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海南辣椒病毒种类调查及分子鉴定: 辣椒是海南冬季瓜菜主要产业之一,也是南菜北运蔬菜的主要品种之一。病毒病的发生制约海南辣椒种植业的发展。为此,我们对海南辣椒病毒病的发生情况进行调查。通过RT-PCR方法对采集的114份疑似病毒辣椒样品进行了检测,共鉴定出...; 余乃通梁洁章绍延王健华刘志昕

一种简并引物及利用该简并引物检测马铃薯Y病毒属病毒的方法: 本发明公开了一种简并引物，其由正向引物和反向引物组成，正向引物的核苷酸序列为：5’-GTITGYGTKGAYGAYTTYAAYAA-3’；反向引物的核苷酸序列为：5’-GTRTGBCKYTCIGTRTYYTC-3’；其中...; 章绍延王健华刘志昕张雨良余乃通张秀春周朋梁洁; 文献传递

甜椒脉斑驳病毒(PVMV)在海南的发现与检测被引量：5: 2015年; 2014年在海南辣椒病毒病调查过程中发现了一种疑似病毒感染的辣椒样品,主要表现为叶片黄化、绿斑驳、叶脆易折断,且在田间发生较多。利用马铃薯Y病毒属的简并引物对其叶片总RNA进行RT-PCR检测,并将约1 700 bp目的片段克隆到p MD18-T载体上进行测序和BLAST分析。结果表明:该条带序列(包含部分NIb和部分cp基因)与已收录的甜椒脉斑驳病毒(Pepper veinal mottle virus,PVMV)(Gen Bank登录号:FM202327)序列相似性最高,达99%。设计cp基因的特异引物,对上述样品进行cp基因扩增并构建以cp基因序列为基础的系统进化树,发现海南辣椒上的PVMV与台湾的PVMV分离物ns1株同源性最高。田间检测结果表明:海南黄灯笼辣椒上PVMV的检出率高达74.07%,说明PVMV可能成为海南辣椒生产上的潜在威胁。; 梁洁王健华章绍延余乃通张雨良王祥刘志昕; 关键词：辣椒病毒病

海南辣椒上一种潜在危害性较大的病毒-Pepper veinal mottle virus (PVMV): [研究目的]近年来,在海南辣椒病毒病调查过程中发现了一种疑似病毒感染的辣椒样品,其症状区别于辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)和辣椒环斑病毒(Chilli ringspo...; 梁洁王健华章绍延余乃通王祥刘志昕; 关键词：辣椒病毒病株系

一种简并引物及利用该简并引物检测马铃薯Y病毒属病毒的方法: 本发明公开了一种简并引物，其由正向引物和反向引物组成，正向引物的核苷酸序列为：5’-GTITGYGTKGAYGAYTTYAAYAA-3’；反向引物的核苷酸序列为：5’-GTRTGBCKYTCIGTRTYYTC-3’；其中...; 章绍延王健华刘志昕张雨良余乃通张秀春周朋梁洁; 文献传递

海南辣椒病毒病调查及病原种类的分子鉴定: 是海南冬季南菜北运蔬菜的主要品种之一,病毒病的发生制约海南辣椒种植业的发展.为此,对海南辣椒病毒病的发生情况进行调查.通过RT-PCR方法对采集的114份疑似病毒辣椒样品进行了检测,共鉴定出5种主要病毒,包括黄瓜花叶病毒...; 梁洁章绍延王健华余乃通刘志昕; 关键词：辣椒病毒病病原分析分子鉴定

香蕉分化芽BBTVDAS-ELISA检测方法的建立和应用: 2014年; 为了解海南海口香蕉分化芽携带香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的情况,本研究建立了双抗夹心酶联免疫反应(DAS-ELISA)检测法,对来自海南地区组培厂的香蕉分化芽进行检测。检测结果表明,6个品种1 852个香蕉分化芽平均带毒率为2.1%,其中‘皇帝蕉’为1.98%,‘粤科1号’为2.07%,‘广粉蕉’为1.98%,‘大蕉’为6.25%,‘218’为1.89%,‘巴西蕉’为2.25%。为了进一步验证ELISA结果的可靠性,随机选取12个阳性样品提取总DNA进行PCR鉴定。鉴定结果显示,12个样品中11个检测出有BBTV,表明DAS-ELISA方法的准确率较高,与分子检测结果基本一致,可以胜任日常香蕉组培苗BBTV的检测。; 周朋余乃通章绍延王健华胡加谊王祥梁洁刘志昕; 关键词：香蕉束顶病毒 DAS-ELISA 病毒检测

香蕉束顶病毒cp和mp酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活验证被引量：2: 2014年; 分别用两对引物PCR扩增BBTV cp、BBTV mp片段,混合各自PCR产物进行熔化退火可得到1/4两端含有Eco R玉和Bam H玉的PCR产物,分别克隆到酵母双杂交系统的p GBKT7诱饵载体中,并成功获得p GBKT7-cp和p GBKT7-mp。将重组质粒导入酵母Y2H菌株,转化成功后进行诱饵载体的自激活验证及毒性验证。结果表明,获得了正确的BBTV-cp和BBTV-mp基因片段,并成功克隆到p GBKT7诱饵载体中,同时在SD/-Trp营养缺陷平板上转化有诱饵载体的Y2H生长良好,说明诱饵载体的表达产物对酵母细胞无毒性,对报告基因也无自激活作用,最后自激活验证确定了p GBKT7-cp和p GBKT7-mp可用于该系统的互作蛋白筛选,为下一步利用酵母双杂交系统检测与CP、MP蛋白相互作用的寄主蛋白奠定基础。; 王祥张秀春余乃通周朋梁洁刘志昕; 关键词：香蕉束顶病毒酵母双杂交诱饵载体自激活

香蕉束顶病毒nsp酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活验证: 2015年; 香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)DNA6编码的核穿梭蛋白(nuclear shuttle protein,NSP)在病毒的侵染、复制、运输中起重要作用。为了利用酵母双杂交系统研究BBTV DNA6与寄主香蕉蛋白的互作,本实验利用两对引物的PCR扩增得到BBTV nsp片段,混合各自PCR产物进行熔化退火可得到1/4两端含有EcoRⅠ和Bam HⅠ的酶切位点序列的DNA产物,将目的片段连接到酵母双杂交系统的p GBKT7诱饵载体中,成功获得p GBKT7-nsp,并将重组质粒p GBKT7-nsp转化入Y2H Gold酵母菌株中进行毒性检测和自激活验证。结果表明,p GBKT7-nsp没有自激活活性,同时对酵母细胞也无毒性,符合酵母双杂交诱饵质粒的要求,可用于下一步的蛋白互作实验。; 王祥张秀春余乃通梁洁周朋刘志昕; 关键词：香蕉束顶病毒酵母双杂交诱饵载体自激活

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梁洁