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嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的C末端结构域功能及生淀粉结合位点分析被引量：1: 2020年; 为确定嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy中参与生淀粉结合的结构区域,对Gt-amy的C末端结构域(C-terminal domain,CTD)进行缺失突变,并比较Gt-amy及CTD缺失突变体Gt-amy-T的酶学性质。在与Gt-amy相同的条件下,Gt-amy-T不能结合和降解玉米淀粉,CTD可有效结合玉米淀粉。以可溶性淀粉为底物,Gt-amy-T的kcat值约为Gt-amy的77.9%。CTD的系统进化关系分析显示CTD不是典型的淀粉结合结构域,但是本研究证实CTD属于生淀粉结合结构域,在Gt-amy结合并降解生淀粉中发挥重要作用,并且CTD有利于Gt-amy发挥可溶性淀粉酶活力。此外,本研究将CTD中Tyr残基定点突变为Ala残基,通过比较CTD与突变体的玉米淀粉结合能力以及Gt-amy与Gt-amy W501A/W514A的玉米淀粉结合率和降解率,确定CTD中W501和W514可能是生淀粉结合位点。; 曾静郭建军涂熠坤袁林

定点突变提高极端嗜热α-淀粉酶ApkA的高温活性和热稳定性被引量：4: 2017年; 极端嗜热α-淀粉酶具有优良的高温活性和热稳定性,因此在淀粉液化工艺中具有巨大的应用潜力,并且其高温适应性机制研究可以为构建耐高温α-淀粉酶提供理论依据和设计思路。通过分析来源于极端嗜热古生菌Thermococcus kodakarensis KOD1的α-淀粉酶Apk A的氨基酸序列,构建缺失信号肽突变体ApkAds和单点突变体ApkAdsA180K。酶学性质分析表明,与ApkAds相比,突变体ApkAdsA180K的高温活性和热稳定性明显提高。其中ApkAds的最适反应温度为90℃,对应的酶比活力为2 946.75 U/mg;突变体ApkAdsA180K的最适反应温度为100℃,对应的酶比活力为4 501.08 U/mg。ApkAds于90℃的半衰期约为5 h,突变体ApkAdsA180K于90℃的半衰期约为7 h。通过同源模建得到的蛋白质三级结构显示,突变体ApkAdsA180K中氨基酸残基K180与D212间形成离子键。本研究结果表明ApkAdsA180K中K180与D212间离子键有利于其维持其高温活性和热稳定性。; 曾静郭建军袁林; 关键词：离子键定点突变热稳定性

重组减蛋综合征病毒KnobS干酪乳杆菌的构建与表达被引量：1: 2016年; 以干酪乳杆菌为传递载体,以开发食品级安全的减蛋综合征病毒疫苗为目标,构建了一个温度敏感型自杀型质粒系统p ORZP-UKD。将该质粒电转化到干酪乳杆菌L.casei中,经过2次升温处理和5-氟尿嘧啶抗性筛选,挑选阳性克隆,采用PCR和SDS-PAGE方法进行鉴定。KnobS基因整合到干酪乳酸杆菌基因组内,并实现融合蛋白KnobS的分泌表达。表明得到了一株具有无任何选择性标记、携带有KnobS表达盒元件的基因组整合的重组干酪乳酸杆菌KnobSΔupp L.casei,且整合的外源基因能够随着细菌的复制而进行表达,为减蛋综合征病毒免疫保护性抗原KnobS疫苗的进一步研制提供了试验数据。; 郭建军袁林曾静邱小忠付锦楠; 关键词：干酪乳杆菌

响应面法优化嗜酸乳杆菌协同发酵豆粕的条件研究: 2023年; 试验分别利用产α-淀粉酶、蛋白酶、植酸酶以及β-甘露聚糖酶的功能性嗜酸乳杆菌对豆粕进行协同发酵,采用单因素试验研究了菌液接种量、发酵温度、发酵时间、液料比对酸溶蛋白含量的影响。在此基础上经过Box-Behnken设计试验,建立二次回归模型,得到最佳发酵条件为菌液接种量12.3%、发酵时间78.9 h、发酵温度36.8℃、液料比0.9 L/kg。在此条件下发酵豆粕,发酵豆粕的粗蛋白含量比发酵前提高了15.13%,酸溶蛋白含量提高了66.91%,半纤维素含量下降了24.93%,游离氨基酸含量是发酵前的11.62倍,胰蛋白酶抑制剂含量下降了91.68%,脲酶活性下降了95.67%,植酸含量下降了83.87%,发酵豆粕中的活菌数为1.37×10^(10) CFU/g。研究表明,该复合菌株发酵模式能够有效增加豆粕的营养成分,去除抗营养因子,从而提高豆粕的利用率,为发酵豆粕的工业化生产提供参考。; 王通郭浩聂俊辉岳斯源郭建军曾静袁林; 关键词：嗜酸乳杆菌豆粕响应面法

