毕成
- 作品数：10 被引量：39H指数：5
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- 碱性成纤维细胞生长因子对国产多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型维持及去分化的影响被引量：2
- 2015年
- 目的对比不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对国产多孔钽-软骨细胞复合物维持软骨细胞表型和去分化作用的影响。方法分离培养3周龄新西兰幼兔膝关节软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、番红O(Safranin O)染色鉴定软骨细胞;取第3代软骨细胞分为5组:A组(1ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),B组(10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),C组(50ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),D组(多孔钽-软骨细胞)及E组(软骨细胞);MTT法检测不同浓度bFGF对多孔钽-软骨细胞生长及增殖状态的影响;扫描电镜观察bFGF-多孔钽-软骨细胞复合物细胞形态及生长;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色检测软骨细胞表型变化及去分化状态;real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达。结果Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色及Safranin O染色均呈阳性反应,证实所分离培养的细胞为软骨细胞;1、10、50ng/mL bFGF均可促进软骨细胞增殖,各实验组(A^D组)软骨细胞增殖与对照组(E组)相比,差异有统计学意义,其中10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞增殖最为明显(P<0.05);组间比较差异有统计学意义(P<0.05);扫描电镜观察:各组软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长、黏附,早期呈不等的球形,24h后胞质延展并向周围伸出多条突起,相互连接、延展向孔隙内部生长,细胞间相互融合并覆盖支架材料;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ和Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色显示10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞组(B组)Ⅱ和Ⅸ型胶原表达高于对照组(E组,P<0.05),组间差异也有统计学意义(P<0.05);而Ⅰ和Ⅹ型胶原表达则低于对照组(E组,P<0.05);real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达显示:各实验组(A^D组)Ⅱ型胶原mRNA的表达高于对照组(E组,P<0.05),而Ⅹ型胶原mRNA表达量则低于对照组(E组,P<0.05)。结论 bFGF能维持多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型,抑制去分化,加强软骨�
- 张辉王茜赵阳甘洪全王辉毕成李琪佳王志强
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子软骨细胞
- 骨形成蛋白-7对多孔钽/软骨细胞复合物分泌功能以及Col-Ⅱ、AGG和Sox9基因表达的影响被引量：10
- 2015年
- 目的:研究人重组骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对国产多孔钽/软骨细胞复合物中软骨细胞分泌功能以及Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen,Col-Ⅱ)、蛋白聚糖(aggrecan,AGG)和SRY相关高迁移率组基因9(SRY-related high mobility group-box gene 9,Sox9)mRNA表达的影响。方法:3周龄新西兰幼兔,取双膝关节软骨细胞分离培养及鉴定,将生长状态良好的第2代细胞以1×106/m L浓度接种于多孔钽并给予不同浓度BMP-7,分为对照组(多孔钽/软骨细胞组)、50μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组、100μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组及200μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组。CCK-8法检测不同浓度BMP-7对多孔钽/软骨细胞生长及增殖的影响,扫描电镜观察各组软骨细胞在多孔钽表面及内部生长情况,二甲基亚甲蓝(dimethyl methylene blue,DMMB)比色定量法对BMP-7/多孔钽/软骨细胞复合物糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)进行定量检测,实时荧光定量PCR检测Col-Ⅱ、AGG和Sox9 mRNA的表达。结果:原代软骨细胞培养24 h后呈梭形生长,4 d后细胞呈多角形,胞浆丰富。阿辛蓝(alcian blue)、番红O(safranin O)、Col-Ⅱ免疫细胞化学染色均呈阳性反应。CCK-8法细胞增殖检测结果显示,100μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组细胞增殖水平高于其他各组(P<0.05)。扫描电镜示各组软骨细胞在多孔钽表面生长状态良好,细胞有多个突起、伸展、叠层生长并覆盖于多孔钽表面。GAG定量检测显示,100μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组GAG含量比其他各组均明显升高(P<0.05);实时荧光定量PCR检测显示,各实验组Col-Ⅱ、AGG和Sox9 mRNA表达量均高于对照组,以200μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组升高最为明显(P<0.05)。结论:BMP-7/多孔钽/软骨细胞复合体能促进体外软骨细胞增殖及细胞外基质的分泌,促进软骨基因的表达。
