李根
- 作品数：15 被引量：46H指数：4
- 供职机构：兰州军区兰州总医院更多>>
- 发文基金：甘肃省科技重大专项计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 京尼平交联仿骨结构诱导性骨组织工程支架材料的制备与表征
- 2015年
- 背景:目前,尽管利用各种材料制备的组织工程化骨研究取得了一定进展,但均表现出诸如支架材料降解速度与新生骨组织形成速率不匹配、组织生长缓慢、降解代谢产物有毒性等缺陷。目的:构建一种新型的仿骨结构诱导性骨组织工程支架材料,评价其物理化学及生物学性能。方法:以壳聚糖包被淫羊藿苷制备微球,检测其体外缓释效果;将载药微球与胶原蛋白复合构建支架材料的管芯;将羟基磷灰石、聚己内酯与胶原蛋白依次以0∶3∶3、1∶3∶3、2∶3∶3、3∶3∶3的比例混合于六氟异丙醇中,通过静电纺丝技术依次电纺制得具有4层结构的支架材料外管;以1%京尼平将经嵌套的管芯与外管交联在一起。利用万能材料试验机、表面接触角仪、红外光谱、扫描电镜、吸水率、透气性、孔隙率、体外降解实验等对交联前后外管材料的结构和特征进行表征,并评价骨髓间充质干细胞与外管材料的生物相容性;Wistar大鼠皮下埋置实验进一步评价交联前后外管材料的组织相容性。结果与结论:药物在管芯中具有良好的缓释效果;制备的骨组织工程支架材料具有良好的均一性,交联后外管材料的力学性能、吸水率、透气性均高于未交联组(P<0.05),且体外降解速率显著低于未交联组(P<0.05)。苏木精-伊红染色显示骨髓间充质干细胞可良好贴附于交联前后的外管材料上;交联的外管材料植入Wistar大鼠皮下后均无炎症反应。表明交联后诱导性骨组织工程支架材料具有良好的生物相容性及力学性能。
- 李根李文杰唐俊杰王九娜赵玲秦文赵兴绪赵红斌
- 关键词：硬羟基磷灰石生物材料
- 载柚皮苷复合支架对兔骨软骨缺损修复的实验研究被引量：4
- 2017年
- 目的探讨载柚皮苷复合支架的性能及其对兔骨软骨缺损修复的效果。方法利用W/O/W方法制备载柚皮苷和无载柚皮苷缓释微球;以凹凸棒石和Ⅰ型胶原蛋白为材料,通过"3层夹心法"分别构建载柚皮苷、无载柚皮苷和载TGF-β_1复合支架。分别利用体外缓释、扫描电镜和细胞计数试剂盒8法评价载柚皮苷微球的缓释效果、支架的形貌和细胞相容性。取40只日本大耳白兔随机分为A、B、C、D4组,每组10只。于兔双侧股骨髁间窝处制备直径4.5 mm、深4 mm的骨软骨缺损模型,A组为缺损组(空白对照),B、C、D组分别于骨软骨缺损处植入无载柚皮苷复合支架(阴性对照组)、载柚皮苷复合支架(实验组)及载TGF-β_1复合支架(阳性对照组)。分别于术后3、6个月时取材,行大体、HE染色、甲苯胺蓝染色,分别观察骨软骨缺损修复效果;Western blot检测新生软骨Ⅱ型胶原蛋白表达水平。结果载柚皮苷微球具有良好的缓释效果;构建的骨软骨复合支架有较好的孔隙;载柚皮苷软骨层支架细胞的增殖率与无载柚皮苷支架比较明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。兔体内植入实验大体观察示,术后3个月C、D组缺损范围与A、B组相比明显缩小;术后6个月C组缺损处被新生软骨所覆盖,D组新生软骨与周围正常软骨整合良好。组织学染色示,术后3个月A、B组缺损处被少量纤维组织填充,C、D组可见少量软骨生成;术后6个月C、D组新生骨软骨组织与正常骨软骨类似,A、B组缺损处以大量纤维组织为主。Western blot检测示,术后3、6个月C、D组缺损处新生组织中Ⅱ型胶原蛋白表达量均显著高于A、B组,差异有统计学意义(P<0.05);C、D组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论载柚皮苷复合支架具有良好的组织相容性,并对兔关节骨软骨缺损有较好的修复效果。
