徐延勇
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 载脂蛋白E拟肽EpK对apoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响被引量：5
- 2015年
- 前期设计合成了一种模拟人载脂蛋白E(apoE)结构域的小分子多肽EpK,体外实验证实该拟肽具有抑制巨噬细胞炎症及增强高密度脂蛋白(HDL)介导细胞胆固醇外流的作用.本文拟借助慢病毒体系分泌性表达EpK,研究EpK在体对apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的影响.将11月龄雌性apoE-/-小鼠18只,随机分两组,分别经眼球后静脉丛注射p WPI慢病毒(Lv-GFP对照组)和含EpK的重组慢病毒(Lv-EpK组).小鼠普食喂养,间隔采血监测血脂状态,检测血浆对氧磷酯酶(PON1)活性,病毒注射18周后小鼠安乐死,从主动脉根部连续冰冻切片及主动脉胸腹段纵剖面(en face)进行油红O染色分析斑块面积,采用实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏相关基因的m RNA表达水平,蛋白质印迹检测血浆中apo A-Ⅰ、PON1及血清淀粉样蛋白A(SAA)水平.结果显示:慢病毒感染小鼠可成功在血循环中检测到EpK,与Lv-GFP对照组比较,Lv-EpK组apoE-/-小鼠的血脂及脂蛋白分布、apo A-Ⅰ水平、PON1活性无明显改变,但EpK组小鼠的主动脉斑块面积较对照组显著减少(主动脉根部斑块面积(0.87±0.07)mm2 vs(1.03±0.08)mm2,P<0.05;主动脉胸腹段斑块占管腔比42.0%vs 55.8%,P<0.01).EpK可显著降低血中SAA水平,并抑制肝脏炎症因子TNFα和IL-6的表达.结果说明,EpK拟肽具有减退apoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的作用,其机制可能与其发挥的抗炎作用有关.
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- 关键词：动脉粥样硬化APOE炎症脂代谢
- 肝脏甲硫氨酸亚砜还原酶A高表达对apoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响
- <正>目的:甲硫氨酸亚砜还原酶A(Methionine sulfoxide reductase A,MsrA)是细胞内一道特殊的蛋白抗氧化防御屏障。本实验利用慢病毒表达系统,探究肝脏中MsrA高表达对apoE基因敲除(a...
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- 文献传递
- 肝脏甲硫氨酸亚砜还原酶A高表达对apoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响
- 目的:甲硫氨酸亚砜还原酶A(Methionine sulfoxide reductase A,MsrA)是细胞内一道特殊的蛋白抗氧化防御屏障.本实验利用慢病毒表达系统,探究肝脏中MsrA高表达对apoE基因敲除(apoE...
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- 慢病毒载体表达外源PON1对小鼠巨噬细胞的影响被引量：3
- 2015年
- 目的:为探讨对氧磷酯酶1(PON1)在机体代谢性疾病中的作用及机制,本实验构建含人源性PON1基因的慢病毒表达载体,研究其表达分泌PON1的能力及对小鼠巨噬细胞的影响。方法:根据人肝cDNA文库的PON1序列设计特定引物,定点诱变PCR获得两端为PmeⅠ内切酶位点的目的基因,经酶切连接到pWPI-GFP载体上,筛选及DNA测序鉴定。磷酸钙法瞬时转染293T细胞,荧光显微镜观察GFP表达反映转染效率,Western Blotting检测细胞培养基中PON1分泌表达量,采用对氧磷为底物检测PON1活性。含PON1的培养基与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,ELISA法检测氧化条件下细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的水平。结果:构建的pWPI-PON1慢病毒表达载体序列正确,高效转染293T细胞(转染效率可达到80%-90%)可有效分泌表达PON1至培养基,显著提高培养基PON1活性,与对照组相比,培养基中PON1可明显抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-6的分泌(P<0.01)。结论:pWPI-PON1慢病毒载体高效表达分泌的外源PON1能有效降低巨噬细胞的炎症反应。
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- 关键词：对氧磷酯酶1慢病毒载体巨噬细胞TNF-Α
