王秀珍
- 作品数：6 被引量：37H指数：5
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家科技重大专项更多>>
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- dGFP-GUS基因标记新疆棉花黄萎病原菌的研究被引量：2
- 2016年
- 【目的】研究棉花黄萎病原菌的入侵机理。【方法】以带有潮霉素抗性筛选基因的PUCCATPH载体以及pCAMBIA1304载体作为骨架,构建trpc启动子驱动的GFP-GUS基因的新疆棉花黄萎病菌表达载体1304-P-ORF,导入农杆菌GV3101和AGL-1中。通过农杆菌介导(ATMT)法分别转入新疆棉花黄萎病原菌VD-1和VD-278中,对表达效果进行检测。【结果】筛选的潮霉素B浓度为30μg/m L,农杆菌AGL-1对黄萎病菌的转化效率比GV3101高40%。T0代经含有潮霉素B的PDA培养基筛选,获得了T1代转基因大丽轮枝菌VD-12株,VD-2 784株。通过GUS组织染色,在转基因VD-1和VD-278的菌丝和孢子中均可观察到GUS基因的表达。对转基因黄萎菌进行PCR分子检测,均可检测到GFP和潮霉素B基因。GUS-GFP和潮霉素B基因已成功转入新疆棉花黄萎菌VD-1和VD-278中。【结论】建立了新疆棉花黄萎菌的遗传转化体系,为进一步利用GFP-GUS基因研究新疆棉花黄萎菌对棉花侵染的过程奠定基础。
- 孔德真华东来王秀珍刘步仓祝建波王爱英
- 关键词：农杆菌介导转化棉花黄萎病菌
- 农杆菌介导的橡胶草遗传转化体系的建立被引量：7
- 2014年
- 以橡胶草为试验材料,利用农杆菌介导法进行遗传转化研究。结果表明:50mg/L的卡那霉素(Kan)对橡胶草的抗性芽具有很好地筛选效果,生根筛选时,Kan的适宜质量浓度为35mg/L;最佳抑菌抗生素为羧苄青霉素(cb),适宜质量浓度为500mg/L,获得35株抗性试管苗,通过GUS染色及分子生物学检测,最终获得6株转基因植株,转化率为17.1%。可见,获得的橡胶草转基因植株,为橡胶草后续的遗传转化研究奠定了基础。
- 袁彬青王秀珍罗成华闫洁祝建波
- 关键词：橡胶草农杆菌
- 不同浓度烯效唑与胺鲜脂复配剂浸种对玉米幼苗抗旱性的影响被引量：10
- 2015年
- 用不同质量浓度烯效唑、胺鲜脂配比的复配剂对玉米种子‘郑单958’进行12h及24h的浸种处理,测定玉米的发芽情况、幼苗形态指标以及干旱胁迫下玉米幼苗叶片的相对含水量、相对电导率、丙二醛浓度、过氧化氢酶活性、叶绿素质量分数。结果表明,当40mg/L烯效唑、50g/L胺鲜脂配比下浸种24h时,显著抑制玉米种子的芽长,但对玉米种子的发芽率影响不大,促进幼苗壮苗的形成;对干旱的抗性响应因浸种时间不同而异,在浸种12h时,不同质量浓度烯效唑、胺鲜脂配比的混合剂中烯效唑质量浓度高效果优于质量浓度低的处理,而在浸种24h时,烯效唑质量浓度低效果反而优于质量浓度高的处理。通过形态及生理指标的测定,已明确40mg/L烯效唑、50g/L胺鲜脂的配比质量浓度进行浸种处理24h对玉米有较好的壮苗效果及提高植物抗逆性的作用。
- 赵丽娟王秀珍焦天奇祝建波郭斌闫洁
- 关键词：烯效唑玉米壮苗
- 橡胶草法尼基焦磷酸合酶基因的克隆与功能分析被引量：10
- 2016年
