杨秀环
- 作品数：7 被引量：40H指数：3
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- Tat-LK15运载siRNA沉默RGC-5神经细胞nNOS基因的实验研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨离体条件下细胞穿透肽Tat-LK15运载小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默RGC-5视神经节细胞(retinal ganglion cell line,RGC-5)神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,n NOS)基因的可行性,为在体条件下研究Tat-LK15运载siRNA沉默n NOS表达治疗神经病理性疼痛提供理论依据。方法 1通过凝胶阻滞分析测定Tat-LK15与siRNA的最佳交联比。流式细胞术检测Tat-LK15/FAM-siRNA以最佳交联比转染RGC-5细胞的转染效率;不同剂量Tat-LK15(1、2.5、5、10和20μg)孵育RGC-5细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率。2制备n NOS高表达的RGC-5细胞模型。3将RGC-5细胞随机分为5组:对照组、模型组、Tat-S组(Tat-LK15运载n NOS/siRNA转染模型细胞)、Lipo-S组(LipofectamineTMRNAi MAX运载n NOS/siRNA转染模型细胞)及Tat-N组(Tat-LK15运载NCsiRNA转染模型细胞),通过Q-PCR及Western blot检测各组nN OS表达水平。结果 Tat-LK15与siRNA质量比为2∶1时可完全包裹siRNA,达到最佳交联,此时其转染效率为(84.4±3.9)%。当Tat-LK15剂量为20μg(6.1μmol·L-1)时才出现一定细胞毒性,细胞凋亡率高于对照组[(10.3±1.1)%vs(7.4±0.9)%,P<0.05]。造模后RGC-5细胞nN OS表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,Tat-S组nN OS mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),Tat-S组与Lipo-S组相比无差异(P>0.05)。结论Tat-LK15能高效转染siRNA,细胞毒性低,离体条件下可有效运载siRNA沉默nN OS的基因表达。
- 彭捷饶云陆建华吴昊澎杨秀环屠伟峰
- 关键词：细胞穿透肽TATSIRNA神经型一氧化氮合酶神经病理性疼痛
- 基于多肽阵列技术构建的细胞穿膜肽靶向抑制炎性痛大鼠NR2B磷酸化
- 2017年
- 目的我们已经基于多肽阵列技术构建了可以靶向抑制Fyn与PSD95相互作用的穿膜短肽Fyn P,本实验旨在验证Tat-LK15运载此短肽抑制炎性痛大鼠NMDA受体3B亚基(NR2B)磷酸化进而治疗炎性疼痛的可行性。方法 Tat-LK15与Fyn P短肽连接形成稳定的细胞穿膜肽Tat-LK15/Fyn P,乱序Fyn P作为对照(Tat-LK15/m Fyn P);然后检测腹腔注射Tat-LK15/Fyn P对完全弗氏佐剂(CFA)炎性痛模型大鼠脊髓背角(SCDH)Fyn与PSD-95的相互作用的影响,并且测定SCDH磷酸化NR2B(p-NR2B)表达水平的变化,另外测定腹腔注射此复合物后炎性痛大鼠机械缩足反射阈值(MWT)及热缩足反射持续时间(TWL)的变化。结果 Tat-LK15/Fyn P注射后3 d,炎性痛模型大鼠SCDH Fyn与PSD-95的结合受到抑制,Fyn P及Tat-LK15/m Fyn P无此作用,炎性疼痛大鼠p-NR2B蛋白水平的表达下降51%(P<0.01),Fyn P及Tat-LK15/m Fyn P注射后p-NR2B后的表达无明显变化。Tat-LK15/Fyn P腹腔注射后3、7、14及21 d炎性痛大鼠的MWT显著增高,TWL显著缩短(P<0.01),Fyn P及Tat-LK15/m Fyn P无此治疗作用。结论 Tat-LK15可有效运载此短肽抑制慢性炎性痛大鼠Fyn与PSD95相互作用,从而抑制NR2B的磷酸化激活,进而对炎性疼痛大鼠具有治疗作用。
- 李建玉杨秀环马家慧陆建华
- 关键词：炎性疼痛
- Tat-LK15介导siRNA干扰大鼠脊髓背角nNOS表达对神经病理性疼痛的治疗作用被引量：3
- 2017年
