- 一种寡核苷酸和可消除质粒共转化用于大肠杆菌必需基因点突变的方法
- 本发明涉及一种利用寡核苷酸和可消除的质粒共转化对大肠杆菌基因组上的必需基因进行点突变的方法。具体为将前面四个碱基以硫磷酰基连接的、长度为91个碱基、中间为突变位点的寡核苷酸和可消除的质粒共转化表达重组酶的大肠杆菌。可消除...
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- 重组酶基因bet作为一种大肠杆菌异源蛋白表达融合标签的应用
- 本发明涉及一种将来源于lambda噬菌体的重组酶基因bet作为融合标签的方法。本方法是将来源于lambda噬菌体的重组酶基因bet作为融合标签。将六个组氨酸、bet基因、TEV酶切位点和一段填充片段等元件的核苷酸序列克隆...
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- 一种大肠杆菌细胞内蛋白酶剪切融合蛋白的方法
- 本发明涉及一种大肠杆菌细胞内蛋白酶剪切融合蛋白以分离目的蛋白的方法。所使用的宿主菌为通过重组工程方法将强启动子T7驱动的TEV蛋白酶基因整合至大肠杆菌表达宿主菌BL21(DE3)而获得。表达载体为将麦芽糖结合蛋白和填充片...
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- 重组工程介导的谷氨酸棒杆菌ATCC 13032的基因敲除方法
- 本发明涉及一种重组工程介导的谷氨酸棒杆菌ATCC？13032基因敲除方法。具体实施步骤是通过聚合酶链式反应扩增获得两侧为针对待敲除基因的500bp同源序列、中间为卡那霉素抗性基因的DNA片段。将此DNA片段电转化至由异丙...
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- 寡核苷酸介导的重组工程法构建容纳毒性基因ccdB的新型菌株被引量：1
- 2016年
- 毒性基因ccd B是最为常用的一种负筛选标记,ccd B基因和R6K复制子一起组成了高效的基因克隆和基因组修饰的遗传操作元件.为获得高转化效率的容纳ccd B基因的菌株,本研究采用重组工程手段,以经优化去除了错配修复的寡核苷酸与p UC骨架、含有ccd B基因的质粒p MK2010共转化,直接对含pir116基因型的大肠杆菌DH10B衍生菌株的基因组进行修饰.在筛选的10个菌株中,7个为预期的Gyr A462基因型.为消除p MK2010,构建了一个p UC骨架、氨苄青霉素抗性的诱导自剪切质粒p LS2750.p LS2750通过质粒不相容性去除p MK2010后,经诱导I-Sce I自剪切而消除.所得菌株LS027的电转化效率为6.9×10~8/mg,是对照菌株的约100倍,R6K质粒呈现高拷贝.以LS027为宿主菌的构建了系列克隆载体,以只进行基因克隆可避免载体自连的干扰.新型ccd B基因容纳菌株LS027有着基因操作方面广泛运用的潜力.
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- 关键词：CCD寡核苷酸
- 重组酶基因bet作为一种大肠杆菌异源蛋白表达融合标签的应用
- 本发明涉及一种将来源于lambda噬菌体的重组酶基因bet作为融合标签的方法。本方法是将来源于lambda噬菌体的重组酶基因bet作为融合标签。将六个组氨酸、bet基因、TEV酶切位点和一段填充片段等元件的核苷酸序列克隆...
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- 一种寡核苷酸和可消除质粒共转化用于大肠杆菌必需基因点突变的方法
- 本发明涉及一种利用寡核苷酸和可消除的质粒共转化对大肠杆菌基因组上的必需基因进行点突变的方法。具体为将前面四个碱基以硫磷酰基连接的、长度为91个碱基、中间为突变位点的寡核苷酸和可消除的质粒共转化表达重组酶的大肠杆菌。可消除...
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- 重组工程法敲除恶臭假单胞菌KT2440和谷氨酸棒状杆菌ATCC13032染色体基因
- 重组工程(Red/ET, recombination mediated genetic engineering)是指通过重组酶催化DNA分子之间的同源重组而实现DNA克隆和DNA修饰一种基因工程手段，是一种新型高效的遗传...
- 骆希
- 关键词：细胞染色体基因重组
