杨晨
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
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- 基因干扰免疫球蛋白结合蛋白对氟刺激成骨细胞作用的影响
- 2015年
- 目的 通过RNA干扰技术观察在不同剂量氟暴露条件下,成骨细胞内免疫球蛋白结合蛋白（binding immunoglobulin protein,BiP）表达减少对细胞成骨标志物和关键转录因子表达的影响.方法 采用小鼠成骨细胞（MC3T3-E1）作为细胞体外培养模型.取对数生长期MC3T3-E1细胞,接种子96孔板,培养24h后,加入含不同剂量氟离子[0.0（对照组）、0.1、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、20.0、32.0、64.0 mg/L]的培养液,于培养第1、3、7、14天采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测细胞活性.不同剂量氟离子（2.0、8.0、20.0 mg/L）联合短片段RNA（small interfering RNA,siRNA）干扰BiP转染处理成骨细胞2d,利用实时定量PCR和蛋白杂交技术检测BiP基因mRNA和蛋白水平,同时检测成骨细胞内成骨标志物和关键转录因子的变化.结果 染氟第1、3、7、14天,不同剂量氟处理组间细胞活性比较,差异有统计学意义（F=46.7、118.6、214.6、325.6,P均＜0.05）.染氟20.0 mg/L未转染组成骨细胞的BiP基因mRNA水平较对照组显著升高（11.22±3.25比7.94±1.31,P＜0.05）.染氟2.0 mg/L未转染组成骨细胞碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）mRNA表达较对照组显著提高（12.81±3.62比6.86±2.13,P＜ 0.01）,而染氟20.0 mg/L未转染组细胞的ALP mRNA表达显著下降（0.89±0.17比6.87±2.14,P＜ 0.01）.与相同剂量氟处理组比较,染氟2.0、8.0 mg/L联合转染BiP siRNA组细胞ALP mRNA表达显著下降（12.81±3.62比7.43±2.06;5.92±2.38比3.96±0.21,P均＜0.05）;染氟2.0 mg/L联合BiP siRNA转染组细胞骨钙素（osteocalcin,OCN）mRNA表达下降（4.29±0.99比1.29±0.86,P＜ 0.01）.染氟2.0 mg/L未转染组细胞成骨细胞关键转录因子Runx2（Runt-related transcription factor 2）表达高于未转染对照组（6.61±0.48比2.66±0.39,P＜0.05）.成骨细胞转染BiP siRNA后各加氟组Runx2表达较转染对照组显著下降（1.13±0.22比4.81±1.03,3.20±0.66比4.81±1.03,0.02±0.02比4.81±1.03,P均＜0.
- 赵志涛杨晨王岩李广生徐辉
- 关键词：氟化物成骨细胞RNA干扰
- 间充质干细胞分离提取的优化方法被引量：1
- 2012年
- 目的:建立脐带MSCs分离提取的优化方法。方法:运用间充质干细胞的分离、组织块培养法、酶消化培养法、细胞形态学与增殖观察等方法。结果:获得了间充质干细胞分离提取的优化方法,观察结果表明,MSCs生长状态良好,其传代后细胞形态无明显变化,性质稳定。
- 杨晨颜炜群
- 关键词：间充质干细胞脐带原代培养
- 胰岛素在氟诱导成骨作用中的地位被引量：3
- 2015年
- 采用实时PCR测试了投氟大鼠的骨组织成骨和胰岛素受体等基因表达情况,采用免疫组化技术观察了胰岛分泌胰岛素情况,以及采用生化方法检测血清中的胰岛素、血糖和血脂等变化,利用体外成骨细胞染氟考察了胰岛素受体在成骨细胞内表达及氟联合胰岛素对骨髓间充质干细胞的成骨作用影响。结果表明:给予低剂量氟3个月后,大鼠骨组织碱性磷酸酶、骨钙素、Runx2(Runt相关转录因子)及胰岛素受体表达显著提高,而高氟组成骨标志基因碱性性磷酸酶、骨钙素、Runx2也明显提高,说明给予大鼠氟3个月能够诱导成骨;给与低剂量氟从1个月到3个月后,大鼠血清的胰岛素浓度明显提高,高氟作用3月后,胰岛素分泌降低,这与高剂量氟给氟3月大鼠胰岛素受体表达明显下降相一致。体外实验中,ρ(F-)=2mg/L和8mg/L氟明显促进了成骨细胞内抗胰岛素受体荧光抗体的强度,而且10μg/mL胰岛素联合ρ(F-)=1mg/L和4mg/L能够刺激成骨细胞活性。氟ρ(F-)=1mg/L和4mg/L刺激了成骨细胞碱性磷酸酶的活性。体内氟中毒大鼠模型实验结果表明,低剂量氟作用3个月刺激成骨作用的同时,伴随着胰岛素分泌增强,并促进成骨细胞内胰岛素受体表达增多,体外实验也表明了胰岛素刺激成骨细胞增生的作用,这些实验数据说明胰岛素参与了低剂量氟诱导成骨作用机制。
- 张秀云王岩赵志涛杨晨徐辉
- 关键词：地方病学氟骨症成骨作用胰岛素
- 同种异体骨髓间充质干细胞关节腔内成软骨分化的实验研究被引量：6
- 2005年
- 目的检测同种异体间充质干细胞在不接受免疫抑制治疗的正常羊关节腔内分化形成软骨能力。方法将同种异体间充质干细胞复合β-磷酸三钙陶瓷植入正常羊关节腔内。在进行干细胞体内植入前进行淋巴细胞混合试验,确保供体与受体动物间存在免疫排斥反应。异体干细胞植入8周后,取出植入物进行组织学与免疫组化分析。将其结果与自体间充质干细胞复合β-磷酸三钙陶瓷关节腔内植入以及无细胞复合的单纯β-磷酸三钙陶瓷关节腔内植入相应检测结果进行对比分析。通过检测受体血清内产生的针对供体细胞的特异性抗体,评估系统性免疫反应。结果未检测到针对同种异体间充质干细胞移植所产生的特异性免疫排斥反应。在复合异体干细胞的植入物内没有发生明显炎性细胞浸润,并且没有检测到有针对异体细胞的抗体产生。组织学和免疫组化分析表明在复合异体及自体间充质干细胞的植入物内有新生软骨形成。在无细胞复合的植入物内未检测到软骨形成。结论受关节腔环境影响,同种异体间充质干细胞能够分化形成软骨组织。在被移植到不经免疫抑制治疗的同种异基因动物体内后,细胞陶瓷复合体不引起特异性免疫排斥反应。
- 赵子义杨雷徐鹏杨晨徐莘香
- 关键词：干细胞关节腔软骨免疫反应
