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石榴种皮木质素合成相关转录因子基因PgMYB的克隆与表达被引量：11: 2015年; 为初步探讨石榴(Punica granatum L.)籽粒硬度产生机理及转录因子基因PgMYB在石榴种皮木质素生物合成途径中的作用,测定了不同石榴品种籽粒硬度及种皮总木质素含量并分析两者关系,利用RT-PCR结合RACE技术,克隆了‘红玉石籽’石榴的1个MYB转录因子基因(PgMYB),通过实时荧光定量PCR技术分析了PgMYB的相对表达量。结果表明:(1)石榴籽粒硬度与种皮总木质素含量呈显著正相关关系,相关系数为0.906。(2)PgMYB基因cDNA全长1 088bp,开放阅读框921bp,编码蛋白由306个氨基酸组成,N端具有2个MYB DNA结合结构域,是植物中一个典型的R2R3-MYB转录因子;同源分析显示,该基因编码的氨基酸序列与银合欢的MYB1和拟南芥的MYB4一致性分别高达89%和84%。(3)在不同籽粒硬度石榴品种中PgMYB的表达与籽粒硬度和种皮总木质素含量呈负相关关系。(4)在石榴各个发育时期中,PgMYB表达与种皮总木质素含量同样呈负相关关系。推测该基因可能抑制石榴种皮总木质素的生物合成。; 曹丹琴杨健关晓弯张永娟龚凌燕张水明; 关键词：石榴籽粒硬度种皮

蝴蝶兰EST资源SSR标记分析与开发被引量：18: 2012年; 利用SSRIT软件对NCBI上蝴蝶兰的8188条EST序列按照碱基重复单元数8以上的标准进行SSR位点查找，发掘出246条EST序列，共含有261个SSR位点，检出率为3．19％。二核苷酸重复是最主要的重复类型，占SSR总数的94．25％。SSR的不同重复单元中，最常见的重复单元是：（TA）n和（GA）n，其余出现频率较高的依次为（TC）n、（AT）n和（AG）n。设计了32对EST-SSR引物，以蝴蝶兰品种‘V31’的DNA为模板进行PCR扩增，发现16对引物能扩增出预期产物。进一步用这16对引物对16个蝴蝶兰品种（系）进行PCR扩增，9对引物有多态性，多态性条带数在2-12个之间。结果表明，设计开发的蝴蝶兰的ESToSSR标记是有效的。; 张水明陈程龚凌燕汪天; 关键词：EST-SSR 分子标记

石榴PgGPX基因克隆及盐胁迫下的表达分析被引量：3: 2014年; 该研究以‘红玉石籽’籽粒为材料,通过RACE技术克隆了石榴GPX基因,利用Real-time PCR检测石榴在不同器官中及石榴叶片在盐胁迫处理下的相对表达量。结果表明:(1)PgGPX基因cDNA全长872bp,其中开放阅读框504bp,编码168个氨基酸。生物信息学分析显示,该蛋白具有植物GPX的典型结构,与可可树、荔枝、甜橙、玉米等植物的GPX基因相比,具有较高的一致性,分别为90.30%、87.40%、86.80%、86.20%。(2)PgGPX在石榴的叶片、花瓣和籽粒中均有所表达,且具有组织特异性,在盐胁迫下,石榴叶片中的PgGPX表达量显著上升。推测PgGPX基因在胁迫反应中可能发挥重要作用。; 彭媛媛龚凌燕曹丹琴杨健朱立武张水明; 关键词：石榴 RACE REAL-TIME PCR 盐胁迫

