丁妍
- 作品数：9 被引量：9H指数：2
- 供职机构：湖北医药学院附属太和医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项贵州省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 酸性环境抑制CIK细胞对肝癌HepG2细胞的杀伤活性被引量：1
- 2016年
- 目的研究酸性环境对CIK(cytokine-induced killer,CIK)细胞杀伤肝癌HepG2细胞的影响。方法利用IFN-γ、IL-2及CD3抗体诱导外周血单个核细胞获得CIK细胞。在pH6.5及pH7.4条件下将CIK细胞和荧光素酶标记的HepG2细胞(HepG2-luc)按不同的效靶比混合培养,用小动物活体成像系统检测HepG2-luc荧光强度并计算杀伤活性,用MTT法检测并计算杀伤活性。在pH6.5及pH7.4条件下,在含CIK条件培养液0、50%和100%的情况下培养HepG2细胞,流式细胞仪检测凋亡坏死的细胞比例。结果 pH7.4时CIK细胞对HepG2细胞的杀伤率明显高于pH6.5时。CIK条件培养液作用下,pH7.4时HepG2细胞的凋亡坏死比例明显高于pH6.5。结论酸性环境明显抑制了CIK细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤活性。
- 袁雅红郭兴荣于莉王小莉丁妍李东升
- 关键词：CIKHEPG2杀伤活性
- TALEN介导的CXCR4敲除肝癌细胞株的建立被引量：1
- 2016年
- 通过TALEN打靶建立CXCR4的细胞株,旨在研究CXCR4对肝癌的影响。选用肝癌细胞株Hep G2,采用转录激活样效应物核酸酶(TALEN)干扰细胞中CXCR4的表达。构建的CXCR4 TALEN质粒转入Hep G2细胞,通过T7E1酶切确定打靶效率为40%,并通过测序筛选出了CXCR4敲除的单克隆细胞,免疫荧光和Western blot进一步证实CXCR4基因表达显著下调。
- 张文美丁妍郭兴荣李东升赵万红王小莉
- 关键词：TALENCXCR4肝癌基因打靶
- 脐带间充质干细胞支持脐血单个核细胞冻存复苏后的体外生长被引量：2
- 2015年
- 目的:研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,h UC-MSC)对冻存复苏后脐血单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)体外生长的支持作用,以提高冷冻损伤后的造血细胞在体外的生存率。方法:用组织块培养法分离获得h UC-MSC,流式细胞仪检测其表面分子并诱导分化进行鉴定。分两组培养冻存复苏后的脐血MNCs:一组以h UC-MSC为滋养层共培养,另一组单独培养。光镜下观察两组MNCs密度。培养第10天,流式细胞仪检测两组造血细胞的百分比,并计数MNCs总数和造血细胞数进行对比。结果:成功分离培养获得h UC-MSC,符合各项鉴定标准。共培养组MNCs总数、CD45、CD14及CD19阳性造血细胞数均明显多于单培养组。结论:h UC-MSC可有效支持冻存复苏后脐血MNCs的体外生长。
- 袁雅红王小莉郭兴荣丁妍李东升
- 关键词：人脐带间充质干细胞脐血单个核细胞造血细胞冻存
- CXCR4表达上调对U251细胞增殖、侵袭、迁移的影响
- 2016年
- 目的探讨CXC趋化因子-4受体(CXCR4)表达上调对U251细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法构建携带CXCR4基因的质粒,采用电转染法将携带CXCR4基因的质粒整合到胶质瘤U251细胞的基因组中,然后将细胞分为空白对照组、阴性对照组和CXCR4上调组,分别从m RNA水平和蛋白水平检测CXCR4及其他相关基因的表达;MTT试验检测细胞增殖能力的改变;划痕试验检测细胞的迁移能力;Transwell侵袭试验检测细胞侵袭性的变化。结果与空白对照组和阴性对照组相比,CXCR4上调组U251细胞CXCR4在m RNA和蛋白水平上表达都增强,细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著增强;而空白对照组和阴性对照组之间并无明显变化。结论 CXCR4在胶质瘤的增殖、侵袭、迁移行为中发挥着重要的作用,可以被视为胶质瘤治疗的靶向基因。
- 李成林丁妍于爱清杨艳芳李东升
- 关键词：U251细胞CXC趋化因子受体4细胞增殖细胞侵袭
- NSUN2对阿霉素诱导H9C2细胞损伤的作用及机制
- 2023年
- 目的:探讨NSUN2对阿霉素(doxorubicin, DOX)诱导H9C2细胞损伤的作用及可能机制。方法:H9C2细胞分两组,对照组(加入0.9%氯化钠溶液2μL)和DOX组加入用0.9%氯化钠溶液配置成0.5 mg/mL阿霉素2μL、siNSUN2转染H9C2细胞、腺病毒转染人源NSUN2建立NSUN2稳定过表达H9C2细胞系,加入阿霉素500 ng/mL共培养24 h后,用DCFH-DA探针、Western blot、免疫荧光、TUNEL染色等方法检测细胞的活性氧(ROS)、凋亡及NSUN2的变化,ELISA检测细胞培养基上清内NSUN2表达变化。结果:Western blot结果显示,DOX组与对照组比较,H9C2细胞Bax蛋白水平及NSUN2表达水平升高(P<0.01),Bcl-2蛋白水平下降(P<0.01);ELISA检测细胞培养液内NSUN2表达水平DOX组较对照组升高(P<0.05);TUNEL结果显示DOX组细胞凋亡明显增加;DCFH-DA探针检测DOX组细胞内ROS水平较对照组明显升高;H9C2细胞敲减NSUN2后,DOX组细胞内Bax蛋白水平较对照组升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.01);NSUN2过表达时,DOX组与对照组比较,细胞内Bax表达水平下降(P<0.01),Bcl-2表达水平升高(P<0.01)。结论:NSUN2能抑制阿霉素诱导的H9C2细胞损伤,对其H9C2细胞起保护作用,机制可能与NSUN2抗氧化应激相关。
