申漫里
- 作品数：9 被引量：39H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金卫生部临床学科重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 膜联蛋白V与碘化丙啶用于细胞周期特异性凋亡的检测被引量：15
- 2002年
- 目的 建立一种新的细胞周期特异性凋亡检测方法。方法 将急性早幼粒细胞白血病细胞株 (HL 60 )分别经喜树碱 (CAM)、紫外线诱导 ,及喜树碱和N 甲苯磺酰基 L 苯基丙氨酸氯甲基酮(TPCK)共同诱导后 ,用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(AnnexinV)进行标记 ,经 1 %不含甲醇的甲醛溶液冰浴固定 ,再用含洋地黄皂苷的碘化丙啶染色液染色后 ,流式细胞术分析凋亡细胞的周期特异性和细胞凋亡率 ,并与DNA链缺口标记法 (TdT)和常规AnnexinV法检测结果进行比较。结果 细胞凋亡的周期特异性分析 :膜联蛋白V/碘化丙啶法 (PA法 )和TdT法结果一致 ,CAM和紫外线诱导的细胞凋亡分别发生在S期和G1期 ;CAM和TPCK共同诱导试验显示 ,PA法对早期凋亡具有较高的检测灵敏度 ,TdT法则不能有效检测 ;而常规AnnexinV法无法进行凋亡细胞的周期特异性分析。细胞凋亡率的检测 :HL 60经CAM、紫外线、CAM与TPCK三种方法诱导后 ,PA法检测凋亡率的结果 (1 7 3 %、34 .7%、35 .9% )与常规AnnexinV法的检测结果 (1 8.1 %、35 .6 %、37.0 % )一致 (P >0 .0 5) ,而TdT法(1 0 .7%、1 9.5 %、- )则明显偏低 (P <0 .0 1 )。结论 PA法可以用于凋亡细胞周期特异性检测 ,其稳定、可靠。
- 陶德定冷彦覃吉超周晖申漫里余源龚建平
- 关键词：流式细胞术细胞周期膜联蛋白V碘化丙啶细胞凋亡
- 双光源流式细胞术三参数细胞周期分析(英文)
- 2005年
- 目的建立双光源流式细胞仪三参数细胞周期分析方法,同时检测两种细胞周期素和细胞DNA含量,分析非时相性的细胞周期素的表达。方法运用免疫荧光标记技术对两种cyclin标记,一种用直接法(FITC标记),另一种用间接法(RPE-Cy5标记的二抗),同时进行细胞核染色(荧光素DAPI),双光源二点激发,三波段定量检测,数据运用cellquest软件分析。mAMSA和mimosine诱导非时相性的细胞周期素表达。结果两种cyclin可同时检测,互不干扰,而且不需要荧光补偿,与单标相比无明显差别,cyclin及:DNA均可半定量分析。Cyclin A/ cyclin E/DNA分析可将对数生长期的MOLT-4细胞分为六个亚细胞群(G10、1le、G1l、S、G2、M),mimosine处理的细胞可见G1期cyclin B1表达,mAMSA处理的细胞有G2期cyclin E的异位表达。结论运用免疫荧光技术在流式细胞仪上三参数细胞周期分析可以快速定量检测两种cyclin和DNA含量,更精确地对细胞增殖进行分析。
- 冯永东陶德定覃吉超高纯申漫里冷艳余源龚建平
- 关键词：细胞周期血细胞计数
- 双参数细胞周期分析方法
- 本发明公开了一种双参数细胞周期分析方法，主要解决现有分析方法中不能将细胞周期区分得更为详细的不足。该方法将鼠抗人细胞周期蛋白E单克隆抗体、鼠抗人细胞周期蛋白A单克隆抗体和小牛血清白蛋白液按1～16∶1～16∶800的体积...
- 龚建平覃吉超陶德定冷彦申漫里冯永东高纯余源
- 文献传递
- 多种流式细胞术分选凋亡细胞后共聚焦显微镜分析被引量：1
- 2005年
- 目的建立一种分析方法证实流式细胞术对细胞凋亡分析的准确性。方法在流式细胞仪上利用Sub G1法、TdT法、AnnexinⅤ法和API法4种不同的凋亡细胞分析方法,对羟基喜树碱(CAM)诱导的急性T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat细胞)进行流式细胞术分析并同时分选出不同时相的凋亡和非凋亡细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)进行形态学分析。结果①流式细胞术分选后共聚焦显微镜分析技术(PSC)能同时、准确地鉴别不同细胞周期时相的凋亡细胞和非凋亡细胞。②PSC技术能对同一群细胞内的凋亡细胞和坏死细胞进行形态学鉴别。③PSC技术证实了流式细胞术在细胞凋亡研究中的准确性。结论PSC技术结合了流式细胞术和LSCM的优点,更客观、准确地分析凋亡细胞,同时对细胞周期特异性的细胞凋亡有独到的优势,发展了细胞凋亡的分析方法。
- 高纯吴剑宏冯永东申漫里陶德定龚建平
- 关键词：细胞凋亡流式细胞术激光扫描共聚焦显微镜
- 双参数细胞周期分析方法
- 本发明公开了一种双参数细胞周期分析方法，主要解决现有分析方法中不能将细胞周期区分得更为详细的不足。该方法将鼠抗人细胞周期蛋白E单克隆抗体、鼠抗人细胞周期蛋白A单克隆抗体和小牛血清白蛋白液按1～16∶1～16∶800的体积...
