赵丹
- 作品数：86 被引量：146H指数：7
- 供职机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金河北省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学语言文字经济管理更多>>
- 暗黑鳃金龟碱性磷酸酶HpALP的基因克隆、表达及其与Bt Cry8Ea3的结合特性
- 2022年
- 【目的】明确苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)晶体蛋白对暗黑鳃金龟Holotrichia parallela幼虫的杀虫机制。【方法】基于暗黑鳃金龟转录组数据,PCR克隆暗黑鳃金龟碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)基因HpALP全长cDNA序列;利用原核表达系统在体外表达HpALP,并进行Western blot检测;利用qRT-PCR测定HpALP在暗黑鳃金龟3龄第2天幼虫不同组织(前肠、中肠、直肠、回肠、马氏管、脂肪体和体壁)中的表达水平;利用配体印记实验及ELISA技术对HpALP蛋白与苏云金芽胞杆菌晶体蛋白Cry8Ea3体外结合特性进行分析。【结果】得到了暗黑鳃金龟HpALP全长cDNA(GenBank登录号:MZ004964),长1536 bp,编码512个氨基酸,预测蛋白质分子量为57.32 kD,等电点为4.70;HpALP与食粪金龟Onthophagus taurus ALP的氨基酸序列一致性最高;原核表达获得重组蛋白HpALP,经Western blot检测HpALP重组蛋白在IPTG诱导8 h时的表达量最高。qRT-PCR分析的组织表达谱结果表明,HpALP在幼虫前肠中丰度最高。HpALP重组蛋白可以与Cry8Ea3特异结合,解离常数Kd值为76.21±26.44 nmol/L,最大亲合力Bmax值为0.59±0.068;而HpALP重组蛋白与对照Cry1Ab35不结合,Kd值为142.50±137.30 nmol/L,Bmax值为0.013±0.005。【结论】分离鉴定了暗黑鳃金龟HpALP蛋白,它与Bt Cry8Ea3亲和力强,推断其为Cry8Ea3的受体蛋白。研究结果为明确Cry8Ea3蛋白对暗黑鳃金龟的作用机制提供了理论依据。
- 乔英翠赵丹王哲陆秀君郭巍郭巍
- 关键词：暗黑鳃金龟碱性磷酸酶ELISA
- 甜菜夜蛾肽聚糖识别蛋白基因SePGRP-SA的克隆及功能鉴定被引量：1
- 2022年
- 【目的】本研究旨在阐明甜菜夜蛾Spodoptera exigua幼虫体内肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition protein,PGRP)在响应苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)感染过程中的功能。【方法】利用PCR方法扩增甜菜夜蛾幼虫肽聚糖识别蛋白基因SePGRP-SA全长cDNA;采用qRT-PCR分析SePGRP-SA在甜菜夜蛾不同发育阶段(卵、1-5龄幼虫、预蛹和蛹)及4龄幼虫不同组织(中肠、马氏管、围食膜、脂肪体、血淋巴和表皮)中的表达。通过RNAi技术沉默SePGRP-SA基因72 h后,qRT-PCR检测SePGRP-SA沉默效率及甜菜夜蛾4龄幼虫中肠抗菌肽相关基因(Ceropin,Attacin和Defensin)和细菌载量的变化。RNAi沉默SePGRP-SA 24 h后,以苏云金芽胞杆菌菌株Bt-GS57饲喂甜菜夜蛾4龄幼虫0,24,48,72,96和120 h,计算幼虫校正死亡率;饲喂甜菜夜蛾4龄幼虫Bt-GS57后0,24,48和72 h,利用qRT-PCR检测中肠SePGRP-SA,Ceropin,Attacin和Defensin的相对表达量。【结果】克隆获得甜菜夜蛾SePGRP-SA全长DNA(GenBank登录号:MW265930),开放阅读框长576 bp,编码191个氨基酸,其编码蛋白的预测分子量为21.59 kD。序列分析结果表明,SePGRP-SA具有典型的PGRP和Ami2保守结构域,信号肽为19个氨基酸,为分泌型蛋白;系统进化分析发现,SePGRP-SA与斜纹夜蛾Spodoptera litura的SlPGRP亲缘关系最近,氨基酸序列一致性达91.1%。发育表达谱结果表明SePGRP-SA在甜菜夜蛾4和5龄幼虫、预蛹和蛹中高表达;组织表达谱结果表明,SePGRP-SA在4龄幼虫各组织中均表达,其中以血淋巴中表达量最高。与注射dsEGFP(对照)相比,注射dsSePGRP-SA的甜菜夜蛾4龄幼虫在72 h时中肠SePGRP-SA基因表达量下调了95.26%,Cecropin,Attacin和Defensin表达量显著下调,中肠细菌载量显著升高。注射dsEGFP和dsSePGRP-SA的甜菜夜蛾4龄幼虫饲喂Bt-GS57,72 h时幼虫校正死亡率分别为50.00%和73.33%,表明幼虫对Bt-GS57的敏感性明显增加。甜菜夜蛾4龄幼虫取食Bt-GS57后,中肠SePGRP-SA,Cecr
