江莉莎
- 作品数：12 被引量：25H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 噬菌体TM4 motif3蛋白制备及其复苏结核休眠菌的作用
- 2016年
- 目的通过原核表达分枝杆菌噬菌体TM4 motif3蛋白和构建结核分枝杆菌标准株H37Rv休眠菌模型,检测motif3蛋白对结核休眠菌的复苏作用。方法利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增噬菌体TM4 motif3基序,将PCR产物连接至表达载体p ET-28a(+),重组质粒测序正确后,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,采用非变性方法对表达蛋白进行纯化,并将不同浓度的motif3蛋白加入结核休眠菌模型中,观察其对结核休眠菌的复苏效果及异烟肼对复苏后结核菌的杀灭作用。结果得到融合组氨酸残基的motif3重组蛋白,在12.65 ku处出现目的条带,浓度为1.1×104pmol·L^(-1)的motif3蛋白对结核休眠菌具有明显的复苏作用且复苏后结核菌能被异烟肼杀灭。结论噬菌体TM4motif3蛋白对结核休眠菌具有复苏作用。
- 张莉江莉莎姚义勇柳岩郭述良
- 关键词：基因表达
- 分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响
- 2014年
- 目的:探讨不同滴度的分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响。方法:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞后,采用倒置显微镜观察细胞生长形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中细胞因子分泌水平,RT-PCR和Western blot分别检测上皮细胞黏蛋白MUC5AC mRNA和蛋白表达水平。结果:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞一段时候后,细胞的生长形态、存活率、凋亡率、细胞因子分泌水平以及黏蛋白MUC5AC表达与正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:分枝杆菌噬菌体Chy3无论高低滴度对体外培养人气道上皮细胞生长和功能均无明显影响,有较好的安全性。
- 熊欣甘易玲徐莉江莉莎张莉郭述良
- 关键词：分枝杆菌噬菌体人气道上皮细胞MUC5AC
- 分支杆菌噬菌体Leo生物学特性及抗结核作用被引量：5
- 2015年
- 目的明确分支杆菌噬菌体Leo的生物学特性及其抗结核作用,为"鸡尾酒疗法"筛选候选噬菌体。方法采用双层平板法制备噬菌体Leo,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;提取噬菌体DNA,限制性内切酶酶切分析确定其核酸类型;以不同MOI扩增噬菌体Leo,确定最佳MOI及最低MOI;通过一步生长曲线,确定潜伏期及裂解量;采用终点滴定反浊法测定耻垢分支杆菌对噬菌体Leo的耐受突变率;检测噬菌体Leo对酒精、温度的耐受性及在不同pH下的裂解能力;通过体外杀结核分枝杆菌实验,明确噬菌体Leo对结核分枝杆菌的杀灭作用。结果 Leo噬菌斑圆形透明,边缘清晰,含对称的多面体头部,直径(70±3.0)nm,可弯曲的尾部,尾长(211±31.7)nm;其基因组能被限制性内切酶HindⅢ、BglⅠ切开;最佳MOI为0.0 0001,最低MOI为0.0 001,潜伏期为150min,裂解量74,耐受突变率为10-7。Leo对温度、酒精敏感,在pH 7.4和pH 5.0时均能裂解宿主菌。Leo作用于结核分支杆菌72h后,Leo组菌量明显低于空白组(P<0.05)。结论分支杆菌噬菌体Leo属长尾噬菌体科,双链DNA噬菌体,能够杀灭结核分支杆菌,可作为"鸡尾酒疗法"的候选噬菌体。
- 江莉莎邬亭亭刘平张莉姚义勇郭述良
- 关键词：生物学特性结核分支杆菌