一种乳酸菌发酵稳定剂及其制备方法和应用方法: 本发明公开了一种乳酸菌发酵稳定剂及其制备方法和应用方法，所述乳酸菌发酵稳定剂包括糖类，D‑氨基酸及磷酸氢钙和抗坏血酸钠，所述乳酸菌发酵稳定剂为乳酸菌的发酵培养提供营养成分能被有效利用，提高了在乳酸菌培养后发酵液中活菌数；...; 郭建军袁林曾静聂俊辉黄国昌熊大维王通岳斯源

一种快速分离筛选纤维素分解真菌的方法: 本发明公开了一种快速分离筛选纤维素分解真菌的方法，包括如下步骤：A、选择性富集培养与初筛；B、多孔细胞培养板复筛；C、平板培养复筛；D、菌种保存。本发明采用纤维素内切酶检测底物作为筛选指示剂和筛选培养基的唯一碳源，并通过...; 袁林傅筱冲郭建军曾静邱小忠杨罡; 文献传递

一种淀粉降解能力提高的嗜热酸性III型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用: 本发明公开了一种淀粉降解能力提高的嗜热酸性III型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用，属于基因工程和酶工程领域。对嗜热酸性III型普鲁兰水解酶TK‑PUL中进化偶联氨基酸残基对K526/L538进行饱和突变，构建相应的...; 曾静何础阔袁林郭建军侯安伟聂俊辉

多角体包裹型猪α干扰素在昆虫细胞中的表达被引量：2: 2017年; 为了获得多角体包裹的重组猪α干扰素,应用Bac-to-Bac昆虫细胞杆状病毒表达系统,将多角体蛋白基因和编码成熟猪α干扰素的基因分别构建到p Fast Bac Dual载体的PH、P10启动子下,以多角体蛋白H1α-螺旋序列为信号肽。将构建质粒转化DH10BacTM感受态细胞进行同源重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染Sf9昆虫细胞获得重组病毒。通过间接免疫荧光、Western-Blot证明,多角体蛋白与猪α干扰素实现共表达,在信号肽引导下猪α干扰素被包埋进多角体;用微量细胞病变抑制法检测显示,多角体包裹的猪α干扰素有抗病毒活性,效价达到5亿U/mg以上。应用在昆虫细胞中表达的多角体包裹型猪α干扰素,在临床上为猪病毒性疾病的防治与治疗奠定了基础。; 郭建军曾静袁林邱小忠; 关键词：多角体杆状病毒表达抗病毒活性

减蛋综合征病毒纤维蛋白主要抗原结构域原核表达及抗原性鉴定被引量：3: 2012年; 利用生物信息学软件对减蛋综合征病毒(EDSV)AV-127纤维蛋白进行抗原特性分析,人工合成融合基因Knobs,将其克隆到原核表达载体pET28a的多克隆位点,构建原核表达载体pET28a-Knobs,将其转化到感受态细胞Rosetta(DE3)pLysS中,经30℃、1.0 mmol.L-1IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀。结果显示:目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为26.0 ku;Western blot结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。本试验为进一步研究EDSV抗原结构域的免疫原性以及减蛋综合征基因工程疫苗的开发奠定了基础。; 郭建军范汉东杨一兵; 关键词：减蛋综合征病毒结构域原核表达抗原

巴卡丁Ⅲ对模式抗原鸡卵清白蛋白的免疫佐剂作用: 2014年; 研究巴卡丁Ⅲ对模式抗原鸡卵清白蛋白（OVA）在小鼠上引起的免疫效果.小鼠分6组（n=8）,对照组为生理盐水组,试验Ⅱ组为OVA组,试验Ⅲ～Ⅴ组在试验Ⅱ组上分别再添加50、100、200μg的巴卡丁Ⅲ,试验Ⅵ组在试验Ⅱ组上再添加200 μg铝胶,每次免疫间隔3周,共免疫2次.免疫后2周后分离小鼠血清和脾淋巴细胞,分析样品中IgG、IgG亚类、IgM水平,淋巴细胞增殖反应以及细胞因子表达情况.结果表明：OVA中添加巴卡丁Ⅲ可以显著提高机体产生更强的IgG,IgG亚类和IgM反应（P＜0.05）;添加巴卡丁Ⅲ试验组显著增强了脾淋巴细胞体外对OVA的刺激增殖指数、细胞因子（IL-4,IL-10,IFN-γ和IL-12）的表达（P＜0.05）.巴卡丁Ⅲ具有很好的佐剂效果,是一个理想的疫苗候选佐剂.; 袁林郭建军邱小忠张文平; 关键词：佐剂

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郭建军

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