陈建才
- 作品数：21 被引量：75H指数：6
- 供职机构：浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金浙江省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
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- 副溶血性弧菌实时重组酶聚合酶扩增检测技术研究
- 目的建立一种快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增(RPA)方法。方法根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价...
- 占利徐昌平张云怡陈鸿鹄张政陈建才张俊彦梅玲玲
- 义乌市33株副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型结果被引量：3
- 2015年
- 副溶血性弧菌（ Vibrio parahaemolyticus ，VP）是一种分布极广的海洋细菌，夏季海水及海产品中常带有此菌。近年来，VP成为我国首要的食源性致病菌，特别是在一些沿海城市，由该菌引起的食物中毒占细菌性食物中毒总数的比例高达60％以上［1－2］。义乌市海产品资源丰富，VP也是主要的食源性致病菌［3］。脉冲场凝胶电泳（ PFGE ）技术因其分辨力高、结果重现性好，而被认为是细菌分子分型的“金标准”［4］。我们对2013年义乌市不同来源的33株VP进行了血清分型和PFGE分子分型研究，旨在初步分析相关菌株间的亲缘关系，了解其内在联系和流行规律，为本市VP食物中毒的防制提供参考。
- 陈黎方晔陈建才
- 关键词：脉冲场凝胶电泳副溶血性弧菌分型结果细菌性食物中毒食源性致病菌海洋细菌
- 阪崎克罗诺菌特异性适配子筛选研究被引量：1
- 2020年
- 目的通过SELEX(指数富集配基系统进化技术)筛选阪崎克罗诺菌特异性DNA适配子,为建立基于适配子技术的阪崎克罗诺菌快速检测方法奠定基础。方法在阪崎克罗诺菌比较基因组分析、蛋白亚细胞定位预测、蛋白跨膜区预测分析、基因mRNA表达量分析、基因克隆表达和蛋白纯化基础上,制备用于适配子筛选的靶蛋白。利用靶蛋白偶联羧基磁珠,筛选ssDNA适配子。并对适配子的靶蛋白结合亲和力和目标菌捕获特异性进行分析。结果适配子S1与靶蛋白结合亲和力较高,对阪崎克罗诺菌有较好捕获能力,捕获率最高为23.1%。对大肠埃希氏菌、沙门氏菌等非目标菌不具有明显的捕获能力,具有较好的阪崎克罗诺菌捕获特异性。结论适配子S1和S2的二级结构以茎环结构和发夹结构为主。
- 张云怡梅玲玲占利陈鸿鹄张俊彦陈建才张政
- 关键词：适配子
- 创伤弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型方法的验证与应用
- ：建立与验证创伤弧菌脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gelelectrophoresis,PFGE)分子分型方法. 方法：以分子分型监测网络PulseNet中霍乱弧菌的PFGE标准方法为基础,选用限制性内...
- 潘军航陈建才张俊彦龚璞占利梅玲玲
- 关键词：创伤弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型
- EMA实时荧光PCR技术检测食品中单核增生李斯特活菌方法研究被引量：7
- 2017年
- 目的利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法。方法根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件。用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率。用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性。用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料,15件熟肉制品进行模拟实样检测。结果单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2=0.999)。最低检测的活菌浓度为55cfu/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.98%。35株单增李斯特菌Ct值最低16.21,最高29.38,而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值。重复试验Ct值变异系数小于5%。30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致。且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10h左右,而常规分离培养方法需要5~7d。结论 EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法,可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用。
- 张俊彦梅玲玲徐昌平占利陈鸿鹄张云怡陈建才张政杨勇
- 关键词：单增李斯特菌活菌