- 张辉李亮王茜甘洪全王辉毕成李琪佳王志强
- 关键词：骨形态发生蛋白7钽软骨细胞葡糖氨基聚糖类
- 关节镜清理联合氨基葡萄糖胶囊治疗膝骨性关节炎疗效观察被引量：7
- 2015年
- 目的观察膝关节镜清理联合硫酸氨基葡萄糖胶囊口服治疗膝关节骨性关节炎的临床效果。方法收集该院2011—2013年住院行关节清理患者80例,按治疗方法不同随机分成对照组和观察组。对照组:单纯行关节镜清理术患者40例;观察组:关节镜清理术患者40例,术后辅以硫酸氨基葡萄糖胶囊口服(根据说明书建议剂量给予0.5g口服,3次/d,连续服用1个月)。术前,术后3个月、6个月对二组患者治疗前后采用膝骨关节骨性关节炎严重性指数(Lequene和Mery评分系统)进行评分,比较临床疗效。结果和治疗前相比,术后膝关节骨性关节炎评分较前明显改善(P<0.05);术后口服氨基葡萄糖胶囊组较对照组膝关节骨性关节炎评分改善(P<0.05)。结论膝关节镜清理联合口服硫酸氨基葡萄糖胶囊治疗膝关节骨性关节炎能有效缓解关节疼痛,有良好的近期临床疗效,但是远期效果还需进一步观察。
- 宋敬锋毕成刘昊白俊清孙晓新
- 关键词：关节镜氨基葡萄糖胶囊骨性关节炎
- 精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽表面修饰多孔钽对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能的促进作用被引量：5
- 2015年
- 目的:研究精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽表面修饰多孔钽(Ta)对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能等生物学行为的影响,探讨RGD/软骨细胞/多孔钽复合物作为软骨组织工程支架材料修复软骨缺损、促进软骨再生的可行性。方法:通过物理吸附的方法将不同浓度RGD肽及Ⅱ型胶原(ColⅡ)吸附于多孔钽表面,分为Ta-RGD组、Ta-ColⅡ组、Ta-RGD/ColⅡ0.2g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ5.0g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ10.0g·L-1组及纯Ta组。分离培养新西兰幼兔关节软骨细胞,取第2代细胞种植于修饰前后多孔钽使其成为RGD/软骨细胞/多孔钽复合物;扫描电镜观察RGD/软骨细胞/多孔钽复合物形貌特征以及软骨细胞生长状态,沉淀法检测多孔钽修饰前后软骨细胞黏附率,MTT法检测多孔钽修饰前后软骨细胞的增殖水平,羟脯氨酸法测定软骨细胞分泌功能。结果:多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞黏附率均高于修饰前(P<0.05),其中黏附效果最好的是4h的Ta-RGD/ColⅡ5.0g·L-1组,同时各组间黏附率比较差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜下各组软骨细胞在修饰后的多孔钽表面生长状态良好,细胞在多孔钽表面及孔隙内生长,分泌细胞外基质覆盖于多孔钽表面;MTT检测,多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞增殖水平均高于修饰前(P<0.05),其中增殖效果最好的是13d的Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组;羟脯氨酸检测,Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组羟脯氨酸水平高于其他各组(P<0.05)。结论:RGD多肽可有效加强软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内的黏附及增殖,对软骨细胞的分泌有促进作用。
- 甘洪全王茜张辉赵宏坤王辉宋会平毕成王志强李琪佳
- 关键词：软骨细胞
- MG63细胞与国产多孔钽材料共培养后成骨相关因子的表达研究被引量：13
- 2014年
- 目的观察MG63细胞与国产多孔钽材料共培养后成骨相关因子的表达,探讨该材料作为骨组织工程支架的可行性。方法实验分为3组,A组为多孔钽材料与MG63细胞共培养组,B组为多孔钽浸提液与MG63细胞共培养组,C组为单纯MG63细胞培养组。A组于培养后3、5、7 d行扫描电镜观察细胞在材料上的黏附情况;培养5 d分别采用免疫组织化学染色和Western blot检测各组成骨相关因子Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2,Runx-2)、骨钙素(osteocalcin,OC)和纤维连接蛋白(fi bronectin,FN)的表达。结果培养3 d,A组细胞在材料表面及孔隙内黏附生长,细胞排列较稀疏,突起少;5 d,相邻细胞互相连接成片状,覆盖材料表面及孔隙内壁;7 d,细胞分泌大量细胞外基质,覆盖大部分材料表面。各组细胞均有不同程度Runx-2、OC和FN表达,其中A组细胞质深染,表达较其余2组明显。免疫组织化学染色和Western blot定量分析示,A组Runx-2、OC表达量显著高于B、C组(P<0.05);B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。3组间FN表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论国产多孔钽材料有利于MG63细胞的早期黏附、生长,并可能影响Runx-2、OC的表达,可用作骨组织工程支架材料。
- 王茜张辉耿丽鑫李琪佳甘洪全王辉毕成王志强
- 关键词：MG63细胞骨钙素纤维连接蛋白
- 选择性膝关节清理联合痹祺胶囊治疗膝关节骨性关节炎疗效观察
- 目的观察膝关节镜清理联合痹祺胶囊口服治疗膝关节骨性关节炎的临床效果。方法收集我院2012年1月到2013年1月住院行关节清理病人70例(115个膝关节),按治疗方法不同随机分成对照组和观察组。对照组:单纯行关节镜清理术病...
