胡素娟
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 供职机构：青岛大学医学院附属医院更多>>
- 发文基金：青岛市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠胰岛素样生长因子-1重组腺病毒的构建及其在胰岛β细胞的表达被引量：3
- 2009年
- 构建含有鼠胰岛素样生长因子1(rIGF-1)重组腺病毒,研究其在胰岛β细胞的表达。Trizol一步法提取大鼠肝脏组织总RNA,RT-PCR法合成鼠胰岛素样生长因1(rIGF-1)cDNA;PCR纯化产物和pAdTrack-CMV分别经BglⅡ和EcoRⅤ双酶切后纯化,T4DNA连接酶连接,转化JM109感受态细菌,卡那霉素平板筛选阳性克隆扩增培养,抽提质粒;经BglⅡ和EcoRⅤ双酶切及测序鉴定后,将正确重组体pAd-CMV-rIGF-1转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183菌。同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒用脂质体介导转染293细胞,获得重组腺病毒Ad-rIGF-1,病毒滴度为4.0×108pfu/ml。Ad-rIGF-1感染大鼠胰岛β细胞株-RINm5F细胞,RT-PCR法对重组腺病毒进行鉴定,培养上清ELISA法测鼠IGF-1蛋白为91.6±26.8ng/ml,Westernblotting分析感染细胞有特异性rIGF-1条带。本研究成功构建Ad-rIGF-1重组腺病毒,并在胰岛β细胞有效表达,为下一步研究rIGF-1因子对胰岛β细胞的保护及基因治疗1型糖尿病奠定了基础。
- 陈志红李堂胡素娟王桂琴
- 关键词：胰岛素样生长因子-1腺病毒胰岛Β细胞基因治疗
