王泽
- 作品数：10 被引量：12H指数：2
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 旋毛虫ES抗原及HSP70对树突状细胞免疫调节的研究
- 目的 探讨旋毛虫HSP70对小鼠DC2.4细胞TLR2、NF-κB和AP-1表达的影响.方法 以实时荧光定量PCR(Real-time FQ-PCR)技术对空白对照组、Pam3csk4组、HSP70组、HSP70+ Pa...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云刘畅王泽
- 小鼠TLR2的克隆表达及生物学活性分析
- 采用RT-PCR方法从小鼠巨噬细胞中扩增Toll样受体2(mTLR2)基因,得到基因全长CDS,经克隆测序正确后构建真核表达质粒pcDNA3.1-mTLR2.重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,分别用RT-PCR与免疫荧...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云俞昭旸王泽
- 旋毛虫p43与p53核酸疫苗的构建及其免疫保护性
- 为探讨旋毛虫p43、p53基因的核酸疫苗对小鼠的免疫保护效果与免疫保护机制,将p43、p53基因分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,分3次肌肉注射免疫3组昆明小鼠.于三免后2周经口感染旋毛虫肌幼虫(100蚴/...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云庞宇王泽
- 旋毛虫HSP70基因的原核表达及其免疫原性
- 利用RT-PCR方法扩增旋毛虫HSP70基因,将其扩增产物克隆到pEASY-Blunt Simple载体中,经限制性酶切后与pET-28a(+)载体连接,进一步转化至感受态细胞Transetta(DE3)中,用IPTG诱...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云徐佳王泽
- 旋毛虫谷氨酸脱羧酶基因的原核表达及其活性研究
- 采用RT-PCR从旋毛虫中扩增出谷氨酸脱羧酶(TsGAD)基因全长,将其克隆到表达载体pET-30a(+)后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,应用比色法鉴定表达产物(rTsGAD)的酶活性,并用纯...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云周兴东王泽
- 旋毛虫ES抗原对DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨旋毛虫ES抗原对小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的影响。方法以实时荧光定量PCR(Real-time FQ-PCR)技术对空白对照组、LPS组、ES抗原组、ES抗原+LPS/ES抗原组和LPS+LPS/ES抗原组,检测TLR4、NF-κB和AP-1基因mRNA表达水平变化。结果 ES抗原和LPS单作用组的TLR4、NF-κB和AP-1mRNA相对表达量分别是6.14/4.09/3.63和4.68/4.71/4.11,是ES抗原和LPS预作用组的各基因相对表达量的2倍以上,差异有统计学意义(P<0.05)。结论实验证实,DC2.4细胞受ES抗原和LPS持续作用或者双重作用均可诱导小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的降低,可能诱致DC2.4细胞免疫耐受。
- 刘畅韩彩霞李巍李晓云路义鑫王泽唐颖宋铭忻
- 关键词：转录因子实时荧光定量PCR
- 旋毛虫单克隆抗体复苏鉴定及ES抗原的组织定位
- 2017年
- 为了深入了解旋毛虫ES抗原的致病机制,试验采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(Mab),对旋毛虫ES抗原进行组织定位;采用间接ELISA方法对复苏的单克隆抗体进行检测;采用SDSPAGE及Western-blot技术对ES抗原中的蛋白组分进行分析。结果表明:获得的2株杂交瘤细胞系A11和B13经Western-blot证实能与49 ku处的ES抗原反应,能够稳定分泌抗体,且效价高。说明试验成功确定了旋毛虫ES抗原在组织中的位置,旋毛虫肌幼虫ES抗原中的49 ku蛋白组分为旋毛虫肌幼虫的特异性抗原。
- 于海波宋铭忻李晓云刘畅王泽韩彩霞
- 关键词：旋毛虫排泄分泌抗原酶联免疫吸附测定
- 猪囊尾蚴和华支睾吸虫液相基因芯片检测方法的建立被引量：4
- 2015年
- 为建立一种可以同时检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的液相基因芯片方法,本研究以猪囊尾蚴ITS基因和华支睾吸虫ITS基因为靶序列,设计并合成特异性探针和引物,通过PCR方法扩增目的片段,构建阳性重组质粒标准品并对其进行测序,建立一种基于双重PCR的液相基因芯片检测方法。结果显示,扩增目的片段长度分别约为150 bp和170 bp,测序结果与Gen Bank登录的猪囊尾蚴和华支睾吸虫相关基因一致性分别为99.35%和98.27%;液相基因芯片对单重PCR产物和双重PCR产物的检测结果一致,特异性和重复性良好。应用该方法检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的灵敏度分别为5.13×104拷贝/μL和2.03×104拷贝/μL,比琼脂糖凝胶电泳灵敏高约8倍;应用该方法检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的变异系数均在8%以内,模拟污染样品的检验试验准确率达98%。本研究初步建立了可以同时高效、灵敏和特异检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的液相基因芯片方法,为人畜共患寄生虫的检测和监控提供了新方法。
- 刘畅路义鑫杨朋欣李晓云王泽汪洋宋铭忻
- 关键词：猪囊尾蚴华支睾吸虫
- 酸性条件对旋毛虫肌幼虫TsGAD mRNA表达水平的影响被引量：2
- 2016年
- 为探讨旋毛虫肌幼虫谷氨酸脱羧酶(TsGAD)在酸性条件下的抗酸作用,应用实时荧光定量PCR技术对不同酸性条件下培养的TsGAD mRNA的表达水平进行检测。结果显示,随着pH值的降低,TsGAD mRNA表达量逐渐升高,在pH 2.5时TsGAD mRNA表达量显著高于pH 4.0、pH 6.6和pH 9.0(P<0.05)。结果表明,强酸环境能显著诱导TsGAD mRNA的表达,旋毛虫肌幼虫具有谷氨酸依赖型抗酸机制,这为进一步研究旋毛虫的抗酸机理提供了基础数据。
- 王泽胡静许静秀李晓云刘畅赵祥王琦宋铭忻
- 关键词：旋毛虫肌幼虫
- 旋毛虫谷氨酸脱羧酶基因的原核表达及其活性研究被引量：6
- 2015年
- 采用RT-PCR从旋毛虫中扩增出谷氨酸脱羧酶(TsGAD)基因全长,将其克隆到表达载体pET-30a(+)后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,应用比色法鉴定表达产物(rTsGAD)的酶活性,并用纯化的GAD蛋白制备多克隆抗体。结果显示,成功构建了重组质粒pET-30a(+)-TsGAD,经SDS-PAGE分析,rTsGAD蛋白的分子质量约为57ku。利用比色法测得粗提的rTsGAD具有酶活性,酶活力为1.5U。制备的多克隆抗体效价较高,可达1∶65 536。Western-blot分析结果显示,该多克隆抗体与TsGAD具有较强的反应性。结果表明,本试验成功原核表达了rTsGAD,并制备了多克隆抗体,为TsGAD定位以及进一步研究旋毛虫谷氨酸依赖型抗酸机制奠定了基础。
- 周兴东王泽宋铭忻师东方
- 关键词：旋毛虫谷氨酸脱羧酶原核表达酶活性