- 黄俊波王世勇张晓敏李根姬菩忠赵红斌
- 关键词：柚皮苷凹凸棒石胶原蛋白缓释微球骨软骨缺损
- 骨组织工程诱导性支架材料修复骨缺损被引量：11
- 2015年
- 背景:前期实验中发现载淫羊藿苷壳聚糖/胶原/聚己内酯/羟基磷灰石复合支架具有良好的物理和化学性质。目的:研究载淫羊藿苷壳聚糖/胶原/聚己内酯/羟基磷灰石复合支架修复兔胫骨平台骨缺损的效果。方法:利用静电纺丝技术制备胶原/聚己内酯/羟基磷灰石复合支架壳层,真空干燥法制备载淫羊藿苷壳聚糖微球/胶原支架芯层,将芯层嵌入壳层后利用京尼平交联构建载药复合支架。将载淫羊藿苷壳聚糖微球置入PBS中,观察药物缓释效果。将载药复合支架与大鼠骨髓间充质干细胞共培养7 d,观察细胞黏附效果。取青紫蓝兔15只,复制兔左侧胫骨缺损模型,随机分为3组,实验组于骨缺损处植入载药复合支架,对照组植入胶原/聚己内酯/羟基磷灰石复合支架,空白对照组不植入任何材料。术后4,12,24周行X射线观察、样本大体和组织学观察。结果与结论:载药复合支架具有疏松多孔结构,利于骨髓间充质干细胞的黏附、增殖;壳聚糖微球体外缓释在72 h内保持19%释放量的良好缓释效果。术后24周,实验组材料完全被新生骨组织覆盖,硬度与正常骨相近,苏木精-伊红染色观察发现有骨小梁、骨细胞和成骨细胞,但缺损区骨密度低于正常骨组织;对照组材料被纤维组织包裹,苏木精-伊红染色显示有骨小梁、骨髓细胞和纤维组织;空白对照组呈凹陷愈合,但硬度低于正常骨组织,苏木精-伊红染色可见大量骨髓细胞和骨小梁。结果表明载药壳聚糖/胶原/聚己内酯/羟基磷灰石复合支架能有效修复兔骨缺损。
- 唐俊杰李文杰李根王九娜赵玲秦文赵红斌
- 关键词：生物材料聚己内酯骨缺损
- 红景天苷/胶原蛋白/聚己内酯神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究被引量：7
- 2016年
- 目的构建红景天苷/胶原蛋白/聚己内酯(polycaprolactone,PCL)复合神经导管支架材料并桥接修复大鼠坐骨神经缺损,探讨其修复神经缺损效果。方法利用W/O/W方法制备红景天苷微球,检测其缓释率;然后取10、20、40μg红景天苷微球分别与1 m L胶原蛋白混合,冷冻法制备神经导管芯层;静电纺丝技术构建胶原蛋白/PCL神经导管壳层;将芯层和壳层利用京尼平交联制备红景天苷微球/胶原蛋白/PCL复合神经导管。扫描电镜观察交联前后神经导管结构。将38只Wistar大鼠随机分为5组,其中A、B、C、D组各9只,E组2只。各组大鼠制备15 mm长坐骨神经缺损模型后,分别采用胶原蛋白/PCL复合导管(A组),10、20、40μg/m L红景天苷/胶原蛋白/PCL复合神经导管(B、C、D组)以及自体神经(E组)桥接修复。观察各组大鼠存活情况;术后1、3、6个月行坐骨神经运动功能指数(sciatic functional index,SFI)评价;6个月后行大体观察、神经电生理检测,并取材行组织学、免疫组织化学染色[S-100和外周髓鞘蛋白0(peripheral myelin protein 0,P0)]观测。结果红景天苷微球于3 d出现突释,13 d后缓释趋于平稳,累计缓释率达76.59%,可持续缓释至16 d。扫描电镜观察示,神经导管壳层交联后,无序排列的纤维变得相互粘连、皱缩、致密且有空隙;芯层交联前后孔道均清晰可见。