- 噬菌体Guo1、Leo对不同模型休眠期结核分枝杆菌的裂解作用
- 2019年
- 目的研究噬菌体Guo1、Leo对不同模型休眠期结核分枝杆菌的裂解作用。方法利用ClustalX软件作多重序列对比,寻找噬菌体Guo1、Leo的motif3基序。分别用缺氧模型及缺钾模型建模方法构建休眠期结核分枝杆菌模型。取缺氧及缺钾模型诱导的休眠期结核菌菌液,将其分别随机分成5组,每组设3个复管,每支试管装2 mL菌液。再向各组试管中分别加入100μL的异烟肼(终浓度5μg/mL,异烟肼组)、利福平(终浓度5μg/mL,利福平组)、噬菌体Leo(滴度2.6×108 PFU/mL,Leo组)、噬菌体Guo1(滴度3.26×108 PFU/mL,Guo1组),对照组加入等量ddH 2 O。利用最大可能数法,分别检测休眠期结核菌对异烟肼、利福平的耐药性及噬菌体对休眠期结核菌的裂解作用。结果噬菌体Guo1、Leo的卷尺蛋白中均含有motif3基序,且其motif3基序含6个高度保守的氨基酸残基、1个高度保守的异亮氨酸-色氨酸位点。当作用于缺氧模型休眠期结核菌时,与利福平组、异烟肼组较较,Guo1组菌量明显减少(P<0.05);当作用于缺钾模型休眠期结核菌时,与利福平组比较,Leo组菌量明显减少(P<0.05)。缺钾模型对异烟肼、利福平的耐药率明显高于缺氧模型。结论相较于缺氧模型,缺钾模型能诱导结核菌进入更深的休眠状态。噬菌体Guo1对缺氧模型诱导的休眠期结核菌有裂解作用,噬菌体Leo对缺钾模型诱导的休眠期结核菌有裂解作用。
- 江莉莎郭述良
- 关键词：噬菌体缺氧模型
- 两种结核休眠菌模型比较的初步研究
- 目的 比较缺氧模型及多因素模型两种结核休眠菌建模方法的优劣.方法 利用缺氧因素构建缺氧模型；利用低氧(5％02)、高CO2(10％ CO2)、弱酸(pH=5.0)及营养缺乏(10％ 7H9液体培养基)多种因素构建多因素模...
- 江莉莎郭述良
- 噬菌体Chy5的生物学和基因组学特征被引量：1
- 2020年
- 目的筛选能感染结核分枝杆菌的溶源性噬菌体,了解其生物学及遗传学信息。方法从土壤中分离纯化噬菌体;电镜观察噬菌体形态;单斑法测定宿主谱;提取噬菌体DNA,鸟枪法随机测序。采用DNAStar软件包分析基因组成分,Glimmer3.0、GeneMark软件预测基因功能,同时做共线性分析。分离溶源菌,通过紫外线诱导试验、超免反应验证噬菌体溶源性。结果分离到一株新的噬菌体Chy5,其头部直径(61.5±1.4)nm,尾部长度(114.1±2.1)nm,为长尾噬菌体,可感染敏感及耐药结核菌株。Chy5基因组全长51214 bp,G+C含量63.60%,与噬菌体D29基因组最相似,有88个推定基因,含有编码整合酶和阻遏蛋白的基因以及attP位点。经紫外线诱导Chy5溶源菌可形成噬菌斑,Chy5与其溶源菌共培养会发生超免反应。结论分离到一株新的能感染敏感及耐药结核菌的溶源性噬菌体Chy5,其基因组与噬菌体D29相似,有望应用于构建荧光报告噬菌体。
- 江莉莎刘平邬亭亭郭述良
- 关键词：基因组结核菌
- 分枝杆菌噬菌体Leo的生物学和基因组学特征被引量：2
- 2014年
- 目的筛选能有效裂解结核分枝杆菌的噬菌体,并了解其生物学和遗传学信息。方法双层平板法扩增噬菌体,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;单斑法检测噬菌体宿主谱。采用λ噬菌体提取试剂盒提取噬菌体DNA,鸟枪法测序,得到的DNA序列用Phred/PhraD/Consedh软件包组装,拼接重叠群,PCR扩增重叠群缺口。采用DNAStar软件包、Glimmer3.0基因预测软件、Promoter prediction/Prokaryotic程序进行基因成分分析,基因功能预测,启动子区预测,并同时对Leo作共线性分析及构建系统进化树。结果噬菌体Leo由多面体头部和尾部构成,头部直径(70.0±3.0)nm,尾长(211.0±31.7)nm。其噬菌斑清晰透明,能裂解不同的结核分枝杆菌临床分离株。Leo基因组全长39 981bp,GC含量66.86%,含3个可能的启动子区,不含串联重复序列和tRNA区。Leo含59个基因,gene32编码整合酶,不含编码阻遏蛋白的基因和不利基因,Leo与BPs和Angel相似性最高。结论噬菌体Leo是一株不含不利基因的裂解性噬菌体,能裂解结核分枝杆菌,可以作为鸡尾酒疗法的候选噬菌体。
