章辉
- 作品数：7 被引量：3H指数：1
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- Exendin-4通过调节自噬溶酶体系统抑制糖基化终末产物诱导的血管内皮细胞凋亡的研究
- 章辉徐婷石厚霞赵静赵馨刘翠萍葛颂武晓泓
- 新生期小鼠胰岛细胞自噬及其机制研究
- 2016年
- 目的观察新生期小鼠胰岛细胞自噬的变化，分析白噬相关基因的表达差异并初步探讨相关调控机制。方法采用胶原酶消化法分离纯化第1、3和8周小鼠胰岛细胞，透射电镜观察白噬体显微结构。采用免疫荧光双染法检测胰岛中微管相关蛋白1轻链3（LC3）与胰岛素双阳性细胞比例的变化。采用实时定量PCR技术检测自噬相关基因（Atg）mRNA水平的表达。采用Western blotting法检测目的蛋白的表达。多组间数据比较采用单因素方差分析。结果（1）透射电镜结果显示，3周小鼠胰岛细胞出现内含胞浆或细胞器成分的具有双层膜结构的自噬体。免疫荧光结果显示，LC3在3周小鼠胰岛B细胞胞浆中着色较深，表达高于1周和8周（57．6±2．3比24．4±1．3、28．1±2．3，t=-21．44、-15．66，均P〈0．01）。（2）3周时，p53mRNA表达明显高于1周和8周，而哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA表达显著低于1周和8周（均P〈0．01）。新生期小鼠胰岛细胞Atg的表达呈动态变化。与1周和8周相比，3周时Atgl激酶同源蛋白（ULK—1）、Beclinl和Mapllc3b表达明显增高（P〈0．05）。与1周相比，3周时P13Kc3、Atg5、Mapllc3a和Atgl611表达显著增高（P〈0．05）；3周和8周时Atg4d的表达显著增高（P〈0．05）。Atg4c表达在3周时明显高于8周（P〈0．05）。（3）Western blotting显示，与1、8周相比，3周时p53、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（pAMPK）、Beclinl和LC3-Ⅱ蛋白表达均显著增高（F=29．14～56．05，均P〈0．01），而mTOR蛋白表达明显低于1周和8周（0．61±0．06比1．00±0．02、0．89±0．09，F=29．41，P〈0．01）。结论p53／pAMPK／mTOR／Beclinl介导的自噬信号通路可能参与新生期小鼠胰岛细胞自噬的调控。
- 高莉章辉石厚霞赵静赵馨徐宽枫武晓泓
- 关键词：胰岛自噬基因
- 新生期小鼠胰岛细胞凋亡及其机制的研究
- 2014年
- 目的 观察新生期小鼠胰岛细胞凋亡的变化特点并分析细胞凋亡相关基因的表达差异,初步探讨相关机制.方法 采用胶原酶消化法分离纯化第1、3和8周小鼠胰岛细胞,以磷脂结合蛋白V-绿色荧光素/碘化丙啶双染法流式细胞术检测细胞凋亡率.透射电镜观察胰岛细胞凋亡形态,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（Tunel）/胰岛素免疫荧光双染法检测凋亡.采用实时定量PCR技术检测凋亡相关基因mRNA的表达.采用Western blotting技术检测促凋亡基因和抗凋亡基因的表达.多组间统计数据比较采用单因素方差分析.结果 （1）新生期小鼠胰岛细胞凋亡率在3周时显著增加,明显高于1周和8周[分别为（10.53±2.61）％、（1.80±0.69）％、（3.26±0.94）％,F=32.09,P＜0.01].透射电镜结果显示新生第3周小鼠胰岛细胞核出现凋亡早期改变.3周时Tunel/胰岛素双阳性细胞数明显高于1周和8周.（2）新生期小鼠胰岛细胞凋亡相关基因的表达呈动态变化,3周时,促凋亡基因Fas和FasL的mRNA表达均明显高于1周和8周（分别为1.53±0.21、1.00±0.00、0.46±0.24,F=24.85,P＜0.01;2.63±0.56比1.00±0.00、0.52±0.14,F=32.77,P＜0.01）,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达明显低于1周和8周（分别为0.30±0.23、1.00±0.00、1.71±0.00,F=78.06,P＜0.01）.（3）3周时,Fas、FasL和裂解的Caspase-3蛋白表达均明显高于1周和8周（分别为2.05±0.16、1.00±0.00、0.59±0.24,F=61.47,P＜0.01;3.54±0.86、1.00±0.00、0.72±0.26,F=27.04,P＜0.01;5.74±0.59比1.00±0.00、3.11±0.20,F=128.79,P＜0.01）;Bcl-2蛋白表达明显低于1周和8周（0.62±0.13比1.00±0.00、1.90±0.10,F=151.08,P＜0.01）.结论 Fas/FasL以及Bc1-2介导的细胞凋亡信号通路可能参与新生期小鼠胰岛细胞凋亡的调控.