各组大鼠术后无感染及死亡。术后1、3、6个月,E组SFI显著高于A^D组(P<0.05);术后1个月,B、C、D组高于A组(P<0.05),B、C、D组间差异无统计学意义(P>0.05);3个月,A^D组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);6个月,C组高于A、B、D组(P<0.05),A、B组高于D组(P<0.05),A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。除C、E组术后1、3、6个月SFI比较差异有统计学意义(P<0.05)外,其余各组组内各时间点间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后6个月,大体观察示B、C组导管支架两端连接良好、神经较粗,A、D组近端连�
- 宋学文魏彦明李根秦文王维张晓敏赵红斌
- 关键词：红景天苷胶原蛋白聚己内酯坐骨神经神经缺损
- 红景天苷诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中的Ca^(2+)/CaM信号通路被引量：4
- 2014年
- 背景:课题组前期研究表明,红景天苷能诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞定向分化,Ca2+信号是实现其生物学信号传导的重要途径之一目的:探讨Ca2+/CaM信号通路在红景天苷诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化中的作用及机制。方法:实验分为空白对照组和红景天苷诱导组,红景天苷诱导组将不同质量浓度红景天苷(5,10,20,50,100 mg/L)作用骨髓间充质干细胞24 h和100 mg/L红景天苷作用骨髓间充质干细胞12,24,48,72 h。采用Western blot方法分别检测红景天苷诱导骨髓间充质干细胞后神经标志分子MAP2和Ca2+/CaM信号通路中关键蛋白CaM、CaMKⅡ的表达水平。另外实验设阻断剂组,分别加Ca2+信号通路特异性阻断剂:500μmol/L EGTA(细胞外Ca2+螯合剂)、1 mmol/L Nifedipine(L型Ca2+通道阻断剂)、10 mmol/L LY294002(PI3K抑制剂)分别作用细胞30 min后,再加入100 mg/L红景天苷作用细胞24 h,采用Western blot方法检测阻断Ca2+/CaM信号通路后NSE、CaM的表达情况。结果与结论:1红景天苷诱导后,MAP2的表达上调(P<0.01),说明红景天苷可诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞。2不同质量浓度红景天苷诱导骨髓间充质干细胞24 h后,10 mg/L红景天苷组CaM、CaMKⅡ的表达与其他诱导组比较显著上调(P<0.01);同一质量浓度红景天苷诱导72 h后CaM、CaMKⅡ表达明显下调(P<0.01)。3阻断细胞外Ca2+和PI3K信号通路后,NSE与CaM的表达水平较红景天苷诱导组上调(P<0.05)。结果表明,红景天苷通过抑制Ca2+/CaM信号通路实现骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化。
- 赵玲赵红斌潘茜李根王九娜唐俊杰
- 关键词：干细胞骨髓干细胞红景天苷骨髓间充质干细胞
- 用复合诱导型骨修复材料修复兔桡骨缺损的实验研究被引量：1
