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羊核因子I/B的3个蛋白质异构体功能差异分析: 2016年; 核因子I/B(nuclear factor I/B,NFIB)是一个重要的转录因子,在细胞增殖、凋亡和组织发育等生物学过程中发挥重要作用。前期研究发现,绵羊NFIB基因存在3个转录异构体(transcript isoform),分别编码3个不同的蛋白质异构体(protein isoform):NFIB-1(48 k Da)、NFIB-2(43 k Da)和NFIB-3(39 k Da)。目前,这些蛋白质异构体之间的功能差异还不清楚。为此,该研究分别设计了羊NFIB基因转录异构体的特异性表达检测引物,采用Real-time PCR开展NFIB基因3个转录异构体的组织表达谱分析;分别构建NFIB基因的3个蛋白质异构体的真核表达载体,转染Ha CAT细胞,采用CCK-8、Cell Death Detection ELISA及Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒比较了这3个NFIB异构体对Ha CAT细胞增殖和凋亡的影响。结果显示,NFIB基因3个转录异构体在绵羊的皮肤、脂肪、肾脏等多种组织和器官中表达,但它们在不同组织和器官中的相对表达量不同。CCK-8细胞增殖分析显示,与对照相比,NFIB-1具有促进Ha CAT细胞增殖的作用(P<0.01),NFIB-2的作用不明显,而NFIB-3显著抑制Ha CAT细胞的增殖(P<0.01)。Cell Death Detection ELISA及Annexin V-FITC凋亡检测发现,这3个蛋白质异构体在一定程度上均促进Ha CAT细胞的凋亡,其中,NFIB-1和NFIB-3促细胞凋亡的作用强于NFIB-2(P<0.01),但NFIB-1和NFIB-3促细胞凋亡作用的差异不显著。这些结果表明,羊NFIB的3个蛋白质异构体在细胞增殖和凋亡中发挥不同作用。; 张潇飞宋鹤荣恩光杨华闫晓红李玉茂李辉王宁; 关键词：细胞增殖细胞凋亡

鸡miR-17-92基因簇靶基因ZFPM2的鉴定及功能分析被引量：5: 2017年; miR-17-92基因簇在哺乳动物的许多生理和病理过程中发挥重要作用。本实验室前期研究发现,miR-17-92基因簇促进鸡前脂肪细胞的增殖,但其作用机制尚不清楚。为了揭示miR-17-92基因簇促进鸡前脂肪细胞增殖的作用机制,本研究采用CCK-8细胞增殖检测方法分析干扰ZFPM2对前脂肪细胞的影响,结果发现,干扰ZFPM2能显著促进鸡前脂肪细胞的增殖(P<0.01);与CCK-8分析结果相一致,干扰ZFPM2可致使细胞增殖标志基因PCNA、Ki67、Cyclin D1的mRNA表达量明显升高(P<0.01或P<0.05)。进一步对鸡ZFPM2基因进行生物信息学分析,发现该基因mRNA的3′UTR有两个区域存在miR-17-92基因簇4个成员(miR-17-5p、miR-20a、miR-19a及miR-19b)的潜在结合位点。为验证miR-17-92基因簇是否靶作用于鸡ZFPM2基因,构建了鸡ZFPM2基因3′UTR区的荧光素酶报告基因载体(野生型)(psi-CHECK2-ZFPM2-3′UTR-WT)及其突变型的荧光素酶报告基因载体(psi-CHECK2-ZFPM2-3′UTR-MUT)。报告基因活性分析显示,过表达mi-17-92基因簇能极显著地抑制野生型ZFPM2的报告基因活性(P<0.01);转染miR-17-5p、miR-20a及miR-19a的抑制剂均能显著地提高野生型ZFPM2报告基因的活性(P<0.01或P<0.05),但这些抑制剂对突变型ZFPM2报告基因的活性无明显影响。q RT-PCR分析发现,miR-17-5p、miR-19a及miR-20a的抑制剂能显著提高内源性ZFPM2基因mRNA的表达水平(P<0.01或P<0.05)。共转染分析发现,尽管差异不显著,但miR-17-5p和miR-19a的抑制剂均倾向于降低ZFPM2干扰片段的促细胞增殖作用。本研究结果表明:miR-17-92基因簇成员miR-17-5p、miR-20a、miR-19a及miR-19b靶作用于ZFPM2;miR-17-92基因簇至少部分通过抑制ZFPM2基因表达从而促进鸡前脂肪细胞的增殖。; 张潇飞宋鹤刘静张文建闫晓红李辉王宁; 关键词：细胞增殖