- 目的探讨细胞穿透肽Tat-LK15介导siRNA干扰大鼠脊髓背角神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达对神经病理性疼痛的治疗效应。方法采用Tat-LK15介导FAM-siRNA转染原代大鼠脊髓背角神经元细胞(RN-dsc),于倒置荧光显微镜观察其转染效果。健康雄性SD大鼠50只,随机分为5组(n=10):正常组、假手术组、神经病理性疼痛组(SNL组)、Tat-LK15-nNOS siRNA组(TS组)和Tat-LK15-NC siRNA组(TN组)。采用脊神经结扎法(SNL)制作神经病理性疼痛模型,正常组不予任何处理,假手术组仅暴露脊神经;SNL组、TS组、TN组构建SNL模型同时鞘内置管,于第7天开始每天分别鞘内注射10μl生理盐水、10μl含5μg siRNA的Tat-LK15-nNOS siRNA和Tat-LK15-NCsiRNA,持续7d。建模前1d及建模后3、7、10、14d测定各组大鼠机械缩足反应阈值(PWMT)及热缩足反应潜伏期(PWTL)。第14天测定结束后取L4-6节段脊髓,采用q-PCR及Western blotting检测脊髓背角nNOS表达水平。结果倒置荧光显微镜观察显示,Tat-LK15可成功介导siRNA转染原代大鼠脊髓背角神经元。与假手术组比较,SNL组建模后第3天起PWMT降低、PWTL缩短,脊髓背角nNOS mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),正常组上述指标与假手术组比较差异无统计学意义;与SNL组比较,TS组第10、14天时PWMT增高、PWTL延长,脊髓背角nNOS mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),TN组上述指标与SNL组比较差异无统计学意义。结论 Tat-LK15可成功介导nNOS siRNA转染脊髓背角神经元,沉默nNOS基因的过度表达,对SNL大鼠神经病理性疼痛具有一定的治疗作用。
- 饶云彭捷陆建华吴昊澎杨秀环屠伟峰
- 关键词：神经元型一氧化氮合酶神经病理性疼痛
- Fyn对N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基磷酸化调节及其在慢性疼痛中的作用研究进展
- 2016年
- 背景 脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-asparate,NMDA）受体的过度活化是慢性疼痛中枢敏化的关键环节之一.近年研究证明,非受体依赖的酪氨酸蛋白激酶Fyn能与NMDA受体（NMDA receptors,NR）调节亚基NR2B上的衔接蛋白相互作用,调节NR2B的酪氨酸磷酸化,进而调节NR的活性. 目的 进一步阐明慢性疼痛的发生机制,寻找新的疼痛治疗药物. 内容 对Fyn调节NR2B磷酸化的机制及其在慢性疼痛中枢敏化的重要作用进行综述. 趋向 干预Fyn调节的NR2B磷酸化有望成为慢性疼痛治疗的新靶点.
- 杨秀环陆建华屠伟峰
- 关键词：慢性疼痛
- 右美托咪定对瑞芬太尼持续输注下腹腔镜胆囊切除术患者机械痛觉阈值的影响被引量：32
- 2015年
- 目的:观察右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对瑞芬太尼为镇痛药的全麻腹腔镜胆囊切除术患者机械痛觉域值的影响,明确Dex是否可以预防此类患者的痛觉过敏。方法:择期行腹腔镜胆囊切除手术患者120例,随机分为3组:右美托咪定组(D组)、帕瑞昔布钠组(P组)和对照组(C组)。各组麻醉维持用药为异丙酚及瑞芬太尼,D组加用Dex,P组加用帕瑞昔布钠,C组不使用Dex及帕瑞昔布钠。观察患者术后2、4、8、12、24、48 h的机械痛觉域值及视觉模拟评分(VAS)。结果:C组各时相点的痛觉阈值较术前显著下降(P<0.01);P组仅术后12、24、48 h的痛觉阈值下降(P<0.05);D组术后机械痛域值与术前相比差异无统计学意义(P>0.05)。与C组比较,D组术后机械痛觉阈值皆增高,P组仅术后2、4、8 h的机械痛觉阈值增高;与P组比较,D组的机械痛觉阈值在术后12、24、48 h增加。与术前相比,各组术后各时间点的VAS值升高(P<0.05),患者术后VAS值与机械痛觉阈值无相关性。结论:右美托咪定可以抑制瑞芬太尼麻醉下腹腔镜胆囊切除术患者的痛觉过敏,其抑制作用的持续时间优于帕瑞昔布钠。
- 李建玉杨秀环董文芳陆建华
- 关键词：瑞芬太尼
