龚铭
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划东莞市高等院校科研机构科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 低氧诱导因子1α及2α在人BMSCs成软骨分化中的表达规律被引量：3
- 2015年
- 目的通过诱导人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)成软骨分化,观察低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、HIF-2α在分化过程中的表达趋势,为阐明HIF参与调控成软骨分化机制提供依据。方法对已消化的悬浮hBMSCs进行离心沉淀,形成细胞微球。将细胞微球分为2组,对照组加入含2%FBS的H-DMEM培养基,成软骨诱导组加入软骨诱导液,于低氧(2%O2)条件下培养。培养3周后行甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察,培养1周行Western blot检测HIF-1α、HIF-2α蛋白表达,培养1、2、3周行实时定量PCR检测成软骨分化关键转录因子及相关标志基因表达。结果甲苯胺蓝染色示,对照组染色细胞核整体分布稀疏,而成软骨诱导组分布致密;成软骨诱导组细胞外基质染色明显较对照组深。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示阳性信号主要位于细胞质内;与成软骨诱导组相比,对照组细胞核分布较稀疏且着色浅。Western blot检测示,培养1周成软骨诱导组HIF-1α和HIF-2α蛋白相对表达量均显著低于对照组(t=8.345,P=0.001;t=7.683,P=0.002)。实时定量PCR检测示,与对照组比较,成软骨诱导组HIF-1αmRNA相对表达量在培养1周时降低、2周时显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);3周时两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。成软骨诱导组培养各时间点HIF-2αmRNA相对表达量均显著低于对照组,Sox-9 mRNA相对表达量均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。培养过程中,Ⅱ型胶原及Ⅹ型胶原表达呈逐渐增加趋势,第2、3周时两者的mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。而成软骨诱导组多聚蛋白聚糖mRNA相对表达量在各时间点均高于对照组(P<0.05)。结论 HIF-1α参与诱导hBMSCs成软骨分化过程,但HIF-2α表达在该分化过程中受抑制。
- 龚铭黄胜罗嘉全黄保丁周治宇代学俊高蔓蔓李亮平邹学农
- 关键词：低氧诱导因子成软骨分化
- C3H10T1/2成软骨分化过程中miR-19a与CCND1的表达及调控
- 2015年
- 【目的】在间充质干细胞诱导成软骨分化过程中,探讨mi R-19a与细胞周期基因CCND1之间的关系,为揭示mi R-19a参与调控成软骨分化的可能机制提供基础。【方法】选取小鼠间充质干细胞C3H10T1/2为研究对象,运用离心沉淀法进行pellet细胞微球培养,用含有TGF-β3及2%FBS的高糖DMEM进行成软骨诱导并作为实验组,用含2%FBS的高糖DMEM培养(替换)导作为对照组。分别在1、2、3周进行定量PCR检测成软骨分化相关基因表达以及在第3周进行甲苯胺蓝染色。【结果】与对照组比较,细胞功能基因Bax与Klf-4表达均下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。成软骨分化关键启动因子SOX-9及相关基因aggrecan,collagen II,Collagen Xa1的表达均在2周时显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。通过互联网生物信息学预测CCND1可能是mi R-19a的靶基因;在成软骨分化过程中,mi R-19a表达逐渐上升(P<0.05),而CCND1的表达与对照组相比逐渐下降(P<0.05)。甲苯胺蓝染色pellet细胞微球呈蓝紫色,细胞核呈深蓝色,诱导组中细胞外基质含量明显增多。【结论】在C3H10T1/2成软骨分化过程中,mi R-19a参与维持细胞干性及增殖基因表达降低,分化能力得到增强;且mi R-19a参与该分化调控过程。
- 龚铭周治宇代学俊高蔓蔓罗嘉全黄胜李亮平邹学农
- 关键词：间充质干细胞成软骨分化
- 骨质疏松症抑制人间充质干细胞的成骨分化被引量：4
- 2014年
- 【目的】为研究患者来源干细胞成骨分化的差异性,选取临床诊断为骨质疏松症患者的骨髓干细胞进行成骨分化诱导。【方法】采用密度梯度离心法,从临床6名患者(骨质疏松症3人,非骨质疏松症3人)的腰椎骨髓血液中分离获得原代骨髓间充质干细胞,并体外扩增至3-4代后进行实验。成骨诱导液的成分包括地塞米松(100 nmoL/L),二磷酸抗坏血酸(0.05 mmoL/L),β-甘油磷酸钠(10 mmoL/L)溶解于含有100 mL/L胎牛血清的低糖DMEM中。通过测定hMSC的增值与碱性磷酸酶(ALP)含量反应干细胞成骨分化活性。定量PCR检测Runx-2、ALP及成骨标志基因osteocalcin(OC)和osteonectin(ON)表达水平;通过矿化结节茜素红染色确认并定量检测钙离子浓度。【结果】比较两组干细胞增殖差异,骨质疏松组较非骨质疏松组降低,而ALP含量无显著差异。Q-PCR检测显示在第3、7天时,骨质疏松组Runx-2、ALP的mRNA表达水平均显著低于非骨质疏松组。骨质疏松组的成骨相关基因OC在3、7、14 d时mRNA表达水平均显著低于非骨质疏松组,而ON仅在第7天表达具有显著差异;矿化结节染色及钙离子定量检测显示,较之非骨质疏松组,骨质疏松组矿化结节染色浅,钙定量降低。【结论】使用成骨诱导干细胞分化方案(地塞米松、二磷酸抗坏血酸、β-甘油磷酸钠)结果提示骨质疏松症患者的干细胞成骨分化能力较非骨质疏松患者降低。因此,选取有骨质疏松症患者自身的骨髓间充质干细胞作为治疗的种子细胞可能并不适用于临床。
- 代学俊岑蔼儿张春梅龚铭周治宇黄保丁叶淦湖邹学农
- 关键词：骨质疏松症人骨髓间充质干细胞成骨分化
- 脂多糖诱导THP-1细胞固有免疫相关miRNAs表达的研究
- 2015年
- 目的检测脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导THP-1巨噬细胞固有免疫反应不同时间点(4、8、12、24、48 h)差异表达的microRNAs(miRNAs)及预测的靶基因的表达情况,探讨骨修复材料移植早期的宿主免疫炎症反应调控机制。方法 LPS处理由佛波醇PMA诱导分化的THP-1细胞,分别在刺激4、8、12、24、48 h之后提取总RNA,用实时荧光定量PCR方法检测microRNAs表达。生物信息学预测miR-10b靶基因是SCARB2并检测其蛋白表达。结果 miR-10b、let-7家族以及miR-181c与芯片结果相符。SCARB2预测为miR-10b的靶基因,且蛋白表达上升。结论 miR-10b可能通过靶基因SCARB2参与调控炎症免疫过程。
- 余婷邹学农罗嘉全黄胜李亮平高蔓蔓龚铭周治宇陈孝
- 关键词：MICRORNA固有免疫
- 骨修复材料在脊柱融合过程中的表观遗传学机制研究
- 邹学农周治宇代学俊高蔓蔓龚铭田伟陈大福
- 关键词：骨修复材料骨组织再生脊柱融合
