杨桦
- 作品数：24 被引量：75H指数：6
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金解放军总医院医药卫生科研基金上海-联合利华研究与发展基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- EMS对D6-2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的诱变率和诱变谱被引量：2
- 1998年
- 对D6 2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的自发突变率以及甲基磺酸乙酯 (ethylmethanesulfonate ,EMS)诱发的突变率和突变谱进行了研究 .将带有lacⅠ靶基因的pSPORT1质粒通过酶切、环化和转化DH1 0B宿主菌的方式从经和未经诱变处理的D6 2转基因小鼠骨髓组织基因组DNA中回收出来 ,lacⅠ靶基因突变体用M9/L选择性平板进行正向选择 .结果从经EMS诱变处理的小鼠基因组DNA中回收出的约 1 1 935个pSPORT1质粒中筛选到 6个lacⅠ-突变体 (EMS诱发的突变率为 5 0× 1 0 -5 ) ,而从对照组小鼠基因组DNA中回收出的约 1 1 6 4 9个质粒中没有检测到lacⅠ-突变体 (自发突变率则小于 8.6× 1 0 -5 ) .对 6个突变体的 2个突变高发区进行了序列分析 ,共检测出 1 6个点突变 .其中 ,碱基置换突变为主要突变类型 ,占 87.5 % ( 1 4) ,其余 1 2 .5 % ( 2 )的突变为缺失突变 .在碱基置换突变中 ,颠换占6 4 % ;而转换仅占 36 % ,这既不同于用BigBlue 转基因小鼠所测到的lacⅠ基因在小鼠体内的自发突变谱 ,又不同于用穿梭载体 /哺乳动物细胞系统所测到的EMS在体外的诱变谱 .而突变发生的位点则与其他的研究报道相同 ,主要出现在CpG二核苷酸 ,占全部点突变的 45 % .这些结果表明 :( 1 )基于含 pSPORT1质粒的D6 2转基因小鼠?
- 黎怀星杨桦李建秀李建秀王肖鹏胡以平傅继梁
- 关键词：转基因小鼠EMS
- 基于Cre重组酶体系的小鼠HPRT定点整合打靶载体的构建及其应用
- 2001年
- 目的 :构建带有 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的针对小鼠 HPRT基因的基因打靶载体 ,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法 :利用含 HPRT基因组 DNA片段的质粒 p MP8和人工合成含 lox6 6序列的寡核苷酸 ,构建含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的置换型打靶载体 ,经过限制性内切酶酶切鉴定其结构正确后 ,用电穿孔法对小鼠胚胎干细胞 R1株进行基因转染 ,经 G418/ 6 - TG(6 - thioguanine)分组药物筛选 ,进行 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo载体的应用研究。结果 :得到了与设计一致的置换型打靶载体 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo;将线性化的打靶载体导入 ES细胞后 ,能与靶位点有效地发生同源重组 ,获得了 2 0个靶基因被灭活了的 ES细胞克隆。结论 :此研究成功构建了含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6针对小鼠 HPRT基因位点的置换型打靶载体 。
- 郑敬民李坚杨桦傅继梁
- 关键词：基因打靶HPRT基因CRE重组酶小鼠
- 肝组织特异表达人核受体nr5a2转基因小鼠的构建(英文)
- 2005年
- 人乙肝病毒增强子ⅡB1结合因子(hB1F)系FtzF1(NR5A)亚家族的新成员。经基因重组法将人hb1fcDNA置于小鼠白蛋白增强子/启动子序列下游构建成肝特异重组载体,通过原核显微注射将该载体导入小鼠受精卵原核,经注射且状态良好的卵回输至假孕母鼠输卵管。产下仔鼠经PCR和Southernblotting鉴定,同时RTPCR和Westernblotting分析转基因的表达。阳性Founder鼠与正常C57鼠交配以建立转基因纯系小鼠,F1代以PCR法鉴定。结果共获得4只PCR鉴定转基因阳性Founder鼠,其中一只同时经Southernblotting鉴定为阳性。RTPCR和Westernblotting结果显示,外源基因在转基因小鼠的肝组织成功表达。遗传学分析表明,转基因已整合入小鼠基因组并可稳定遗传。
- 王水良杨桦谢幼华汪垣厉建中王龙王铸钢傅继梁
- 关键词：核受体转基因小鼠
- 表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞系的建立及其特性研究
- 1999年
- 杨桦戴旭明傅继梁
- 关键词：胚胎干细胞系昆明种小鼠注射方式嵌合体发育规律
- 乙肝核酸疫苗可使树鼠句 抵御人乙肝病毒的攻击
- 众所周知,乙肝核酸疫苗可在小鼠体内诱发全面的体液和细胞免疫应答,但是,该免疫应答能否抵御乙肝病毒的攻击?由于对人乙肝病毒敏感的物种很少,除人外只有黑猩猩和树鼠句。目前世界上只有几例在黑猩猩体内的成功报道。但由于黑猩猩的高...
