聂丽珠 作品数:7 被引量:7 H指数:2 供职机构: 重庆医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
乙型肝炎病毒对肝癌细胞Arid2基因表达的影响 <正>目的初步研究乙型肝炎病毒感染及其复制对肝癌细胞中抑癌基因Arid2表达的影响。方法采用携带1.1拷贝HBV基因组的复制型重组腺病毒Ad-HBV1.1感染HepG2和Huh7细胞,或者四环素诱导的HBV复制细胞模型H... 李治 陈震 段玉洁 聂丽珠 田玲 唐霓文献传递 新型抑癌基因Arid2对CD44的表达调控及其对肝癌细胞迁移和侵袭的影响 被引量:4 2016年 目的 观察新型抑癌基因Arid2对人肝癌细胞HepG2和Huh7细胞中CD44的表达调控,初步探讨Arid2调控肝癌细胞侵袭和迁移的机制. 方法 构建pGL3-CD44报告质粒并转染至人肝癌细胞HepG2及Huh7细胞中,感染腺病毒Ad-Arid2后,双荧光素酶实验检测报告质粒相对荧光素酶活性的变化;Western blot检测过表达Arid2对跨膜糖蛋白CD44表达的影响.细胞迁移与侵袭实验检测过表达Arid2对细胞迁移和侵袭能力的影响,并在裸鼠荷瘤实验中观察体内移植瘤的生长情况.两组数据之间的比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 荧光素酶活性实验发现,转染不同长度CD44报告质粒后其相对荧光素酶活性均有不同程度的提高,而变化明显的pGL3-CD44-791 ~ +225 bp报告质粒相对荧光素酶在给予过表达Arid2处理后明显下调,抑制率分别为73.83%±0.92%(P<0.05,HepG2)和48.99%±1.37%(P<0.05,Huh7).外源性过表达Arid2能够明显抑制CD44蛋白表达.Transwell实验证实过表达Arid2可以明显抑制人肝癌细胞的迁移能力,在HepG2、Huh7细胞中其抑制率分别为66.95%±0.59%(P<0.05)、73.86%±0.49%(P< 0.05).动物实验结果表明,Arid2明显延缓或抑制荷瘤小鼠皮下移植瘤的生长,其抑制率为98.57%±0.34%(P<0.05).结论 外源过表达Arid2明显下调CD44启动子活性和CD44蛋白表达,并在肝癌细胞和荷瘤裸鼠模型中也明显抑制肿瘤细胞的生长和迁移,提示CD44在Arid2调控肝癌细胞的侵袭和迁移过程中可能发挥了重要作用.该研究为阐明Arid2与CD44分子的关系以及其在肝癌发生、发展中的作用提供了新的研究方向. 田玲 段玉洁 聂丽珠 李治 陈震 高庆祝 杨翼 唐霓 郑建关键词:细胞迁移 转录活性 HCV核心蛋白下调E-cadherin表达的分子机制研究 目的:据统计,原发性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是目前全球范围内最常见的恶性肿瘤之一。非酒精性脂肪肝病、肝炎病毒的慢性感染、过量摄入酒精、黄曲霉素以及自身免疫性肝病等都是引起HCC的重... 聂丽珠关键词:丙型肝炎病毒 慢性感染 分子机制 siArid2重组腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞增殖的影响 2014年 目的:通过RNA干扰技术沉默内源性抑癌基因Arid2(si Arid2)的表达,观察其对肝癌细胞生长及细胞周期的影响。方法:设计3对特异性沉默Arid2基因的shRNA序列,分别克隆到腺病毒骨架载体上形成重组腺病毒质粒。将质粒转染到HEK293细胞中,包装和扩增形成完整高滴度的重组腺病毒Adsi Arid2-1-3。用构建好的腺病毒感染人肝癌SMMC-7721细胞,Western blotting方法检测Arid2蛋白的表达,筛选干扰效果最佳的重组腺病毒。MTS技术和流式细胞术观察干扰Arid2基因后肝癌细胞增殖和细胞周期的变化。结果:成功构建了高滴度的重组腺病毒Adsi Arid2-1-3。经Western blotting鉴定,Adsi Arid2-3为抑制效果最佳的重组腺病毒。MTS结果显示,Adsi Arid2组细胞在72 h、96 h的吸光度值与空细胞组和Adsicontrol组相比增高,细胞增殖速率明显加快。流式细胞术检测结果显示,Adsi Arid2组处于G1期、S期的细胞百分比与空细胞组和Adsicontrol组相比,G1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比明显增多。结论:成功构建干扰Arid2的重组质粒及重组腺病毒。沉默Arid2可以促进肝癌细胞的增殖,促进其由G1期向S期的转换。 段玉洁 聂丽珠 田玲 李治 陈震 唐霓关键词:肝细胞癌 SMMC-7721细胞 细胞增殖 细胞周期 HCV核心蛋白抑制E-cadherin基因启动子活性 <正>目的通过DNA定点诱变技术构建E-cadherin启动子区E-box突变报告质粒,探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)在肝癌细胞中对含有不同E-box点突变的E-cadherin转录活性的影响。