刘东擘
- 作品数：14 被引量：31H指数：4
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 核因子-κB圈套寡核苷酸对核因子-κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响被引量：6
- 2004年
- 目的 探讨核因子 (NF) -κB圈套寡核苷酸 (ODN)对NF -κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响。 方法 利用电泳迁移率改变实验 (EMSA) ,测定合成的环状哑铃形圈套ODN对NF -κB的DNA结合能力的竞争抑制作用 ;利用NF -κB反应性报告细胞株HEK -不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP) ,观察圈套ODN瞬时转染对报告基因表达的影响。Wistar大鼠 96只 ,随机分为对照组、创伤性炎症组、圈套ODN组和无关ODN组。利用EMSA检测各组肝脏组织NF -κB的DNA结合活性 ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)检测大鼠肝脏组织TNF -α、白细胞介素 - 6 (IL - 6 )mRNA水平 ,酶联免疫吸附实验 (ELISA)法检测大鼠肝脏组织肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)、IL - 6的蛋白水平。 结果 设计的环状哑铃形圈套ODN对NF -κB的DNA结合能力具有竞争抑制作用 ,1 μg ml和 2 μg ml圈套ODN瞬时转染HEK -d2EGFP ,可明显抑制p6 5蛋白诱导的d2EGFP表达。大鼠创伤性炎症后 3h ,肝脏NF -κB活性开始升高 ,伤后 1 2h达高峰。肝脏组织TNF -α、IL - 6mRNA水平和蛋白水平也明显上升 ,与NF -κB的活性改变一致。圈套ODN治疗后 ,大鼠肝脏组织TNF -α、IL - 6的表达明显下降 ,肝脏功能明显好转 ,而无关ODN则没有治疗效果。 结论 设计的靶向NF
- 梁华平徐祥杨文军王付龙刘东擘胡承香王正国
- 关键词：ODN鼠肝DNA结合EGFP
- 树突状细胞与脓毒症——两者的关系及新的治疗策略被引量：2
- 2006年
- 树突状细胞作为能力最强的抗原提呈细胞,在调控T、B细胞的活性与增殖方面具有强大的甚至是独一无二的能力,与脓毒症的发展过程有着极其重要的关系。
- 王震平刘东擘梁华平
- 关键词：树突状细胞脓毒症免疫治疗
- 关于胰岛素样生长因子Ⅰ及其与炎症关系的研究进展
- 张醇严军刘东擘范霞杨雪梁华平
- 关键词：肝脏炎症
- GST Pull-down实验鉴定NF-κB相互作用多肽被引量：8
- 2006年
- 目的体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用。方法首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB p50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b/p50和pET22b/p65,并在大肠杆菌E.coliBL-21中诱导表达,后进行GST pull-down实验验证多肽与NF-κB p50和p65的结合效应。结果经诱导表达获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白和具有DNA结合活性的p50p、65蛋白,GST pull-down实验证实3条多肽与p50发生特异地相互作用。结论证实3条多肽在体外能与p50发生物理性的相互作用,这为获得靶向NF-κB的功能拮抗多肽工作奠定了基础。
- 李生茂梁华平徐祥刘东擘
- 关键词：GST多肽蛋白间相互作用
- 胍丁胺对酵母多糖诱导的小鼠脓毒症的保护作用
- 目的：探讨胍丁胺(一种生物活性胺)对酵母多糖诱导的小鼠脓毒症急性期的影响.方法：1、将32只成年雄性C5 7BL/6小鼠按随机数字表法分为正常对照组[SHAM+PBS组,磷酸盐缓冲液(PBS)0.5ml]、AGM对照组(...
- 刘东擘顾颖梁华平
- 由可溶性BLyS突变体靶向的SARI可选择性杀伤Burkitt's淋巴瘤细胞
- Burkitt's淋巴瘤细胞高表达B淋巴细胞刺激因子(BLyS)及其受体.可溶性BLyS突变体(smBLyS)可结合BLyS受体但失去了刺激B淋巴细胞增殖的能力.因此,smBLyS不仅有望作为野生型BLyS的竞争抑制分子...