- 戴建新周凤娟杨桦胡振林孙树汉
- 文献传递
- 用PCR和基因组Southern杂交鉴定基因打靶实验中同源重组事件被引量：2
- 1997年
- 胚胎干细胞基因打靶实验需要从大量的基因转移细胞克隆中经过药物选择和ＤＮＡ分子水平的鉴定来获得发生同源重组的阳性细胞克隆。将快速简便、灵敏度高的ＰＣＲ技术和准确可靠的基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术相结合，用来对小鼠凝血因子Ⅸ基因打靶事件进行分子鉴定，取得了较好的效果，观察了ＰＣＲ鉴定的高灵敏度，但有假阳性的存在，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交确认弥补这一不足，分析了ＰＣＲ鉴定中阳性对照的设立和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ鉴定中探针和内切酶的选择等问题。
- 戴旭明薛红杨桦胡以平胡以平
- 关键词：基因组SOUTHERN杂交基因打靶同源重组PCR
- 定点突变小鼠凝血因子Ⅸ胚胎干细胞基因打靶载体的构建被引量：4
- 1999年
- 目的 构建定点突变的小鼠凝血因子Ⅸ胚胎干(ES)细胞基因打靶载体。方法 在小鼠Ⅸ因子基因第8 外显子中分别引入三个定点突变,构建置换型打靶载体转染胚胎干细胞,经药物筛选后挑取抗性细胞。结果 成功引入点突变并构建置换型打靶载体,转染ES细胞后经药物筛选得到抗性细胞克隆。结论 体外定点突变系统可以对基因进行精细的修饰,为建立更精确地模拟人类疾病的动物模型打下基础。
- 李坚戴旭明杨桦傅继梁
- 关键词：基因打靶血友病
- 基于质粒载体的转基因小鼠突变研究模型的建立被引量：1
- 1995年
- 基于质粒载体的转基因小鼠突变研究模型的建立黎怀星，李建秀，杨桦，胡以平，王肖鹏，傅继粱（上海第二军医大学生物教研室２００４３３华西医科大学分子生物学研究室成都６１００４１）本研究拟建立一个以ＬａｃＩ作为诱变靶基因，ｐＳＰＯＲＴＩ（４．１ｋｂ）作为载体...
- 黎怀星李建秀杨桦胡以平王肖鹏傅继粱
- 关键词：质粒转基因小鼠基因突变动物模型
- 胚胎操作方式对受精卵成活率影响的初步分析被引量：1
- 1995年
- 胚胎操作方式对受精卵成活率影响的初步分析黎怀星，李建秀，杨桦，胡以平，王肖鹏，傅继梁（上海第二军医大学生物教研室２００４３３成都华西医科大学分子生物学研究室成都６１００４１）正确的胚胎操作是以显微注射法制备转基因小鼠的主要步骤之一，它直接影响胚胎的成...
- 黎怀星李建秀杨桦胡以平王肖鹏傅继梁
- 关键词：受精卵成活率转基因小鼠
- 表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞系的建立及其特性研究
- 胚胎干细胞(Embryonic Stem cell,ES cell)途径是制备转基因动物的常用手段.为建立高效、稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)
- 杨桦
- 关键词：胚胎干细胞绿色荧光蛋白嵌合鼠