- 2016年
- 以不同的载药方式构建4种壳聚糖/聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯（PHBV）复合诱导型骨修复材料,检测并比较4种支架材料对兔桡骨缺损的修复效果,筛选出最佳骨修复材料并确定最佳药物控释方式。以淫羊藿苷为诱导因子,采用两相混合冷冻干燥技术以微球载药、改性药物微球（W/O法制得并表征）、改性药物与材料共价结合等药物添加方式及不加药制得4种支架材料,并对其进行显微结构以及载药支架药物缓释表征,后将4种材料分别植入兔桡骨缺损处,于1、3、6个月进行X射线及三维CT观察支架材料对兔桡骨缺损的修复情况,HE,Masson染色观察其诱导成骨效果。结果表明,支架材料呈网络状串珠状的显微结构,载药微球粒径分布在3-11μm,载药支架材料有着良好的药物缓释,其中共价结合组药物释放峰值时间较其他组推迟,为72 h,且峰值后药物缓释量迅速平稳为75μg左右。X射线及三维CT观察显示,最终共价结合组支架材料骨缺损处连通,且骨密度高于其他3组。HE、Masson染色结果显示,共价结合组成骨效果优于其他组。共价结合的药物添加方式能使支架具有良好的药物缓释效果,进而对兔桡骨缺损表现出良好的修复效果。
- 李根甄平成满平赵红斌
- 关键词：共价结合骨修复
- 地塞米松复合聚己内酯胶原支架材料的构建及性能评价被引量：3
- 2016年
- 背景:组织工程支架材料已被广泛用于各种组织和神经修复,但是都有其局限性,效果不理想。目的:构建一种能促进脊髓损伤修复的组织工程支架材料,以期用于脊髓损伤的再生和修复。方法:乳化-溶剂挥发法制备地塞米松微球,以包封率、载药量以及收率的综合评分为指标,通过正交试验考察投药量、聚乳酸-羟基乙酸共聚物用量和聚乙烯醇质量分数对地塞米松缓释微球处方工艺的影响,扫描电镜观察微球表征。采用静电纺丝技术,以胶原蛋白和聚己内酯为原料制备复合地塞米松微球的纤维纳米支架,小鼠骨髓间充质干细胞与支架共培养3 d,扫描电镜观察细胞形态。复合材料植入大鼠脊髓缺损。结果与结论:地塞米松缓释微球最佳制备工艺为投药量10 mg,乳酸-羟基乙酸共聚物用量80%,聚乙烯醇质量分数0.5%。微球外观圆整,表面光滑;微球的载药量、包封率和收率分别为(2.26±0.03)%,(83.62±0.21)%和(90.87±2.45)%。小鼠骨髓间充质干细胞在复合地塞米松微球的材料生长状况良好。动物实验结果显示,材料与宿主无免疫反应,且随着时间的延长材料逐步降解。说明复合地塞米松微球支架材料生物相容性良好,是一种良好的生物支架材料。
- 王维齐社宁赵红斌李振珺李根张晓敏宋学文
- 关键词：地塞米松微球体生物相容性材料细胞外基质材料聚己内酯乳酸-羟基乙酸共聚物生物相容性
- 凹凸棒石/羟基磷灰石/聚己内酯/胶原构建的骨修复材料被引量：4
- 2017年
- 背景:骨移植是修复骨缺损的惟一方法,但传统的骨移植方法均存在一定的弊端。骨组织工程可达到修复或重建骨的目的,为骨缺损患者的治疗带来新的选择。目的:构建一种新型有效提高骨缺损修复的组织工程支架材料。方法:采用化学沉淀辅以微波辐射法制备出不同Ca/P比(1.50/1.67)的羟基磷灰石,采用溶液灌注-溶剂挥发法、离子滤沥法等制备凹凸棒石/羟基磷灰石/聚己内酯/胶原、凹凸棒石/缺钙羟基磷灰石/聚己内酯/胶原、凹凸棒石/聚己内酯/胶原(对照组)复合材料。利用扫描电子显微镜、红外光谱仪、表面接触测定仪、万能力学机等,分别进行材料表征、有效成分、亲水性和力学性能评价,用动物实验评价材料与宿主的组织相容性。