- 龚建平覃吉超陶德定冷彦申漫里冯永东高纯余源
- 文献传递
- 人类非肿瘤性增殖中细胞周期蛋白的表达研究被引量：1
- 2003年
- 目的 研究具再生能力的非肿瘤组织中细胞周期蛋白 (cyclins)的表达 ,了解cyclins在两种不同性质的细胞增殖过程中的不同表现。方法 应用流式细胞术分别检测Molt 4细胞和分离自非肿瘤组织和肿瘤组织的混悬单细胞中cyclinD、E、A、B1的表达 ,并以Westernblotting证实检测结果。 结果 可再生的非肿瘤组织中无法检测到cy clins的表达 ,而在同种组织来源的肿瘤中 ,一种或多种cyclins呈阳性表达。 结论 在细胞由良性增生转变为恶性增生的过程中 。
- 申漫里何小军覃吉超龚建平
- 关键词：细胞周期蛋白细胞增殖流式细胞术
- 细胞周期蛋白B1在肿瘤细胞中的非时相性表达被引量：21
- 2002年
- 目的 证实细胞周期蛋白B1(cyclinB1)在体内和体外生长的肿瘤细胞中的非时相性周期表达模式 ,研究cyclinB1在不同生长状态和条件下的G1期肿瘤细胞中的表达情况。方法 以MOLT 4细胞为对照 ,应用流式细胞术的DNA/cyclin双参数分析法 ,检测体内和体外生长的肿瘤细胞中G1期cyclinB1的表达。对分选出的G1期细胞 ,以共聚焦显微镜观察G1期cyclinB1的表达 ;在不同体外生长情况下分选出G1期内亚细胞群体 ,以免疫印记法检测cyclinB1的表达。结果 在被阻滞生长的MOLT 4细胞、转化的T7细胞以及体内生长的肿瘤细胞中 ,均发现G1期有cyclinB1的非时相性表达。被药物阻断生长的MOLT 4细胞中 ,cyclinB1主要表达于G1晚期 ;而转化的T7细胞中 ,cyclinB1主要表达于G1早期。结论 在研究的不同细胞模型中 ,G1期细胞有cyclinB1的非时相性表达 ,cyclinB1可以在G1期的不同时间点被检测到。这一现象可能与细胞的失控性增殖和细胞凋亡的调控之间有密切联系。
- 申漫里冯永东高纯陶德定龚建平
- 关键词：细胞周期蛋白B1细胞周期肿瘤细胞流式细胞术细胞凋亡
- 用western blotting方法检测乙醇固定细胞中细胞周期素的表达
- 2001年
- 用 western blotting法测定乙醇固定细胞中细胞周期素 (cyclin)的表达情况 ,探索 western blotting和流式细胞仪对固定细胞在流式细胞术分选前或分选后对同批标本进行蛋白同步分析的可行性。采用对数生长期的 Molt- 4细胞 ,经两种常规固定方法固定后 ,用 western blotting方法检测 cyclin A、B1 、D和 E的表达。另取乙醇固定经流式细胞仪分选的 G1 期和 G2 / M期细胞裂解后 ,用 western blotting方法检测不同时相细胞中 cyclin B1 的表达。结果显示从固定细胞中提取的蛋白经 western blotting检测可得到清晰且分子量正确的条带 ,两种不同方法固定的细胞中检测到的 cyclins表达未见明显差异。乙醇固定细胞经分选后提取蛋白行 western blotting检测可见 G2 / M期细胞的 cyclin B1 有明显表达而 G1 期细胞不明显。细胞进行固定、洗涤、染色和分选等处理后不影响 western blotting对其 cyclins表达的分析 ,说明用 western
- 冷彦陶德定申漫里周晖余源龚建平
- 关键词：细胞周期素
- 咖啡因对X射线诱导的HL-60细胞凋亡的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨细胞周期检测点对不同放射剂量射线的耐受性及咖啡因对细胞周期检测点的影响。方法 对数生长期的急性早幼粒白血病细胞株(HL-60)细胞经不同剂量的X射线照射,并加入终浓度为5 mmol/L的咖啡因培养4 h后,用亚G1峰法检测细胞凋亡,用DNA链缺口标记法(TdT)分析凋亡细胞的细胞周期特异性。结果 不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡,2 Gy X射线的照射主要诱导G1期细胞凋亡,20 Gy X射线照射诱导的细胞凋亡由G1期发展至以S期和G2期为主。加入咖啡因能使射线诱导的细胞凋亡减少,其中2 Gy X射线照射的细胞表现为G1期细胞凋亡减少,而20 Gy X射线照射的细胞主要表现为以S期和G2期为主的细胞凋亡的减少。结论 细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系,咖啡因对射线诱导的细胞凋亡及检测点的影响与射线的剂量有关。
- 冷彦陶德定申漫里覃吉超陈元龚建平
- 关键词：咖啡因X射线HL-60细胞凋亡药理作用
