王亚凤
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 胭脂鱼IgM重链基因克隆与表达分析被引量：1
- 2016年
- 目的认识胭脂鱼IgM的结构与功能,研究其免疫应答规律。方法通过同源克隆和RACE技术构建胭脂鱼IgMμcDNA全长,重组表达恒定区序列并制备抗血清,分别从mRNA水平和蛋白水平检测胭脂鱼IgM各组织及发育早期的表达情况;利用抗血清探究经灭活嗜水气单胞菌免疫后胭脂鱼IgM免疫应答规律。结果获得胭脂鱼IgμcDNA全序列,长2028 bp,编码580 aa,重组表达IgMμCH_(1-4)区,获得相对分子质量约45 000的重组蛋白,成功制备rIgM多抗,免疫印迹分析可见,anti-rIgM抗血清能够特异性识别rIgM和胭脂鱼血清IgM;各组织RT-PCR结果表明,被检测组织除肌肉、皮肤和心脏外均有IgM表达;发育各时期RT-PCR结果显示,胭脂鱼卵中含有IgM转录本,出膜第30天可明显检测到IgM表达。Western blot检测结果表明,免疫相关组织IgM含量均较高,心脏、皮肤未检测到IgM转录本,却含有大量的IgM蛋白,脑和肌肉始终未检测到IgM蛋白。灭活嗜水气单胞菌免疫实验表明,胭脂鱼在初次免疫第21天菌特异性IgM滴度有明显变化,加强免疫后迅速升高,并在最高滴度维持2个月后缓慢降低。结论成功获得濒危物种胭脂鱼IgMμcDNA全序列及anti-IgM多克隆抗体,为胭脂鱼免疫球蛋白结构分析、免疫监测及抗原诊断提供有力工具。
- 王亚凤张小萍李焕王志坚
- 关键词：胭脂鱼IGM抗血清嗜水气单胞菌
- 尼罗罗非鱼IgM重链基因的克隆及其抗血清的制备被引量：3
- 2015年
- 目的进一步认识尼罗罗非鱼免疫球蛋白的结构与功能。方法采用RACE-PCR技术克隆免疫球蛋白M重链c DNA全长,并将其CH2-4与PSUMO构建重组表达载体,诱导表达、纯化后,免疫小鼠获得抗血清,用ELISA及免疫印迹检测抗体的特性。结果经分析该序列含1919nt,编码514个氨基酸。纯化蛋白经SDS-PAGE电泳显示得到了相对分子质量为36 200的目的蛋白。ELISA及免疫印迹检测表明抗血清能特异识别尼罗罗非鱼血清中IgM。结论成功获得的尼罗罗非鱼IgM cDNA序列及其抗体制备,为其免疫系统的研究及相关免疫检测奠定了基础。
- 张武凤张小萍王亚凤魏静
- 关键词：尼罗罗非鱼IGM抗血清