结果与结论:1精确控制p H值范围能合成不同Ca/P比的羟基磷灰石;2与凹凸棒石/聚己内酯/胶原复合材料相比,构建的凹凸棒石/羟基磷灰石/聚己内酯/胶原和凹凸棒石/缺钙羟基磷灰石/聚己内酯/胶原复合材料的力学性能、透气性、亲水性明显增强(P<0.05),孔隙率、吸水膨胀率明显降低(P<0.05);3动物实验结果显示,支架材料与宿主无免疫炎性反应,具有良好的组织相容性;4结果提示,构建的凹凸棒石/羟基磷灰石(1.50,1.67)/聚己内酯/胶原复合支架材料有可能成为较为理想的骨组织修复替代支架材料。
- 李振珺齐社宁赵红斌王维李根张晓敏宋学文
- 关键词：生物相容性材料胶原羟基磷灰石类生物材料凹凸棒石聚己内酯
- 红景天苷通过p21和Cyclin对MSCs细胞周期的影响
- 2014年
- 目的：探讨红景天苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞marrow mesenchymal stem cells（MSCs）向神经元细胞定向分化的相关分子机制。方法：以MSCs（D1细胞）为对象,红景天苷作为诱导剂,运用流式细胞术、荧光免疫化学染色和Western blot方法分别检测红景天苷对细胞周期及Cyclin D1和p21蛋白表达的影响。结果：红景天苷诱导细胞24,48 h后,G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例下降,说明红景天苷能显著促进细胞发生G0/G1期阻滞;荧光免疫化学染色表明,对照组和诱导12-24 h后Cyclin D1为阳性表达,阳性细胞数为71%,71%和44%,而48-72 h组表达呈阴性;诱导12-72 h后p21呈阳性表达,阳性细胞数为85%,90%,65%和73%,与对照组相比差异显著（P〈0.01）;Western blot检测表明Cyclin D1表达量随诱导时间的延长下调,p21蛋白表达水平上调。结论：红景天苷通过影响细胞周期相关蛋白Cyclin D1和p21抑制细胞增殖,使MSCs阻滞于G0/G1期,进而促进MSCs定向分化。本试验为阐明红景天苷诱导MSCs定向分化的分子机制奠定了坚实的理论基础。
- 潘茜陈亚男李根唐俊杰王九娜赵玲赵红斌
- 关键词：红景天苷细胞周期MSCS周期蛋白
- 胶原蛋白与黏土混合材料的性能研究被引量：2
- 2014年
- 背景:凹凸棒黏土质轻,吸水性强,湿时具有黏性和可塑性等特性,被广泛应用于各个领域,但将凹凸棒黏土作为骨修复材料鲜有报道。目的:将胶原蛋白与不同比例凹凸棒黏土混合,构建一种新型组织工程支架材料,以期运用于骨修复。方法:将胶原蛋白和凹凸棒黏土以干质量比为1∶0、5∶1、4∶1、3∶1的比例混合均匀,冷冻干燥,制备支架材料,扫描电镜观察材料的表观特征,检测1%京尼平交联前后材料的孔隙率和质量吸水率。将4组比例材料分别与大鼠骨髓间充质干细胞共培养,培养3 d及7 d分别进行扫描电镜观察及苏木精-伊红染色。将1%京尼平交联后的4组比例材料分别植入大鼠体内,1个月后观察材料降解情况。结果与结论:材料呈多孔海绵状,交联前材料的孔隙率在60%-80%之间,交联后材料的孔隙率在40%-65%之间,4组之间交联前后孔隙率比较差异无显著意义(P>0.05)。4组材料交联后的质量吸水率较交联前显著降低(P<0.05)。胶原蛋白-凹凸棒黏土支架材料具有良好的细胞相容性,在动物体内可以完全降解并被吸收,但不同比例配比降解速率不一,无炎症反应。
- 王九娜赵兴绪唐俊杰李根姜拓之赵玲秦文赵红斌
- 关键词：生物材料胶原蛋白凹凸棒黏土生物相容性
