机制提供了可靠的基础。
- 赖月华姚德生杜萍卢艳
- 关键词：慢病毒载体MICRORNA宫颈癌细胞增殖
- 宫颈癌组织miR-574-5p的表达及其下调后对宫颈癌SiHa细胞的影响被引量：14
- 2015年
- 目的探讨宫颈癌患者组织中miR-574-5p的表达及其下调时对宫颈癌Si Ha细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法用实时荧光定量PCR测定80例宫颈癌组织中miR-574-5p水平。将miR-574-5p抑制物转染宫颈癌Si Ha细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Tanswell迁移实验检测细胞侵袭能力。结果宫颈癌组织中miR-574-5p相对表达水平高于正常宫颈组织(P<0.05);高表达的miR-574-5p与肿块大小、临床分期、病理分级和淋巴结转移有关(P<0.05);转染miR-574-5p抑制物组与空白组及阴性对照组相比,Si Ha细胞增殖能力下降(P<0.05);细胞凋亡率明显增加(P<0.05);转染后细胞穿膜能力明显减弱(P<0.05)。结论 miR-574-5p的高表达与宫颈癌的进展有关,下调miR-574-5p的表达抑制了宫颈癌Si Ha细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,有望成为宫颈癌基因治疗的靶点。
- 任菲陈军莹杜萍丁楠赵珊姚德生
- 关键词：宫颈癌凋亡
- 宫颈鳞癌患者血清miRNA-574-5p的水平及其诊断价值
- 2015年
- 目的研究宫颈鳞癌患者血清miRNA-574-5p的表达情况及其在宫颈鳞癌诊断中的应用。方法采集80例初治宫颈鳞癌患者及20例体检健康妇女的血清标本,提取RNA后采用实时荧光定量PCR检测血清miRNA-574-5p水平,并绘制ROC曲线图;采用Spearman秩相关分析miRNA-574-5p水平与宫颈鳞癌临床病理特征的关系。结果宫颈鳞癌患者血清中miRNA-574-5p相对表达水平高于正常对照组(P<0.05);ROC曲线下面积0.801,最大约登指数为0.49,灵敏度74%,特异度75%,对应诊断界值为2.83。宫颈癌患者血清miRNA-574-5p相对表达水平与宫颈癌的临床分期、病理分级及肿瘤大小呈正相关(P<0.05),而与年龄无显著相关性(P>0.05)。结论宫颈癌患者miRNA-574-5p相对表达水平增高,为宫颈癌的临床诊断提供了重要参考,具有重要的临床应用价值。
- 任菲姚德生陈军莹丁楠杜萍
- 关键词：宫颈癌鳞癌
- 人类微小RNA-1246慢病毒抑制载体的构建及对宫颈鳞癌细胞增殖和侵袭的影响
- 2016年
- 目的构建并鉴定微小RNA(miRNA)-1246慢病毒抑制载体,并探讨miRNA-1246下调对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响。方法针对miRNA-1246成熟体的反义核苷酸片段设计引物并合成目的基因miRNA-1246-down,应用基因重组技术将目的基因克隆到空载质粒GV280中,通过酶切、PCR、DNA测序验证重组慢病毒质粒(GV280-miRNA-1246-down)的构建是否成功,将GV280-miRNA-1246-down、Helper 1.0、Helper 2.0共转染293T细胞获得重组慢病毒,浓缩提纯病毒液并检测病毒滴度,再用重组病毒液感染宫颈鳞癌细胞Si Ha,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)验证GV280-miRNA-1246-down在Si Ha细胞的表达情况,用嘌呤霉素筛选GV280-miRNA-1246-down稳转细胞株。将Si Ha细胞分为空白组(NC组)、阴性病毒组(NC-LV组)、miRNA-1246下调组(miRNA-1246-down-LV组),用细胞计数的方法检测细胞的生长率,用Transwell检测细胞侵袭能力。结果 (1)对菌落进行PCR鉴定筛选构建正确的慢病毒载体,DNA测序证实插入的基因序列正确。(2)慢病毒将目的基因miRNA-1246-down成功导入Si Ha细胞中,同时达到稳定表达,转染率达90%以上,在荧光显微镜下能直接观察到GFP。(3)miRNA-1246-down-LV组Si Ha细胞增殖数低于其他两组(P<0.05),细胞穿膜次数较其他两组减少(P<0.05)。结论 miRNA-1246慢病毒抑制载体构建成功,miRNA-1246稳定下调的Si Ha细胞株建立成功。在Si Ha细胞中miRNA-1246下调可抑制宫颈鳞癌Si Ha细胞的增殖以及侵袭能力。
- 赖月华姚德生杜萍卢艳
- 关键词：宫颈癌慢病毒微小RNA增殖