DNA甲基化酶抑制剂对鸡脂肪发育相关基因表达的影响被引量：3: 2017年; 为了研究DNA甲基化在调控脂肪生长发育中的作用,试验采用甲基化酶抑制剂(5-azadc)处理鸡原代前脂肪细胞,采用Real-time RT-PCR方法分析鸡脂肪生长发育相关基因(PPAR长、C/EBPB、HOPX、KLF7、A-FABP)的表达变化。结果表明:甲基化酶抑制剂处理均不同程度地提高了PPAR抑、C/EBPB、HOPX、KLF7、A-FABP基因的表达。农业部鸡遗传育种重点实验室前期研究结果也发现,高、低脂肉鸡腹部脂肪组织的DNA甲基化水平存在差异,提示DNA甲基化参与鸡脂肪组织生长发育的调控。; 宋鹤张天目张潇飞王桂华李辉王宁; 关键词：DNA甲基化基因表达

miR-17-92基因簇靶基因MAP3K2的鉴定: miRNA基因在染色体上的分布并不是随机的,许多miRNA基因常紧密相邻,形成miRNA基因簇(miRNA cluster)。同一个miRNA基因簇的成员在功能上是相关的,它们往往作用于相同的靶基因或信号通路。miR-1...; 张潇飞宋鹤张文建闫晓红李辉王宁; 文献传递

鸡miR-17-92cluster靶向调控ELK3基因的鉴定: 实验室前期结果显示,miR-17-92cluster在鸡成纤维细胞系(DF1)细胞、前脂肪细胞增殖过程中起到重要的调控作用.ETS-domain蛋白质(ELK3)是转录因子ETS家族的一个成员,可以通过与血清反应元素和血...; 张潇飞宋鹤乔书培刘静闫晓红李辉王宁; 关键词：靶向调控; 文献传递

鸡miR-19a、miR-19b通过靶向抑制LIN9促进前脂肪细胞增殖被引量：4: 2016年; miR-17-92基因簇编码包括miR-19a、miR-19b在内的至少6个miRNA,在鸡细胞的增殖、分化、凋亡及发育等多种生物学过程中发挥重要作用,但其作用机制尚不清楚。生物信息学分析显示,细胞周期调控子LIN9是miR-17-92基因簇成员miR-19a和miR-19b的潜在靶点。为验证这一预测,构建含野生型LIN9 3'-UTR荧光素酶报告基因载体(psi-CHECK2-LIN9-3'-UTR-WT)及突变型报告基因载体(psi-CHECK2-LIN9-3'-UTR-MUT),开展靶标LIN9的鉴定。复合转染结合报告基因酶活性测定结果表明,过表达miR-19a和miR-19b能显著抑制含野生型LIN9 3'-UTR的报告基因表达,而过表达miR-19a和miR-19b抑制剂显著提高野生型LIN9 3'-UTR报告基因的表达。实时定量PCR(RT-q PCR)证明,miR-19a和miR-19b抑制剂对内源性LIN9 mRNA的表达没有影响,提示miR-19a和miR-19b可能不是通过降解mRNA调控LIN9表达。转染结合CCK-8细胞增殖分析显示,在鸡前脂肪细胞过表达LIN9明显抑制细胞增殖。与此相一致的是,细胞增殖标志分子Cyclin D1、c-Myc、PCNA、Ki67的mRNA表达量明显降低。本研究证实,LIN9是miR-17-92基因簇成员miR-19a和miR-19b的靶标,同时证实,LIN9抑制鸡前脂肪细胞的增殖。是否miR-17-92基因簇编码的其它mi-RNA成员也以LIN9为靶标尚不得而知,我室正在研究中。; 宋鹤张潇飞褚衍凯邢天宇闫晓红李辉王宁; 关键词：细胞增殖

