李双
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- RT-PCR检测鼻咽癌患者外周血细胞以及癌组织细胞中CK18和CK19基因的表达
- 2015年
- 目的:通过检测CK18和CK19在鼻咽癌患者外周血细胞和癌组织细胞中的表达情况,判断其是否可以作为鼻咽癌的肿瘤标志物辅助诊断鼻咽癌。方法:分别提取45例鼻咽癌患者的外周血样本中的有核细胞和癌组织细胞中的mRNA,逆转为cDNA,设计CK18、CK19和GAPDH引物进行RT-PCR,检测其表达情况。结果:在不同性别、年龄以及转移与否的鼻咽癌患者癌组织细胞中CK18和CK19基因的表达的均差异无统计学意义(P>0.05),而在不同病理分期的鼻咽癌患者癌组织细胞中,CK18和CK19基因表达随着恶性程度的增高而增高,且均差异有统计学意义(P<0.05);在对鼻咽癌患者的外周血中的CK18和CK19基因检出率结果显示,CK18的检出率为64%,CK19的检出率75%,年龄大于60岁的患者检出率高于年龄小于60岁的,随着病理检测其恶性程度的增高,CK18和CK19的检出率也相应增高,鼻咽癌转移的患者血液中CK18和CK19的检出率远高于非转移患者。结论:CK18和CK19是可能有潜力作为鼻咽癌诊断的肿瘤标志物。
- 黄铄李双彭涛吴婷婷宋鹏周绪红
- 关键词：CK18CK19鼻咽癌
- Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的：构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法：从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivinshRNA。phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2、pU6-HK-shRNA质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和酶切位点,而phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2均含有红色荧光基因作为报告基因和酶切位点。质粒酶切、电泳、测序鉴定;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞,荧光显微镜下观察、摄片、计数阳性细胞,计算转染效率,激光共聚焦显微镜检测质粒载体绿色和红色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测真核表达质粒对相应蛋白的抑制率。结果：荧光显微镜下计算转染效率显示在转染鼻咽癌细胞CNE2 48h转染率高达45.00%-57.45%;质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2和pU6-HK-shRNA酶切后均可见400bp条带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达相应荧光;免疫印迹检测phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivin-shRNA2对鼻咽癌CNE2细胞相应蛋白抑制率分别是33.00±1.41、38.31±1.01（survivin）、36.33±1.21和43.26±1.02（cdk1）。结论：本实验构建了靶向Cdc2/cdk1mRNA和survivin mRNA的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞,phU6-cdc2/cdk1-shRNA2和phU6-survivin-shRNA2与phU6-cdc2/cdk1-shRNA1和phU6-survivin-shRNA1相比,转染CNE2 48h后其对相应蛋白的干扰率相对较高。
- 朱俊袁玉林彭涛陈树黄铄李双
- 关键词：RNA干扰SURVIVIN
- 主观性和客观性良性阵发性位置性眩晕的序贯治疗疗效评价被引量：2
- 2016年
- 目的：探讨主观性与客观性良性阵发性位置性眩晕（S-BPPV及O-BPPV）的序贯治疗疗效的差异。方法：回顾性分析2014—01—2015～07期间诊治的19例垂直半规管S-BPPV（A组）与45例垂直半规管O—BPPV（B组）患者的资料，评价其序贯治疗的疗效，同时报道5例水平半规管S-BPPV的序贯治疗疗效。结果i首次耳石复位次数A组为2～6次，平均（4．21±1．18）次；B组为2～3次，平均（2．29±0．46）次；复位次数A组比B组多，差异有统计学意义（P〈0．01）。A组首次治疗有效率为78．9％（15／19），B组为82．2％（37／45）；序贯治疗1周后A组有效率为89．5％（17／19），B组为88．9％（40／45）；2组间均差异无统计学意义（P〉0．05）。随访3个月后A组1例（5．3％）复发，B组2例（4．4％）复发，差异无统计学意义（P〉0．05）。5例水平半规管孓BPPV患者全部治愈。结论：序贯治疗对垂直半规管S-BPPV与O-BPPV或具有同样疗效，但S-BPPV首次耳石复位次数更多。水平半规管S-BPPV可用耳石复位加药物和仰卧位摇头法序贯治疗。
- 李双王庆董洁周绪红
- 关键词：良性阵发性位置性眩晕眼震半规管耳石
- 嵌合分子靶向降解鼻咽癌细胞表皮生长因子受体的实验研究被引量：2
- 2017年
- 目的:检测合成的蛋白靶向嵌合分子(EGF-PROTAC)通过泛素-蛋白酶体途径体外对人鼻咽癌CNE-2细胞表皮生长因子受体(EGFR)靶向降解作用,并证实对该细胞增殖、凋亡的影响。方法:EGF-PROTAC处理细胞后,应用Western blot技术分析EGFR蛋白表达水平;CKK-8、流式细胞术、Transwell侵袭实验检测EGF-PROTAC对CNE-2产生的生物学效应。结果:Western blot技术显示EGF-PROTAC组EGFR蛋白的表达水平显著低于对照组(P<0.05);CKK-8法显示EGF-PROTAC组3、6、9、12hCNE-2细胞存活率显著低于溶剂对照组(P<0.05);流式细胞术显示EGF-PROTAC组细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.05);Transwell法显示EGF-PROTAC组CNE-2细胞侵袭到Transwell小室滤膜下细胞数显著低于溶剂对照组(P<0.05)。结论:EGF-PROTAC能够靶向降解CNE-2细胞的EGFR,在体外能抑制鼻咽癌细胞的生长、促进凋亡。
- 董洁李双王庆肖伟尹述成
- 关键词：鼻咽肿瘤嵌合分子泛素化表皮生长因子受体