方法采用不依... 聂丹 聂丽珠 唐霓文献传递 乙型肝炎病毒复制对肝癌细胞Arid2基因表达的影响 被引量:2 2015年 目的:初步研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染及其复制对肝癌细胞中抑癌基因Arid2(AT-rich interactive domain 2)表达的影响。方法:采用携带HBV基因组1.1倍体的复制型重组腺病毒Ad-HBV1.1感染Huh7细胞,或者四环素诱导的HBV复制细胞模型Hep AD38细胞,观察HBV瞬时或稳定复制细胞模型中Arid2的表达变化;进一步采用HBV各元件乙型肝炎病毒S蛋白(hepatitis B virus S protein,HBs)、乙型肝炎病毒DNA聚合酶(HBV-pol)、乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)、乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)的过表达质粒转染Huh7细胞,明确病毒自身编码蛋白对Arid2表达的调控作用。在上述细胞模型中,运用Southern-blot、ELISA、real-time PCR的方法验证HBV的感染与复制情况,通过RT-PCR、Western blot检测肝癌细胞抑癌基因Arid2表达水平的变化。结果:HBV瞬时转染或稳定复制细胞模型中,Ad-HBV1.1感染的Huh7细胞m RNA和蛋白表达水平明显降低,Western blot结果显示Arid2蛋白表达水平降低了46.10%(P<0.05);在HBV稳定复制的Hep AD38细胞中,Arid2蛋白表达水平降低了37.63%(P<0.05)。转染HBV 4种病毒编码蛋白过表达质粒的Huh7细胞中,过表达HBs、HBx组较其他实验组Arid2表达水平明显降低,Western blot结果显示Arid2蛋白表达水平在HBs组降低了54.55%(P<0.05),在HBx组降低了46.38%(P<0.05)。结论:HBV的感染和复制导致肝癌细胞中Arid2的表达水平下调,Arid2基因的表达与HBV复制水平呈负相关,其中HBs、HBx对Arid2的下调作用较明显。 李治 陈震 段玉洁 聂丽珠 田玲 唐霓关键词:乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒X蛋白 丙型肝炎病毒核心蛋白抑制E-cadherin基因启动子活性 2016年 目的:探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis C virus core protein,HCV core)对E-cadherin启动子活性的调控作用。方法:以Huh7细胞基因组为模板,构建野生型E-cadherin(CDH1)基因启动子荧光素酶报告质粒(pGL3-CDH1),然后设计突变引物序列将人E-cadherin启动子区负性调控关键区域,即位于-80^-75 nt(E-box1),-30^-25 nt(E-box3),和+22^+27 nt(Ebox4)的3个E-box的共识别序列5’-CANNTG-3’突变为5’-AANNTA-3’,分别构建E-box1(pGL3-mut1)、E-box3(pGL3-mut2)、E-box4(pGL3-mut3)、E-box1+3(pGL3-mut1+2)、E-box1+4(pGL3-mut1+3)、E-box3+4(pGL3-mut2+3)、E-box1+3+4(pGL3-mut1+2+3)的荧光素酶报告质粒。将上述质粒与内参质粒p RL-TK分别共转染于过表达核心蛋白的肝癌细胞株SMMC-7721细胞,采用双荧光素酶报告系统检测HCV core对E-cadherin启动子的调控,分析E-cadherin启动子区不同位点的E-box区域在HCV core调控E-cadherin启动子活性中发挥的作用。结果:荧光素酶活性检测结果显示,与GFP对照组相比,HCV core可以明显抑制野生型E-cadherin启动子活性;在E-box单一突变的E-cadherin报告质粒转染细胞中,HCV core对CDH1启动子的抑制作用有不同程度减弱,特别是-80^-75 nt和-30^-25 nt位点的E-box区域作用最为明显;E-box联合突变型质粒转染细胞中,HCV core对CDH1启动子的抑制作用明显减弱。结论:HCV core能明显抑制E-cadherin的转录活性,E-box突变可以部分拮抗HCV core对E-cadherin的转录抑制作用,提示位于-80^-75 nt和-30^-25 nt位点的E-box保守负性调控区域在HCV core对E-cadherin的转录调控中发挥关键作用。 聂丽珠 聂丹 段玉洁 李治 陈震 田玲 唐霓关键词:肝细胞肝癌 丙型肝炎病毒核心蛋白 E-CADHERIN E-BOX 启动子活性