- 李亚子赵丹郭晓昌吴涵刘兆瑞郭巍
- 关键词：甜菜夜蛾免疫调控肽聚糖识别蛋白RNAI
- 华北大黑鳃金龟成虫周年发生动态及影响因素分析被引量：2
- 2015年
- 华北大黑鳃金龟[Holotrichia oblita(Faldermann)]是一种为害多种作物的重要地下害虫,为了解其近年的发生动态以便针对性防治,于2010-2013年对其成虫出土规律进行了周年系统研究,并对其发生期和发生量影响因素进行了初步分析。结果表明,2010-2013年华北大黑鳃金龟的出土盛期仍在5月份,与文献相比总体一致,但出土期略滞后并且时间有所延长;而2013年始发期明显晚于其他年份,对其气象因素分析发现,2013年春季干旱,首次降雨在5月26日,明显晚于其他年份,其始发期也较其他年份偏晚,说明土壤湿度可能影响成虫出土始期。出土盛期成虫出土量与气象因素的灰色关联度分析表明,成虫日出土量与平均相对湿度关联最密切,其次是日均温和降雨量。研究结果为华北大黑鳃金龟的预测预报以及针对性防治提供了基础。
- 梁超郭巍陆秀君李瑞军于浩海王伟赵丹徐大庆
- 关键词：华北大黑鳃金龟气象因子灰色关联度分析
- 华北大黑鳃金龟人工饲养饲料配方及制作方法
- 本发明公开了一种华北大黑鳃金龟幼虫人工饲料及其制备方法，所述人工饲料组成为：酵母粉80g、蔗糖30g、玉米秸秆粉10g、甘蔗秸秆粉20g、Vc6g、Vb2g、氯化胆碱2.8g、山梨酸2g、琼脂17g、甲醛1mL，最终配置...
- 郭巍梁超陆秀君徐大庆李瑞军赵丹王伟
- 文献传递
- 棉铃虫中肠cDNA表达文库的免疫筛选及其克隆分析被引量：5
- 2010年
- 昆虫围食膜是保护其中肠的一道物理屏障,破坏围食膜就可能使其中肠处于不正常的生理状态而最终导致死亡。本研究提取棉铃虫Helicoverpa armigera(Hbner)围食膜蛋白,成功制备棉铃虫围食膜蛋白多克隆抗体,并对棉铃虫中肠cDNA表达文库进行免疫筛选,共得到385个阳性克隆。对其中26个克隆进行鉴定并测序分析,结果表明19个克隆为肠粘蛋白。过碘酸-希夫试剂(PAS)显色法检测棉铃虫围食膜蛋白组成,发现围食膜蛋白大部分为糖蛋白。通过对棉铃虫中肠围食膜蛋白的分离鉴定,为进一步分析棉铃虫围食膜蛋白的生理功能,寻找生物防治新靶标,开发新型高效生物杀虫剂提供理论依据。
- 李杰张霞郭巍刘小民李新娜赵丹
- 关键词：棉铃虫CDNA表达文库免疫筛选粘蛋白
- 六种杂草对华北大黑鳃金龟甲取食和繁殖的影响被引量：9
- 2017年
- 华北大黑鳃金龟甲Holotrichia oblita是农林业生产中重要的地下害虫,目前虽对其饲养技术进行了一些研究（周洪旭等,2009;刘子欢,2015）,但其室内饲养体系仍不完善,因此研究其周年饲养技术具有重要意义。
- 朱秀蕾陆秀君刘子欢赵丹李瑞军郭巍
- 关键词：金龟甲繁殖取食杂草农林业生产
- 棉铃虫双重氧化酶HaDuox的序列特征和表达及病原诱导分析被引量：1
- 2020年
- 【目的】探索棉铃虫双重氧化酶在昆虫肠道防御机制中的作用。【方法】克隆棉铃虫HaDuox编码区基因,并利用生物信息学方法分析其编码的氨基酸序列;构建HaDuox膜外1117到1770 bp编码基因的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达特异性蛋白;采用实时荧光定量PCR技术分析棉铃虫幼虫不同组织和不同发育时期HaDuox基因的转录水平;通过测定基因相对表达量研究棉铃虫HaDuox基因对苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)诱导的免疫响应。【结果】棉铃虫HaDuox基因开放阅读框长4497 bp,编码1498个氨基酸,预测编码蛋白的相对分子量为171.91 kD。HaDuox与家蚕、橘小实蝇、意大利蜜蜂等昆虫的双重氧化酶结构域类似,含有过氧化物酶结构域,钙离子结合域,铁还原结构域,黄素腺嘌呤二核苷酸结合域和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸结合域。有7个跨膜区,在第29个和第30个氨基酸位点之间存在一个信号肽切割位点。HaDuox膜外片段在大肠杆菌中成功表达约25 kD的重组蛋白。实时荧光定量PCR结果显示HaDuox基因在马氏管和卵期表达量较高。苏云金杆菌侵染棉铃虫幼虫12 h时诱导HaDuox的大量表达,与对照相比,随着侵染时间的延长,其表达量呈现出先升高后降低再趋于稳定的特点。【结论】实现棉铃虫双重氧化酶基因膜外片段的外源表达,并对HaDuox基因序列特征,不同发育时期和组织表达模式,病原诱导表达进行研究,为研究HaDuox在肠道免疫中扮演的角色及棉铃虫响应病原菌侵染的分子机制提供依据。
