贺生芳
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 1种高效纳米抗体生产方法的建立
- 2013年
- 为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2)Cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白,构建了pHSIE-Nb(His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb(His-Intein)和pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3种表达载体。分别转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,在不同表达条件下比较,选取可溶性表达最好的载体大量表达,用Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化,并利用Intein自剪切去除标签,纯化纳米抗体。且用制备的纳米抗体作为包被抗体,做双抗体夹心ELISA检测其反应原性。结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达,而融合His-Trx-Intein标签的载体可溶性表达量最高。融合蛋白经pH7、25℃剪切24h后可以得到不含融合标签的纳米抗体。双抗体夹心ELISA检测,统计学分析,制备的抗PCV2Cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(P>0.05),因此制备的纳米抗体是有活性的。本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法,可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程,获得具有活性的无标签的纳米抗体。为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持。
- 贺生芳付向晶刘阳坤慕国辉刘海金王兴龙杜恩岐杨增岐
- 关键词：融合标签表达纯化
- 陕北地区鸡新城疫免疫监测及分析被引量：3
- 2012年
- 以神木县为例,介绍了陕北地区鸡新城疫的防疫情况,揭示新城疫防疫的薄弱环节。本研究从神木县多家种鸡场、商品蛋鸡场及活禽交易市场采集血清样本346份,用血凝抑制试验测定新城疫抗体滴度,结果显示商品蛋鸡场免疫效果较差,合格率只有69.6%;同时发现种鸡场也存在免疫问题。在今后新城疫防控过程应与重视。
- 孟建斌温志医王兴龙贺生芳王须田李梅高子华刘飞鹏项艳龙王治华杨增岐
- 关键词：新城疫免疫监测血凝抑制试验
- 神木县PRRSV与PCV-2的血清学调查被引量：2
- 2012年
- 为调查猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪圆环病毒病(PCVD)在陕西省神木县的流行情况,用ELISA方法对从该地区规模化猪场收集的200份血清进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病病毒(PCV-2)抗体检测,结果显示,PRRSV抗体阳性率为26.8%;PCV-2抗体阳性率为85.5%,初步证明PCV-2感染在神木县十分普遍,部分猪场PRRSV感染比例较高,应加强对这两种疾病的防疫工作。
- 孟建斌温志医王兴龙穆国辉贺生芳王须田李梅高子华刘飞鹏项艳龙王治华杨增岐
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型血清学调查
- 秦岭野鸟源新城疫病毒致病性与F、HN基因分子特征分析被引量：5
- 2013年
- 为研究新城疫病毒(NDV)在秦岭地区野生鸟群中的流行情况,在秦岭地区采集健康野鸟咽喉、泄殖腔拭子各252份,进行NDV的分离、鉴定,并对NDV分离株进行生物学特性研究和遗传进化分析。结果共分离获得5株野鸟源NDV,其致病指数MDT、ICPI和IVPI分别为60.0～76.8h、0.900～1.261、0.41～0.81;对F基因(47～420bp)进行遗传进化分析,5株分离株均属于基因VIb型,F蛋白裂解位点为112 RRQKRF117;HN基因氨基酸相似性为99.5%～99.8%,与鸽源基因VI型NDV相似性为91.4%～98.0%,与LaSota、F48E9相似性分别为87.1%～87.4%、89.0%～89.3%。上述结果表明,基因VIb型NDV在秦岭地区健康野生鸟类中流行,可能源于鸽源NDV,并具有强毒力的分子特征,但对鸡的表现为中等致病力,说明野鸟NDV具有独特的分子特征和致病性。
- 张渭东王丹阳唐文雅王兴龙姜振国陈胜利幕国辉刘海金贺生芳付向晶郝华芳刘阳坤杜恩岐杨增岐
- 关键词：F基因HN基因遗传进化分析
- 1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析被引量：6
- 2012年
- 为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533—561位存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV分子特征相似;GP5 85—95位氨基酸处出现了11个氨基酸的连续缺失;系统进化分析发现HZ1007与国内高致病性代表毒株HUN4、JXwn06、SY0608等亲缘关系较近,且与HUN4株相似性最高,为97.4%。本研究发现了GP5缺失型PRRSV,这在国内外尚属首例,且HZ1007株与高致病性PRRSV亲缘关系较近,在系统进化分析树上与高致病性毒株同属一个分支,其可能是高致病毒株新的变异型,其致病性和生物学特性需进一步研究分析。
- 付向晶王丹阳王兴龙张渭东宋祥军刘阳坤唐文雅慕国辉刘海金贺生芳杜恩岐杨增岐
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因
- Intein介导的纳米抗体在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化
- 基因工程方法克隆骆驼重链抗体可变区(variable domain of heavychain ofheavy-chainantibody，VHH）发展出的单域抗体(Single-domain antibodies,sd...
- 贺生芳
- 关键词：融合标签表达纯化双抗体夹心ELISA
- 文献传递
- 鸡IFN-β启动子荧光素酶报告载体的构建与活性检测被引量：2
- 2013年
- 构建并鉴定鸡β干扰素(IFN-β)基因启动子荧光素酶报告基因载体并进行转录活性分析。通过PCR方法从鸡基因组DNA中克隆鸡IFN-β基因启动子,亚克隆到含萤火虫荧光素酶报告基因pGL3-basic载体上,构建鸡IFN-β基因启动子荧光素酶报告基因载体pChIFN-β-luc;用脂质体法将构建的报告基因载体瞬时转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,并设置空白对照组和poly(I:C)处理组,检测荧光素酶的活性。经PCR扩增出鸡IFN-β基因启动子序列,双酶切及测序鉴定各重组体构建正确;转染后检测,pChIFN-β-luc具有转录活性,并且在poly(I:C)的刺激下其荧光素酶活性显著升高。本试验为进一步研究鸡IFN-β基因转录调控机制奠定了基础。
- 陈胜利唐文雅郝华芳王兴龙刘阳坤付向晶张鹏贺生芳杜恩岐杨增岐
- 关键词：启动子
