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ICP-AES测定太行菊花中的矿质元素被引量：2: 2013年; 用浓硝酸-高氯酸(4V∶1V)的混合溶液对太行菊花样品进行消解,采用电感耦合等离子体-原子发射光谱法(I CP-A ES)测定样品中Z n、Ca、M n、F e、M g、B和K 7种矿质元素含量。结果表明:各元素在实验范围内,线性关系良好,回收率在98%—103%,结果令人满意。; 贾文庆陈韵张琨琨刘会超; 关键词：电感耦合等离子体-原子发射光谱法矿质元素

甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nifH基因的克隆与序列分析(英文)被引量：5: 2014年; 【目的】了解甘蔗内生固氮菌变栖克雷伯氏菌（Klebsiella variicola）DX120E nif H基因的生物信息学,为揭示甘蔗内生固氮菌DX120E的固氮分子机理提供理论依据。【方法】根据NCBI上其他固氮菌株的nif H序列设计引物,对内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E菌进行PCR扩增;运用生物信息学方法对其核苷酸序列、编码的氨基酸序列进行分析,并对其蛋白结构进行预测。【结果】甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nif H基因的ORF为882bp,Gen Bank登录号为KF732646.1,与Klebsiella pneumoniae 342、Klebsiella variicola At-22等6种固氮菌的nif H基因氨基酸序列同源性高达95.0%-99.0%。DX120E nifH蛋白与Klebsiella pneumoniae 342的亲缘关系最近,与非克雷伯氏菌固氮菌的亲缘关系较远。生物信息学分析显示,菌株DX120E的nif H基因编码293个氨基酸,起特别重要的氨基酸残基非常保守。该基因在N端有11个氨基酸残基即酪氨酸—甘氨酸—赖氨酸—甘氨酸—甘氨酸—异亮氨酸—甘氨酸—赖氨酸—丝氨酸—苏氨酸—苏氨酸,其属于典型结合ATP的基序结构。nif H蛋白分子量为32.07k D,pI为4.92,为酸性蛋白;其具有2个ASN糖基化位点,1个CAMP磷酸化位点,6个CK2磷酸化位点,6个PKC磷酸化位点。疏水性预测显示该蛋白为亲水性蛋白,无信号肽。【结论】变栖克雷伯氏菌（Klebsiella variicola）DX120E nif H基因的推导氨基酸序列与克雷伯氏菌固氮菌属具有较高的同源性,该基因在甘蔗生物固氮过程中可能起重要作用。; 张琨琨牛俊奇魏春燕邢永秀杨丽涛李杨瑞; 关键词：甘蔗内生固氮菌 NIFH基因

甘蔗转化酶抑制子(SoInvInh1)基因克隆和表达分析被引量：6: 2015年; 采用cDNA末端快速克隆(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,以甘蔗未成熟茎cDNA为模板克隆转化酶抑制子,命名为SoInvInh1,GenBank登录号KF575175。SoInvInh1基因的cDNA序列全长为678bp,3′-UTR长146bp。开放阅读框长531bp,编码176个氨基酸,预测分子质量和等电点分别为18.09ku和8.52。SoInvInh1不含内含子序列。预测该蛋白N端具有1个信号肽和跨膜结构,19—172位氨基酸是PMEI蛋白的保守结构域。不同物种间InvInh蛋白氨基酸序列同源性较低,但都具有4个保守的Cys位点。荧光定量PCR分析表明在甘蔗茎、叶、花序和花序轴中都能检测到SoInvInh1基因表达。在甘蔗生长的不同时期,SoInvInh1在叶中表达无明显规律。而在工艺成熟期和生理成熟前期SoInvInh1整体上表现为幼茎中基因表达量高,而老茎中基因表达量低,表明茎中该基因可能与酸性转化酶活性相关。; 牛俊奇黄静丽张琨琨杨丽涛李杨瑞; 关键词：甘蔗克隆基因表达

甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E固氮酶基因的克隆和功能分析: 甘蔗为主要的糖料和能源作物之一，从甘蔗体内分离获得大量内生固氮菌已有较多报道。Klebsiella variicola DX120E是本实验室从广西大新县种植的甘蔗品种新台糖22号(ROC22)根内分离得到的一株具有高固...; 张琨琨; 关键词：甘蔗内生固氮菌基因克隆功能分析

甘蔗宿根矮化病病原菌一推测膜蛋白基因(Lxx18460)单克隆抗体的制备和检测: 2016年; 【目的】对甘蔗宿根矮化病病原菌(Leifsonia xyli subsp.xyli,Lxx)一推测为抗K因子的膜蛋白基因(Lxx18460)进行研究,为今后研究该基因在感病甘蔗体内表达打下基础。【方法】诱导表达并纯化含有推测为抗K因子的膜蛋白Lxx18460基因的p ET-30a质粒菌液,委托南京金斯瑞生物科技有限公司制备单克隆抗体;用Western blotting对细菌及感病和健康甘蔗样品总蛋白进行检测。【结果】Lxx18460基因具有特异性,只存在于甘蔗Lxx中。ELISA单克隆抗体效价大于1∶512000,能够灵敏地检测细菌总蛋白和甘蔗样品蛋白。Western blotting检测结果表明,Lxx18460基因在细菌中和感病甘蔗样品中表达,在健康甘蔗样品中几乎不表达。【结论】Lxx18460基因具有特异性,是Lxx中的抗K因子的膜蛋白基因,能够在细菌和感病甘蔗样品体外进行表达。; 邵敏张小秋张琨琨杨丽涛李杨瑞; 关键词：甘蔗宿根矮化病单克隆抗体 ELISA检测 WESTERN

甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nifD 基因的克隆、原核表达及纯化: 基于NCBI数据库中固氮菌nifD基因的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E为模板,通过PCR方法获得了Klebsiella variicola DX1...; 张琨琨邵敏吴朝兴杨丽涛李杨瑞邢永秀; 关键词：甘蔗固氮菌原核表达蛋白纯化

甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120EnifH基因的克隆与序列分析: 目的：了解甘蔗内生固氮菌变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola)DX120E nifH基因的生物信息学,为揭示甘蔗内生固氮菌DX120E的固氮分子机理提供理论依据. 方法：根据NCBI上其他固...; 张琨琨牛俊奇魏春燕邢永秀杨丽涛李杨瑞; 关键词：甘蔗固氮菌基因克隆基因序列

甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nifD基因的克隆、原核表达及纯化被引量：2: 2015年; 基于NCBI数据库中固氮菌nif D基因的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E为模板,通过PCR方法获得了Klebsiella variicola DX120E nif D基因的ORF;以p ET30a(+)为原核表达载体,构建重组表达质粒p ET30a-nif D。将正确的重组质粒转入原核表达菌株BL21(DE3),在28℃培养条件下经1 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(isopro-ply-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;通过SDS-PAGE电泳检测融合蛋白表达情况。结果表明,本研究克隆得到甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nif D基因的ORF为1 452 bp,编码483个氨基酸;原核诱导表达后经提纯和质谱鉴定,该蛋白等电点为5.90,分子量为53.87 k D,与预期大小一致。该蛋白在原核表达系统中以包涵体的形式成功表达。利用Ni柱亲和层析方法进一步获得了纯度较高的重组蛋白,为今后单克隆抗体的制备、蛋白质印记杂交检测(Western Bloting)等研究奠定了基础。; 张琨琨邵敏吴朝兴杨丽涛李杨瑞邢永秀; 关键词：甘蔗 KLEBSIELLA 原核表达蛋白纯化

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张琨琨

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