- 宗召莉郭巍赵丹
- 关键词：棉铃虫蛋白表达
- 甜菜夜蛾围食膜几丁质结合蛋白SeCBP66在不同体系中的表达
- 2012年
- 分析甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)围食膜几丁质结合蛋白SeCBP66氨基酸序列,利用PCR技术扩增获得缺失信号肽编码区围食膜几丁质结合蛋白的基因△(s)-secbp66。将△(s)-secbp66克隆到表达载体pET28a和pPIC9K,分别转化大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115进行原核及真核表达;将△(s)-secbp66克隆到质粒pFastBacTM,转化大肠杆菌DH10Bac构建重组Bacmid,转染昆虫细胞系Sf9及BTI-TN-5B1-4(HighFive)从而在昆虫细胞系中进行表达。结果表明:SeCBP66在原核细胞中未见表达,在酵母细胞中表达产物呈弥散状,而在昆虫细胞系中则能稳定的表达116kDa的特异蛋白。
- 刘彬李瑞军郭巍孙伟明赵丹单鸣徐大庆
- 关键词：甜菜夜蛾原核表达系统毕赤酵母表达系统昆虫细胞系
- 美国白蛾hcapn3基因的克隆及HcAPN3蛋白与Cry1Ac结合特性分析被引量：2
- 2016年
- 通过比对分析已知昆虫氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)氨基酸序列并结合本实验室的美国白蛾(Hyphantria cunea)中肠iTRAQ结果,设计了hcapn3基因特异引物,获得hcapn3基因片段。通过RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因(hcapn3)全长序列(GenBank登录号为KJ013598)。Blastp分析表明,获得的氨肽酶属于氨肽酶N3家族,命名为HcAPN3。序列分析显示HcAPN3包括952个氨基酸残基,具有典型的谷氨酸锌化氨肽酶(Gluzincin)结构域和羧基端(ERAP1_C)结构域。利用Bac to Bac表达系统在昆虫细胞中表达108kDa的HcAPN3蛋白。在原核表达系统中表达58kDa的Gluzincin结构域和49kDa ERAP1_C的结构域蛋白。Ligand Blot分析结果显示,HcAPN3蛋白及Gluzincin结构域可与Cry1Ac蛋白特异性结合,但ERAP1_C结构域未能与Cry1Ac结合。本研究首次克隆了美国白蛾氨肽酶基因并分析了HcAPN3与Cry1Ac的结合特性,为下一步功能研究提供基础。
- 王翠苹赵丹李少雅郭家萍郭巍陆秀君
- 关键词：美国白蛾氨肽酶NLIGANDBLOT分析
- “富士”苹果果肉开裂型裂果发生机理研究被引量：4
- 2015年
- 以果肉开裂型裂果程度不同的苹果园为研究对象,于2014年10月调查,研究了裂果程度不同的苹果园裂果及管理情况,测定了果实可溶性固形物含量、角质层厚度、果皮和果肉主要矿质元素含量等,并进行了果实浸水试验,以期探明红富士苹果果肉开裂型裂果的发生机理。结果表明：裂果的可溶性固形物含量和角质层厚度均显著或极显著大于正常果。裂果果皮钙含量极显著低于正常果,随果皮钙的含量的降低,裂果程度加重。果实可溶性固形物含量与单果裂缝总长度呈极显著正相关,与裂缝平均深度呈显著正相关。角质层厚度与裂缝平均宽度、裂缝平均深度呈显著正相关。果皮氮、镁的含量与单果裂缝总长度、裂缝平均宽度、裂缝平均深度和单果平均裂缝条数均呈极显著正相关;果皮钾的含量与裂缝平均宽度、单果平均裂纹条数呈显著负相关;果肉钾的含量与单果裂缝总长度、裂缝平均宽度、裂缝平均深度和单果平均裂缝条数均呈显著负相关。果皮氮/钾、氮/钙、磷/钙、钾/钙比与单果裂缝总长度、裂缝平均宽度、裂缝平均深度和单果平均裂缝条数均呈显著或极显著正相关。果皮钾/镁、钙/镁、钾/镁比与单果裂缝总长度、裂缝平均宽度、裂缝平均深度和单果平均裂缝条数均呈显著或极显著负相关。果肉磷/钾比与单果裂缝总长度、裂缝平均宽度均呈显著正相关。裂果果园的正常苹果在浸水后19~23h出现了裂果,随着浸水时间延长,裂果程度加重;对照果园的苹果浸水前3d未出现裂果,直到第4天才出现轻微裂果。
- 赵丹苏彦苹李保国陈梦华张雪梅齐国辉
- 关键词：苹果裂果角质层矿质元素