- 宋敬锋毕成刘昊白卫飞
- 关键词：膝关节关节镜痹祺胶囊骨性关节炎
- 文献传递
- 先择性膝关节清理联合痹祺胶囊治疗膝关节骨性关节炎疗效观察
- 目的 观察膝关节镜清理联合痹祺胶囊口服治疗膝关节骨性关节炎的临床效果.方法 收集我院2012年1月到2013年1月住院行关节清理病人70例(115个膝关节),按治疗方法不同随机分成对照组和观察组.对照组：单纯行关节镜清理...
- 宋敬锋毕成刘昊白卫飞
- 关键词：膝关节关节镜痹祺胶囊骨性关节炎
- Barton骨折术后联合应用鹿瓜多肽疗效观察被引量：4
- 2014年
- 目的观察鹿瓜多肽注射液在Barton骨折术后患者中应用的临床疗效。方法33例Barton骨折术后患者，分为二组：术后应用鹿瓜多肽组15例，根据说明书推荐剂量鹿瓜多肽注射液组应用鹿瓜多肽注射液8～12ml＋生理盐水250ml静脉滴注1次／d，15d为1个疗程。单纯手术组18例。术后二组均辅以腕关节功能练习，术后观察骨折愈合时间及术后1，3，6，12个月观察腕关节功能评分。结果33例患者均获得随访12个月，鹿瓜多肽注射液组骨折愈合时间明显短于单纯手术组（P〈0．05），Cooney腕关节评分在1，3个月时差异有统计学意义（P〈0．05），6，12个月差异无统计学意义（P〉0．05）。结论鹿瓜多肽注射液能够缩短骨折愈合时间，减轻术后患肢肿痛，可加快早期关节功能锻炼，从而早期改善腕关节活动功能，但长期观察无明显差异。
- 宋敬锋梁春雨白俊清刘昊毕成白卫飞
- 关键词：BARTON骨折鹿瓜多肽注射液功能锻炼
- 国产多孔钽复合MG63细胞培养Col-1、OC和OPN蛋白表达及意义被引量：5
- 2015年
- [目的]观察国产多孔钽材料复合MG63细胞培养后细胞增殖粘附情况,并检测成骨相关因子Col-1、OC和OPN表达情况,研究国产多孔钽材料的生物相容性,为国产多孔钽的临床应用提供理论依据。[方法]将MG63细胞与国产多孔钽材料复合培养,通过倒置相差显微镜、扫描电镜观察检测细胞粘附情况,MTT法检测细胞增殖情况,免疫细胞化学和免疫蛋白印迹法,检测Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,Col-1)、骨钙素(osteocalcin,OC)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达变化情况。[结果]MG63细胞与多孔钽材料复合培养后,细胞增殖情况良好,与对照组比较无差异(P>0.05);细胞在材料表面及孔隙内生长粘附并长入孔隙中,并逐渐完全覆盖材料;免疫细胞化学与免疫蛋白印迹结果提示复合培养组出现Col-1、OC表达增强(P<0.05),OPN的表达无明显差异(P>0.05)。[结论]国产多孔钽材料有利于MG63细胞的黏附、生长,具备良好的生物相容性,并可能影响Col-1、OC的表达。
- 王茜张辉耿丽鑫李琪佳甘洪全王辉毕成王志强
- 关键词：MG63MTTI型胶原骨钙素
- 经嗅鞘细胞条件培养液诱导的骨髓基质干细胞移植对脊髓损伤修复的影响被引量：1
- 2015年
- [目的]研究经嗅鞘细胞条件培养液诱导的骨髓基质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤的治疗作用。[方法]采用脊髓挤压损伤方法,制造SD大鼠脊髓损伤动物模型(共24只),随机分成A、B、C三组(每组8只),立即分别将DMEM、BMSCs和经诱导的BMSCs移植入脊髓损伤部位,分别于移植4、8周后处死动物,均采用HE染色观察脊髓损伤处空洞面积改变情况;并采用抗神经丝(NF)抗体、生长相关蛋白-43(GAP-43)抗体和神经元特异性核蛋白(Neu N)抗体免疫组织化学荧光染色,观察移植的BMSCs存活和分化情况及损伤部位神经纤维再生情况。[结果]移植4、8周后,脊髓损伤区空洞为移植细胞充填,空洞面积明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),BBB评分结果 C组和A、B组之间存在统计学差异(P<0.05)。B、C组均可见再生神经纤维形成,同时部分移植细胞呈Neu N染色阳性,在C组上述改变更加显著。[结论]经嗅鞘细胞条件培养液诱导的BMSCs可以在脊髓损伤区存活,能够显著减小脊髓损伤处空洞面积,并可以促进脊髓损伤区神经纤维的修复再生,促进大鼠双下肢运动功能的恢复。
- 冯林杰甘洪全刘英杰余向前刘昊毕成罗卓荆
- 关键词：脊髓损伤骨髓基质干细胞条件培养液