- 基于多肽阵列技术构建穿膜肽靶向抑制Fyn与突触后致密物蛋白95相互作用的实验研究被引量：3
- 2016年
- 目的探讨基于多肽阵列技术合成的穿膜肽离体条件下抑制非受体酪氨酸激酶Fvn与突触后致密物蛋白（postsynaptic density protein，PSD）95相互作用，进而抑制含N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（N-methyl D-aspartate receptor subtype2B，NR2B）的N-甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl D-aspartate receptor，NMDAR）过度磷酸化，减轻慢性疼痛的可行性。方法①通过多肽阵列技术的overlapping平台确定Fyn的SH2结构域与PSD95的PDZ3结构域相互作用的结合基序，合成含此结合基序的短肽FynP，并与人类免疫缺陷病毒human immunodeficiencv virus，HIV）．Tat蛋白转导结构域连接形成可进入细胞的穿膜肽FynP-Tat，同时合成乱序穿膜肽mFynP-Tat。②原代培养sD大鼠胎鼠脊髓背角神经元，通过免疫荧光检测不同浓度组（10、20、30μmol/L）多肽内化细胞的效率。③用CCK8法检测不同浓度（10、20、100μmol／L）穿膜肽分别孵育神经细胞（6、24、48h）的细胞毒性。④将神经细胞分为穿膜肽组（FynP-Tat组）、乱序穿膜肽组（mFynP-Tat组）和PBS组（对照组）进行孵育，用谷胱甘肽转移酶（glutathione S-transferase，GST）pull-down和Western blot验证抑制Fvn与PSD95相互作用的效率。结果①通过overlapping确定Fyn与PSD95相互作用的结合基序为KGAYSL。②与FynP-Tat10μmol／L组[（77．3±1．4）％]比较，FvnP-Tat20μmol／L组[（91．5±2．0）％]和FvnP-Tat30μmol／L组[（93．4±2．2）％]的内化效率较高，差异有统计学意义（P〈0．05）；与mFynP-Tat10μmol／L组[（75．0±3．6）％]比较，mFynP-Tat20μmol／L组[（91．4±1．3）％]和mFynP-Tat30μmol／L组[（92．7±2．1）％]的内化效率较高，差异有统计学意义（P〈0．05）；③与FynP-Tat（100μmol／L，6h）组[（82．5±3．0）％]比较，FynP．Tat（100μmol／L，24h）组和FynP-Tat（100μmol／L，48h）组细胞活力[（75．1±1．5）％和（68．5±1．2）％]降
- 杨秀环马彤彤李舒愉贾济彭捷陆建华屠伟峰
- 关键词：蛋白转导结构域
- 鞘内注射细胞穿膜肽Tat-FynP对大鼠炎性痛的影响
- 2016年
- 目的 评价鞘内注射细胞穿膜肽Tat-FynP对炎性痛大鼠的影响.方法 健康雄性SD大鼠80只,6～8周龄,体重180～ 220 g,采用随机数字表法分为5组（n=16）：对照组（C组）、炎性痛组（IP组）、短肽FynP组（FynP组）、Tat-FynP组和乱序细胞穿膜肽mTat-FynP组（mTat-FynP组）.IP组、FynP组、Tat-FynP组和mTat-FynP组采用右后足趾皮下注射完全弗氏佐剂100μl的方法制备大鼠炎性痛模型,C组给予等容量生理盐水.于造模后1d时,FynP组、Tat-FynP组和mTat-FynP组分别鞘内注射FynP、Tat-FynP、mTat-FynP各15μl.每组取10只大鼠,分别于造模前和造模后1、3、5、7、10、14d时测定机械缩足反应阈（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）.鞘内给药后1d时每组取6只大鼠,采用Western blot法测定脊髓磷酸化含2B亚基的NMDA受体（p-NR2B）的表达水平.结果 与C组比较,IP组、FynP组、Tat-FynP组和mTat-FynP组造模后各时点MWT降低,TWL缩短,脊髓组织p-NR2B表达上调（P＜0.01）;与IP组比较,Tat-FynP组造模后3～14d时MWT升高,TWL延长,脊髓组织p-NR2B表达下调（P＜0.01）,FynP组和mTat-FynP组上述各指标差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 鞘内注射细胞穿膜肽Tat-FynP可减轻大鼠炎性痛.
- 马彤彤杨秀环何洹陆建华
- 关键词：炎症疼痛