- 高莉徐一力朱嘉瑜张于芝赵静章辉武晓泓
- 关键词：胰岛凋亡基因
- Exendin-4通过诱导细胞自噬拮抗氧化应激对血管内皮细胞损伤的研究
- 目的 氧化应激引发的血管内皮细胞损伤是糖尿病血管病变的主要发病机制.本研究旨在观察Exendin-4诱导人主动脉血管内皮细胞(HAECs)自噬对氧化应激导致血管内皮细胞损伤的影响,探讨相关作用机制.方法 将培养的HAEC...
- 武晓泓章辉徐婷石厚霞赵静赵馨刘翠萍
- KCNJ11基因V59A和V59M突变导致的新生儿糖尿病临床特点被引量：2
- 2017年
- 选取经基因检测分别为KCNJ11V59A和V59M突变的2例新生儿糖尿病患儿，回顾分析其临床资料。结果显示，V59A突变的患儿于3月龄时以痉挛发作、高血糖起病．初次转换格列本脲治疗不成功，遂长期予胰岛素治疗。随访中患儿出现肌无力、生长发育迟缓的症状，2岁时再次尝试格列本脲治疗，所需药物剂量大，血糖控制一般。V59M突变的患儿于2月龄时以腹泻、高血糖、酮症起病，转换为口服药物格列本脲治疗，血糖控制稳定，所需药物剂量小。提示KCNJ11基因V59M突变在临床表型上轻于V59A突变．格列本脲的治疗效果也优于V59A突变。
- 赵馨顾威章辉倪世宁武晓泓
- 关键词：新生儿糖尿病格列本脲
- 新生期小鼠胰岛细胞自噬的变化及其机制的研究
- 目的 新生期是胰岛细胞数量剧增和功能完善的重要时期,通过细胞复制、新生、肥大、死亡、萎缩和自噬保持稳定的数量和功能状态以适应机体代谢的变化和需求.既往研究表明,细胞增殖和凋亡参与胰岛细胞新生期重塑过程,共同调控胰岛细胞量...
- 高莉章辉徐一力石厚霞赵静刘翠萍武晓泓
- 人主动脉内皮细胞体外培养方法的建立及生物学活性鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的:建立体外人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)提取和培养的方法。方法:从术中取下的人主动脉组织上剥离内皮层,Ⅰ型胶原酶消化分离HAECs,利用显微镜观察其生长状况,免疫组织化学方法及流式细胞法鉴定及检测细胞纯度,以氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)检测细胞吞噬功能并检测细胞在体外的血管生成能力。结果:0.1%及0.2%的Ⅰ型胶原酶,最佳消化时间均为50 min,2 h贴壁细胞数分别(25.2±2.1)×103,(40.5±3.8)×103)个。细胞融合后在倒置显微镜下呈"鹅卵石"样排列生长。血小板-内皮黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)及Ⅷ因子鉴定为阳性,细胞纯度达(96.43±4.12)%。细胞内吞ox-LDL及血管生成能力较好。结论:钝性分离主动脉内皮层,辅以Ⅰ型胶原酶消化是一种较好的HAECs获取方法,酶浓度及消化时间是其重要的影响因素。
- 何珂帅章辉张俊杰吴亚武晓泓邵永丰
- 关键词：免疫组织化学细胞分离细胞培养流式细胞术