- 郑丽娜王洁程飞陈佳娟丁妍王治校
- 关键词：阿霉素H9C2细胞活性氧
- TET1过表达载体构建及其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞鉴定被引量：2
- 2018年
- 目的构建甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)过表达载体并对其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞进行鉴定。方法从人宫颈癌组织中扩增出TET1目的片段并将其克隆到pLVX-MYRF载体上,构建真核表达载体pLVX-MYRF-TET1,进行双酶切及测序验证。选择宫颈癌HeLa细胞,随机分为TET1组、阴性对照组,采用脂质体转染法分别转染重组质粒pLVX-MYRF-TET1、空质粒pLVX-MYRF,采用Real-time PCR法和Western blotting法检测两组TET1 mRNA和蛋白表达。结果经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体pLVX-MYRF-TET1。与阴性对照组比较,TET1组TET1 mRNA和蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论成功构建TET1过表达载体pLVX-MYRF-TET1,并且能在宫颈癌HeLa细胞中稳定过表达。
- 沈艳沈凤闫海洋徐殿琴丁妍谭玉洁
- 关键词：宫颈癌HELA细胞脂质体转染
- Nanog过表达对宫颈癌细胞分化程度的影响
- 2014年
- 目的:研究Nanog过表达对宫颈癌Hela细胞分化程度的影响。方法:体外合成Nanog mRNA并转染Hela细胞,使其过表达Nanog。检测转染后Nanog蛋白的表达、体外侵袭、迁移、体内成瘤及肿瘤干细胞球形成能力。结果:转染mRNA后,Hela细胞Nanog表达明显升高,体外侵袭和迁移能力明显提高。接种至裸鼠后成瘤能力也明显增强。经无血清培养液诱导后形成的肿瘤球明显多于正常对照组,且球的体积较大。肿瘤球细胞表达Nanog及CD133,进一步诱导可以分化为脂肪细胞。RT-PCR检测多能性相关基因的表达,发现转染Nanog mRNA可以激活内源性的Nanog,OCT4,Sox2及Fox D3。结论:Nanog可能通过调节多能性相关基因的表达来影响宫颈癌细胞的分化程度。
- 丁妍王治校王小莉郭兴荣袁雅红李成林李东升
- 关键词：NANOG宫颈癌MRNA肿瘤干细胞
- TET1基因敲除的宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力观察被引量：2
- 2017年
- 目的观察TET1基因敲除的宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力。方法采用CRISPR/Cas9技术构建TET1敲除的Hela细胞株(观察组),同时选择野生Hela细胞作为对照组。采用实时无标记动态细胞分析技术观察两组细胞增殖能力,计算两组90 h时的细胞指数(CI)值;采用Transwell实验观察两组细胞的侵袭能力。结果观察组、对照组CI值分别为1.04±0.86、1.57±1.01,两组相比P<0.05。观察组、对照组24 h穿膜细胞数分别为(158±6)、(109±4)个,48 h穿膜细胞数分别为(206±12)、(142±7)个,两组相比P均<0.05。结论 TET1基因敲除的宫颈癌Hela细胞增殖能力、侵袭能力增强。
- 沈凤丁妍谭玉洁
- 关键词：宫颈癌HELA细胞细胞增殖细胞侵袭
- FAM92A1-289表达的宫颈癌HeLa细胞稳转株的构建及其对细胞增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的构建FAM92A1-289表达的宫颈癌He La细胞稳转株,并观察其对宫颈癌细胞增殖的影响。方法构建重组载体CMV-SP6-TALEN-GFP-289,并转染至宫颈癌He La细胞。通过嘌呤霉素筛选得到稳定表达FAM92A1-289的细胞株He La/289,分别用细胞划痕实验、肿瘤球实验、MTT法检测细胞迁移能力、肿瘤生长速度、细胞存活情况。结果成功构建了超表达FAM92A1-289的宫颈癌He La细胞稳定表达株;经检测,其迁移能力更强、生长速度更快、存活率更高。结论成功构建稳定表达FAM92A1-289的细胞株He La/289;FAM92A1-289基因具有促进宫颈癌He La细胞增殖的作用,可作为细胞增殖调节相关基因。
- 桂卉郭兴荣方娟丁妍沈君豪阮绪芝
- 关键词：宫颈肿瘤细胞增殖