- 江莉莎邬亭亭刘平郭述良
- 关键词：基因组结核分枝杆菌
- 缺氧模型和多因素模型构建结核休眠菌模型比较研究被引量：5
- 2016年
- 目的比较缺氧模型及多因素模型两种结核休眠菌建模方法的优劣。方法利用缺氧因素构建缺氧模型;利用低氧(5%O2)、高CO2(10%CO2)、弱酸(pH 5.0)及营养缺乏(10%7H9液体培养基)多种因素构建多因素模型。分别在第20d、30d时取样,用金胺O-尼罗红染色法染色,在共聚焦显微镜下观察结核菌脂质聚集及失去抗酸性的情况;用电镜观察结核菌细胞壁增厚情况;并检测其对利福平的耐药率。在建模30d时,将等量的两种模型分别转入新鲜7H9液体培养基中,观察并比较其复苏情况。结果建模20d时,两模型组细菌均出现脂质聚集及失去抗酸性,无明显差异。两模型组细菌均未出现明显细胞壁增厚。建模30d时,多因素模型组细菌几乎都表现出脂质聚集及失去抗酸性,而缺氧模型组仍有部分细菌未表现出脂质聚集及失去抗酸性。同时,多因素模型组在建模30d还出现了细胞壁增厚的细菌,缺氧模型组则无明显改变。多因素模型组细菌对利福平的耐药率明显高于缺氧模型组,且多因素模型组细菌复苏的菌量远小于缺氧模型组。结论多因素模型较缺氧模型能更快诱导结核菌进入休眠状态,且诱导出的结核休眠菌状态更稳定。
- 江莉莎姚义勇张莉柳岩郭述良
- 关键词：缺氧模型
- 以呼吸困难为主诉的非器质性呼吸困难与支气管哮喘临床特点对比研究被引量：10
- 2017年
- 目的·调查并对比分析以呼吸困难为主诉的非器质性呼吸困难和支气管哮喘的临床特征。方法·连续入选呼吸科门诊因呼吸困难就诊的性别与年龄相匹配、身高与体质量相接近的非器质性呼吸困难和支气管哮喘患者各74例作为调查对象,对2组患者行医院焦虑抑郁量表、Nijmegen症状学问卷和阿森斯失眠量表问卷调查,收集2组患者的症状描述语、临床症状、有效睡眠时间和肺功能指标并作对比分析。结果·非器质性呼吸困难组倾向于精神心理方面的描述,支气管哮喘组侧重于气流受限的描述。非器质性呼吸困难组多以心因性症状为主要表现,且睡眠时间少于支气管哮喘组(P<0.05);焦虑评分、抑郁评分、Nijmegen评分、阿森斯失眠问卷评分、第1秒用力呼气容积、第1秒用力呼气容积占预计值的百分比、用力肺活量占预计值的百分比、一秒率均大于支气管哮喘组,差异均有统计学意义(P<0.05);用力肺活量2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论·非器质性呼吸困难组的焦虑、抑郁、失眠比支气管哮喘组更加明显,支气管哮喘组肺功能大多存在异常。鉴别两者时,临床医师需重视情绪、睡眠、躯体化症状等相关病史的询问,行肺功能检查,认识两者的临床特点,降低漏诊率及误诊率。
- 姚韬敖敏彭印印江莉莎郭述良
- 关键词：支气管哮喘焦虑抑郁失眠
- 噬菌体TM4、Guo1和D29对静止期结核菌裂解作用初步研究被引量：5
- 2016年
- 目的研究噬菌体TM4、Guo1、D29能否裂解静止期结核菌。方法采用密闭培养至对数生长期的结核分枝杆菌构建静止期结核菌模型;采用药敏检测、金胺o-尼罗红荧光染色和电镜观察作为检测模型方法;采用most probable number(MPN)法计数作为裂解作用的检测指标。结果密闭培养11个月的静止期结核菌模型构建成功;经不同处理后,MPN计数结果为对照组1100,Guo1组23,TM4组23,D29组600,RFP组673,INH组887;与对照组相比,Guo1组和TM4组菌量明显减少(P<0.01,P<0.01),D29组菌量减少不明显(P=0.05);与RFP组相比,Guo1组和TM4组菌量亦明显减少(P<0.05,P<0.05),D29组菌量减少不明显(P>0.05);Guo1组和TM4组菌量无差异。结论噬菌体TM4和Guo1能够裂解静止期结核菌,噬菌体D29不能裂解静止期结核菌,噬菌体TM4和Guo1裂解能力无差别。
- 柳岩江莉莎姚义勇曹俊郭述良
- 关键词：噬菌体裂解结核病