- 【目的】法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)是天然橡胶生物合成的甲羟戊酸途径中的关键酶,获得橡胶草FPS基因并转化野生橡胶草,为研究FPS基因在橡胶草橡胶生物合成过程中的调控作用奠定基础。【方法】采用同源克隆的方法获得橡胶草FPS基因全长c DNA序列,并对该基因进行生物信息学分析。对橡胶草和其他18种不同高等植物的FPS氨基酸序列进行多序列比对及进化树分析。提取橡胶草不同组织:根、叶柄、叶、花梗、花和种子RNA,对FPS基因进行组织特异性表达分析,并对不同生长时期的橡胶草FPS表达量进行比较,分析橡胶草生长过程中FPS的调节作用。将该基因在野生型橡胶草中过表达,对得到的转基因和野生型植株FPS相对表达水平进行分析,比较转基因和野生型植株橡胶含量的变化。碱煮法提取转基因和野生型橡胶草根部的橡胶,测定橡胶含量。【结果】获得橡胶草FPS基因全长c DNA序列,命名为TKFPS(Gen Bank登录号KJ558350.1)。序列分析表明该基因包含1个1 029 bp的完整开放阅读框,编码342个氨基酸,编码的蛋白质相对分子量为39.35 k D,理论等电点(p I)为5.41,平均疏水性为-0.242。多序列比对结果表明,橡胶草FPS氨基酸序列含有高等植物FPS基因的5个保守结构域,系统发育分析结果显示新疆野生橡胶草与蒲公英处于同一分支,其亲缘关系最近。TMHMM和Target P亚细胞定位分析得知,TKFPS蛋白无跨膜区域,可能定位于细胞质中发挥功能。组织特异性分析结果表明TKFPS在橡胶草的根、叶柄、叶、花梗、花、种子中均有表达,其中,在叶中表达量最高,根次之,在花中表达量最低。重组子p CAMBIA2300-35S-TKFPS经农杆菌介导法转化野生橡胶草叶盘,得到6株转基因植株。实时荧光定量PCR检测发现,与野生型相比,转基因株系FPS的相对表达量水平明显升高,6株转基因株系TKFPS表达量平均�
- 曹新文王秀珍李永梅赵李婧马海霞闫洁
- 关键词：橡胶草生物信息学REAL-TIMEPCR
- 橡胶延伸因子REF基因的克隆、转化及功能分析被引量：7
- 2015年
- 取巴西橡胶树新鲜橡胶胶乳,利用改良CTAB法提取胶乳总RNA,反转录合成cDNA。根据GenBank中REF基因序列的报道,设计特异性引物,Taq酶扩增,获得REF基因并构建DHN pBin 438-REF植物表达载体。利用叶盘转化法侵染橡胶草无菌幼嫩叶片,通过RT-PCR方法鉴定阳性植株,对其可溶性糖、胶乳和蛋白质含量等进行检测。结果表明,转基因橡胶草可溶性糖质量浓度为0.053 8g/L,约是野生型橡胶草的2倍;橡胶是野生型植株橡胶的1～3倍;而转基因橡胶草中REF基因在蛋白质水平高效表达,其中根和花梗中REF基因高效表达。本研究通过农杆菌介导的遗传转化,获得5株阳性转基因橡胶草植株,分子生物学结果表明,REF基因可在橡胶草中稳定表达,并显著地提高橡胶草中合成天然橡胶的生物量。
- 赵丽娟袁彬青王秀珍罗成华闫洁祝建波
- 关键词：橡胶草克隆橡胶
- 橡胶草顺式异戊烯基转移酶基因的克隆与原核表达被引量：6
- 2015年
- 克隆新疆野生橡胶草顺式异戊烯转移酶基因,对其进行生物信息学分析,构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为进一步研究该基因的功能和植物体内天然橡胶合成分子机制奠定基础。采用同源克隆法结合RT-PCR技术获得目的基因,测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21并诱导表达。结果表明:该基因开放阅读框为927bp,编码308个氨基酸,推测的蛋白分子质量为34.9ku,理论等电点为8.74;具有cis-异戊烯基转移酶的5个高度保守区,属于cis-IPPS superfamily蛋白家族;系统进化树表明,橡胶草顺式异戊烯基转移酶与短角蒲公英的亲缘关系最近;经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白相符合。可见,利用RT-PCR技术从橡胶草叶片中克隆得到顺式异戊烯转移酶基因,成功构建原核表达载体,并使其在大肠杆菌中得到表达。
- 王秀珍赵丽娟赵李婧李永梅袁彬青闫洁祝建波
- 关键词：橡胶草原核表达