- 配方奶粉加工过程阪崎克罗诺杆菌PFGE分子分型研究被引量：8
- 2014年
- 目的对配方奶粉加工控制过程中分离的阪崎克罗诺杆菌开展PFGE图谱研究。方法用XbaⅠ酶切割,脉冲场凝胶电泳技术建立PFGE指纹图谱,Bio Numerics V 6.6软件进行聚类分析。结果 46株阪崎克罗诺杆菌共形成了29种PFGE基因指纹图谱。除图谱PTP29外,其余菌株的同源性>60%。1件半成品、3件不同批次的产品分离的菌株图谱一致(图谱PTP3)。图谱PTP7、PTP8的菌株分别分离自原料奶粉和浓缩乳清蛋白粉。图谱PTP18菌株分离自成品、筛粉、墙壁、设备传送带样品。图谱PTP27菌株分离自成品、混料(半成品)和α-乳白蛋白。结论 PFGE技术对阪崎克罗诺杆菌具有很好的分型效果。阪崎克罗诺杆菌存在局部流行现象,原料带菌、加工环境是婴儿配方粉阪崎克罗诺杆菌污染的主要途径。
- 周蒂颜巧红郝东海王新苗陈建才梅玲玲
- 关键词：配方奶粉
- 食品中志贺活菌叠氮溴乙锭实时荧光聚合酶链反应技术研究被引量：3
- 2016年
- 目的利用叠氮溴乙锭（ethidium monoazide bromide,EMA）实时荧光聚合酶链反应（PCR）技术,建立一种简便、快速、特异、灵敏的在食品中检测志贺活菌的方法。方法根据志贺菌ipa H基因保守序列设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品EMA前处理条件。用已知菌验证志贺活菌检测的敏感性和志贺死菌检测的抑制性。用31株志贺菌、26株单增李斯特菌、24株沙门菌、25株副溶血弧菌、11株阪崎肠杆菌、10株致病性大肠埃希菌和1株大肠埃希菌验证方法的特异性和稳定性。同时用本研究方法和常规分离培养法,对30件模拟样品进行实样验证。结果志贺活菌EMA实时荧光PCR方法的循环阈值（Ct）=32.10~3.19×log（菌量）（R2=0.994）。最低检测浓度为2.20 CFU/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.97%。31株志贺菌Ct值最低为15.04,最高为26.54,而97株非志贺菌的Ct值均〉35或无Ct值（呈一条直线）。重复试验Ct值变异系数〈3。30件模拟样品采用本研究方法和常规分离培养法的检测结果一致,但采用EMA实时荧光PCR方法耗时不超过7.5 h,而常规分离培养方法则需要3~5 d。结论 EMA实时荧光PCR技术是一种快速简便、特异性强、灵敏度高、仅检测志贺活菌的方法,建议在食品检测中推广应用。
- 梅玲玲徐昌平杨勇占利陈鸿鹄张云怡张俊彦陈建才程苏云
- 关键词：食品志贺菌实时荧光PCR
- 杭州市某区星级酒店集中空调冷却水及冷凝水中军团菌表型及基因分型特征研究被引量：4
- 2019年
- 目的了解杭州市某区星级酒店集中空调系统军团菌优势菌群和优势基因特征。初步建立军团菌PFGE分型数据库,为该地区军团菌分子流行病学调查提供重要依据。方法采用传统的血清分型结合PFGE聚类分析的方法,应用BioNumerics 6.0软件进行聚类分析。结果75株军团菌,血清分型结果嗜肺军团菌6种、非嗜肺军团菌3种,其中88%为嗜肺军团菌(66/75),以LPl型为主。来源为冷却水占85.33%(64/75),冷凝水仅占14.67%(11/75)。经聚类分析分为39种PFGE型,菌株间相似系数在29.9%-100.0%。每种带型包含1株~10株菌,存在13组带型一样的菌株,结论2008年-2017年从杭州市某区星级酒店集中空调系统分离的军团菌呈多态性分布,不同年份分离的军团菌存在同源性菌株。
- 张睿陈建才赵雪琴
- 关键词：军团菌脉冲场凝胶电泳分子分型
- 一种快速检测食品中志贺活菌的试剂盒及应用
- 本发明公开了一种快速检测食品中志贺活菌的试剂盒及应用，该试剂盒包含PCR反应试剂、叠氮溴乙锭、阳性对照和阴性对照；本发明的检测试剂盒能区别食品中死的志贺氏菌，并且特异性高、灵敏度高；整个检测过程不超过2h，特别适合食品中...
- 梅玲玲徐昌平占利张云怡陈鸿鹄杨勇张俊彦陈建才张政
- 文献传递
- 副溶血性弧菌实时重组酶聚合酶扩增检测技术研究被引量：6
- 2019年
- 目的建立快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增技术(RPA)。方法根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立检测副溶血性弧菌的实时RPA方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价方法灵敏度,通过检测不同种属弧菌及其他细菌标准株评价方法特异度,通过重复试验评价方法稳定性,通过实样检测评价方法应用效果。结果建立的实时RPA方法在39℃恒温下20min内完成副溶血性弧菌扩增,最低检测限为5pg/反应,与其他致病菌无交叉反应,不同浓度的副溶血性弧菌DNA模板和大肠杆菌DNA模板隔日3次实时RPA检测结果一致,实时RPA对51份鲜活/冰鲜鱼、虾、贝、蟹类样品的检测结果与GB4789.7—2013《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》检测结果一致。结论建立的实时RPA方法可定性检测副溶血性弧菌,且实验操作及结果判读简单,适用于突发公共卫生事件、食品安全监管中的副溶血性弧菌快速检测。
- 占利徐昌平张云怡陈鸿鹄张政陈建才张俊彦梅玲玲
- 关键词：副溶血性弧菌