鸡IGFBP2基因3′UTR区1196C>A单核苷酸多态性的功能性鉴定及分析被引量：6: 2014年; 鸡IGFBP2基因3′非编码区(3′UTR)1196C>A单核苷酸多态性(SNP)与鸡的腹脂重和腹脂率显著相关.生物信息学分析显示,该SNP恰好位于gga-mi R-456-3p的一个潜在靶基因结合位点处,提示IGFBP2基因可能是gga-mi R-456-3p的一个靶基因,且该SNP位点可能影响gga-mi R-456-3p对IGFBP2基因表达的调控作用.为鉴定SNP 1196C>A是否为功能性SNP,本研究分别构建了包含该SNP位点C或A等位基因的双荧光素酶报告基因载体,比较分析这两个等位基因在鸡胚成纤维细胞系(DF1)和鸡前脂肪细胞中对报告基因活性和表达的影响;利用mi RNA mimics和inhibitor分析gga-mi R-456-3p对不同等位基因报告基因活性以及内源性IGFBP2表达的影响.结果发现,在DF1细胞和鸡前脂肪细胞中,A等位基因的报告基因活性和表达均显著高于C等位基因(P<0.05);gga-mi R-456-3p仅影响C等位基因的报告基因活性和表达,而对A等位基因的报告基因活性没有明显影响;gga-mi R-456-3p调控细胞内源性IGFBP2基因的m RNA和蛋白质表达.本研究证实IGFBP2基因是gga-mi R-456-3p的靶基因,其3′UTR区SNP 1196C>A是一个功能性SNP,它影响gga-mi R-456-3p对鸡IGFBP2基因的表达调控作用.本研究结果对于鸡的分子辅助选择育种及IGFBP2基因在脂肪沉积中调控机制的阐明具有重要意义.; 于莹莹乔书培孙婴宁宋鹤张潇飞闫晓红李辉王宁; 关键词：单核苷酸多态性

鸡miR-20a靶基因TP53INP1鉴定被引量：3: 2015年; 前期研究发现,过表达mi R-17-92基因簇能促进鸡前脂肪细胞增殖,但作用机制尚不清楚。生物信息学分析发现,TP53INP1是mi R-17-92基因簇成员mi R-17-5p和mi R-20a的潜在靶基因,研究采用荧光素酶报告基因技术和基因过表达技术开展该靶基因的验证。结果表明,过表达mi R-17-92基因簇能显著抑制TP53INP1的3'UTR报告基因活性;而转染mi R-20a抑制剂能显著提高TP53INP1的3'UTR报告基因活性。将mi RNA抑制剂分别转染到DF1细胞和鸡前脂肪细胞中,采用real-time RT-PCR方法检测细胞TP53INP1基因表达变化。结果显示,mi R-20a抑制剂能促进TP53INP1表达,TP53INP1是mi R-20a的一个靶基因。; 王宁段逵宋鹤张潇飞张天目张文建闫晓红王守志李辉; 关键词：前脂肪细胞基因表达

鸡miR-17-5p和miR-20a靶向调控LRIG1基因的鉴定: microRNA(miRNA)可调控细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程,其具体生物学功能取决于细胞类型和发育阶段等.实验前期研究证明miR17-92cluster参与鸡前脂肪细胞脂肪增殖.为了分析miR-17-92clus...; 宋鹤张潇飞乔书培刘静王守志李辉王宁; 关键词：荧光素酶活性检测; 文献传递

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