一种适用于RT-PCR的石榴籽粒总RNA提取方法被引量：1: 2013年; 为从石榴籽粒中提取高质量的RNA,以便进行后续分子生物学研究,针对石榴籽粒富含次生代谢物的特点,采用CTAB法并进行了改良,利用氯仿/异戊醇替代其他方法中的"异硫氰酸胍"和"Trizol试剂"进行反复抽提去除蛋白,无水乙醇去除多糖,LiCl消化DNA。结果显示:改良CTAB法提取的石榴籽粒总RNA的28S rRNA、18SrRNA条带清晰,完整性较好;OD260 nm/OD280 nm比值为1.9960,纯度较高。在此基础上通过反转录、PCR扩增出符合预期大小的Actin基因片段,表明该方法提取的RNA可满足后续RT-PCR等分子生物学试验研究。; 黄有凯曹丹琴彭媛媛龚凌燕张水明; 关键词：总RNA 改良CTAB法 RT-PCR

石榴肉桂酰辅酶A还原酶基因的克隆与表达分析被引量：13: 2016年; [目的]肉桂酰辅酶A还原酶（CCR）是木质素合成的关键酶。本文旨在通过克隆和鉴定石榴CCR基因（Pg CCR）来探究石榴木质素的合成机制以及培育软籽石榴新品种。[方法]以石榴品种‘红玉石籽’（Punica granatum‘Hongyushizi’）籽粒为材料,利用RACE和RT-PCR的方法,获得Pg CCR基因的全长序列。通过实时荧光定量PCR分析Pg CCR基因在不同品种、不同组织、籽粒不同发育时期的表达水平。[结果]Pg CCR基因c DNA全长序列1 017 bp,编码338个氨基酸,包含被认为是CCR蛋白催化位点的保守序列KNWYCYGK。系统进化树分析表明,Pg CCR与其他物种起源相同,而与葡萄Vv CCR的亲缘关系最近。Pg CCR基因在不同品种的石榴籽粒中均有表达,其中‘红玉石籽’中表达较高,‘会理软籽’和‘突尼斯软籽’中表达量较低。Pg CCR在叶、花、茎中均有表达,茎中的表达量最高,而叶片中的表达量最低。Pg CCR在‘红玉石籽’籽粒的不同时期均有表达,20-80 d相对表达量逐步上升,并在80 d时达到峰值,80 d以后表达量逐渐下降。[结论]克隆得到石榴CCR基因,其表达水平与木质素的合成及含量有一定相关性。; 董丽丽龚凌燕陈磊涂佳丽张水明; 关键词：石榴基因克隆

石榴种皮总木质素含量及PgCOMT基因的克隆与表达被引量：15: 2015年; 为探讨石榴(Punica granatum L.)籽粒硬度与种皮总木质素含量的相关性及种皮COMT基因的表达方式,利用Texture Analyser质构仪和巯基乙酸法测定6个品种的成熟籽粒硬度及种皮总木质素含量。结果表明,6个石榴品种的籽粒硬度与种皮总木质素含量呈正相关,相关系数为0.9246。采用RACE技术从石榴种皮中克隆得到1条长度为1456 bp的Pg COMT基因c DNA序列(Gen Bank登录号为KJ713968)。实时荧光定量PCR分析表明,Pg COMT在‘红玉石籽’、‘粉皮’、‘会理软籽’、‘蒙自甜’和‘突尼斯软籽’石榴种皮中的相对表达量与石榴籽粒硬度较为一致;随着石榴种皮的发育其表达量先下降后上升。这为深入了解石榴软籽性状的产生机理奠定了基础。; 张水明龚凌燕曹丹琴张永娟杨健; 关键词：石榴籽粒硬度木质素 COMT基因

石榴籽粒木质素合成相关基因的克隆及表达分析: 石榴籽粒硬度是石榴品质的重要组成，石榴籽粒的软硬直接影响着口感和可食率。软籽石榴具有籽软可食的特点，目前在市面上更受欢迎。因此，研究石榴籽粒的硬度的产生机理具有重要的价值。　　为了探讨石榴籽粒硬度与石榴籽粒种皮总木质素含...; 龚凌燕; 关键词：石榴籽粒硬度木质素基因克隆; 文献传递

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龚凌燕