- 杨朝辉黄艳黄英辉刘东擘张立何凤田
- NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用多肽的筛选及功能鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的以NF-κB p65亚基DNA结合域为诱饵蛋白,筛选能够与其发生相互作用的多肽,并鉴定这些多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。方法首先利用PCR搭桥扩增方法获取NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,后将其克隆到酵母双杂交pGBKT7DNA-BD载体上,与GAL4DNA-BD融合,形成GAL4DNA-BD/p65BD融合蛋白;再以GAL4DNA-BD/p65BD融合蛋白为诱饵蛋白行酵母双杂交实验,自16肽随机肽库中筛选与NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用的多肽;最后选择性人工合成筛选获得的多肽,并进行EMSA实验检测相互作用多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。结果扩增获得了NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,并成功构建pGBKT7DNA-BD/p65BD载体。自1.28×107个酵母转化子中最终筛选获得5个阳性克隆,测序结果和同源氨基酸序列比对表明5个阳性多肽为p65BD新型相互作用多肽,其中4条多肽拥有一个共同的基序。EMSA实验结果表明合成的两条多肽对NF-κB的DNA结合活性均具有一定的抑制效应。结论经初筛、复选和假阳性鉴定,自16肽库中获得5个能与NF-κB p65亚基发生相互作用的新型多肽,并已证实其中两条多肽对NF-κB的DNA结合活性具有抑制效应。
- 徐祥梁华平刘昕李生茂史海水刘东擘吴强王正国
- 关键词：NF-ΚBP65酵母双杂交系统
- p65结合肽与p65的亲和力检测及其对NF-κB DNA结合活性抑制作用的鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的检测NF-κB p65亚基结合肽与p65间相互作用的亲和常数,以及其对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。方法借助于生物传感器技术分析NF-κB p65亚基结合肽与p65相互作用的动力学,同时应用竞争性ELISA鉴定结合多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。结果生物传感器技术分析结果表明5条p65结合肽均能与p65发生相互作用,相互作用的亲和常数分别为GST-BPT1:2.67×10-7mol/L、GST-BPT2:9.02×10-6mol/L、GST-BPT3:1.07×10-6mol/L、GST-BPT4:8.03×10-6mol/L、GST-BPT5:9.83×10-7mol/L。竞争性ELISA检测结果表明5条p65结合肽均能在一定程度上抑制NF-κB与其顺式作用元件κB基序的结合,且这种抑制效应随多肽浓度的增加而增强。结论酵母双杂交筛选获得的5条p65结合多肽与p65间确实存在相互作用,且5条结合肽对NF-κB DNA结合活性均有一定的抑制效应,由此提示以这些多肽为先导物设计和开发靶向NF-κB的抗炎多肽药物将成为可能。
- 徐祥梁华平郑江吴强刘东擘史海水胡湘南王正国朱佩芳
- 关键词：NF-ΚBP65生物传感器
- CD4+Foxp3+和CD8+Foxp3+在脂多糖和酵母多糖致炎后的动态变化
- 目的:利用Treg荧光单标小鼠以及成功繁育的Treg-Th17双标小鼠，针对LPS和Zym致炎条件下Treg亚群的变化进行了体内研究。
方法:从美国哈佛大学医学院引进Treg和Th17荧光单标小鼠(即C57BL...
- 严军范霞杨雪张醇刘东擘梁华平
- 关键词：调节T细胞脂多糖酵母多糖
- 文献传递
- 调节性T细胞在吴茱萸碱干预酵母多糖致炎过程中的变化
- 目的：吴茱萸碱对酵母多糖介导炎症反应条件下Treg的影响.
方法：提取体内、体外炎症模型B6KI小鼠的淋巴细胞,通过PE-antimouse CD4及其PE同型对照、PECY5-antimouse CD8a及其...
- 杨雪严军范霞张醇刘东擘梁华平
- 关键词：炎症反应吴茱萸碱酵母多糖调节性T细胞
- 文献传递
