黄耀煊
- 作品数：20 被引量：85H指数：6
- 供职机构：北京军区总医院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 原发性肝癌患者肝组织中乙型肝炎病毒X蛋白与P53蛋白的结合被引量：6
- 1997年
- 癌抑制基因p53发生突变是导致肝癌发生的重要因素之一。突变的p53基因表达的p53蛋白稳定性提高易被检出。作者前已报道,免疫组织化学分析10例肝癌标本中HBx蛋白基因全部阳性,但p53蛋白仅有2例阳性。设想高度表达的HBx蛋白有可能在肝组织中与p53蛋白作用形成复合物。为了证实此设想,本文分别用抗HBx单克隆抗体和抗p53单克隆抗体作免疫沉淀和免疫印迹分析表明,在肝癌患者肝组织中HBx蛋白可与p53蛋白作用产生复合物,可能影响p53基因的抑癌功能。此为HBx蛋白在肝癌发病中起重要作用的一个方面。
- 邬光惠黄耀煊李瑞平范公忍黄洁陈乃玲
- 关键词：肝肿瘤肝组织HBVX蛋白P53蛋白
- 分子杂交化学发光法检测血清中乙型肝炎病毒DNA被引量：1
- 2002年
- 目的 用非放射性的异羟基洋地黄毒甙 (地高辛 ,Dig)标记探针与靶DNA杂交 ,结合化学发光检测系统检测乙肝患者血清中HBVDNA。方法 应用宝灵曼公司生产的DigDNA标记检测试剂盒。将Dig标记的HBVDNA探针与点印迹在尼龙膜或硝酸纤维素膜上的靶DNA杂交 ,杂交后的膜与Dig AP抗体保温 ,然后用化学发光底物CSPD与之作用 ,导致在波长 4 77nm处发光 ,感光于X光底片上。结果 待检的 12 9份血清标本 ,用此法检测HBVDNA阳性率达 5 8 4 % ,敏感性 2 0pg～0 5 pg。为了比较 ,3 2 9份血清标本用显色法测定 ,阳性率 4 5 0 % ,敏感性 5 0 pg～ 1 0 pg。对照组呈阴性结果。 结论 Dig标记探针分子杂交化学发光法具有较高特异性、敏感性和简便等优点 ,可用于血清中HBVDNA的检测。
- 邬光惠范公忍张桂霞黄耀煊
- 关键词：分子杂交化学发光检测乙型肝炎病毒HBV-DNA
- 原发性肝细胞癌中乙型肝炎病毒X抗原表达的分析被引量：4
- 1995年
- 我们前已报道用抗ＨＢＶｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）三种不同肽段的抗体检出肝癌细胞中ＨＢｘＡｇ的存在。我们用ＰＣＲ技术扩增肝癌肝组织中的ｘ基因，用重组ＨＢｘＡｇ及其抗体分别检测肝癌患者血清中的抗ＨＢｘ和ＨＢｘＡｇ并用免疫组织化学的方法分析肝组织中ＨＢｘＡｇ的表达及其分布。我们发现ＨＢｘＡｇ在肝癌肝组织中阳性率高达９２．６％而且分布广泛，主要表达在细胞浆，但细胞核内亦有见到。癌旁组织检出率也很高，而且在小胆管上皮细胞内亦见有ＨＢｘＡｇ的存在。
- 黄耀煊邱光惠吴霞范公忍皋岚湘王锡育黄洁邓燕林
- 关键词：肝细胞癌乙型肝炎病毒X抗原
- 用DNA重组技术获得乙型肝炎病毒e抗原及其在临床检测中的应用被引量：1
- 1990年
- HBeAg和抗-HBe是乙型肝炎的经典标志物。HBeAg基因与HBcAg基因在DNA C区上相重叠。为要获得重组DNA衍生的HBeAg,本文从adw_2亚型HBV 3.2 kb全长DNA上切取带有HBc基因的BamHI-EcoRI片段,用Bal31和Hpa Ⅱ酶处理产生一系列长度不同的片段,与载体pUR222和pUC 18构成不同的重组质粒,转化到大肠杆菌。通过平板筛选、质粒酶切图谱和抗原抗体反应等筛到高效表达HBeAg的转化株YG301和YG302,中和试验证明了重组HBeAg的血清学特异性。用凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析对其进行提纯并用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合Western印迹法进行纯度鉴定、含量分析和分子量测定。重组HBeAg制品具有高活性、稳定和安全等特点,实验证明它可以代替血源HBeAg制成酶联药盒用于乙肝诊断检测。
- 邬光惠黄耀煊倪丽平段陵浔贾克明
- 关键词：DNA重组HBEAG基因表达
- 细胞因子在免疫反应和病毒相互作用中的机能被引量：1
- 1998年
- 本文介绍了细胞因子信号传导及其产生的调节作用，着重介绍了干扰素以及几个炎性细胞因子的特性、信号传导途径及生物学功能。
- 刘倩黄耀煊
- 关键词：细胞因子免疫反应病毒防御机制
- 转化生长因子-β1在肝细胞性肝癌中表达增强被引量：15
- 1999年
- 目的转化生长因子－β１（ＴＧＦβ１）在细胞生长的负性调节上有重要作用，是肝细胞生长和增殖的强抑制物但肝癌（ＨＣＣ）患者肝组织中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达高．现检测ＨＣＣ患者外周血中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达，血清ＴＧＦβ１水平，以及肝组织中ＴＧＦβⅡ型受体（ＴＧＦβＲⅡ）的表达．方法ＨＣＣ患者外周血分离单个核细胞（ＰＢＭＣ），提取总ＲＮＡ，用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术扩增ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ．血清ＴＧＦβ１水平测定用Ｐｒｏｍｅｇａ公司产的试剂盒．肝组织ＴＧＦβＲⅡ表达的分析用原位杂交法．结果ＨＣＣ患者２０例ＰＢＭＣＴＧＦβ１ｍＲＮＡ用ＲＴＰＣＲ检测阳性率达７０％，对照组阴性．ＨＣＣ患者４０例血清ＴＧＦβ１水平（２７５８ｍｇ／Ｌ±８１０ｍｇ／Ｌ）明显高于对照组（８２７ｍｇ／Ｌ±３７２ｍｇ／Ｌ）．原位杂交表明，ＴＧＦβＲⅡ在ＨＣＣ细胞的胞质中有弱表达．结论ＨＣＣ患者ＴＧＦβ１基因在转录水平和翻译水平上均显示表达增强．ＰＢＭＣ有可能代替肝组织用以检测ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达应用于基础与临床的研究．
- 黄耀煊张桂霞吕民生范公忍陈乃玲邬光惠
- 关键词：肝肿瘤转化生长因子基因表达
- 原发性肝癌患者外周血中甲胎蛋白mRNA的意义被引量：7
- 1999年
- 目的由于ＰＣＲ技术的应用，血循环中癌细胞的检测近有很大进展．本文用ＲＴＰＣＲ检测肝癌（ＨＣＣ）和其他慢性肝病患者外周血中ＡＦＰｍＲＮＡ，藉以反映ＨＣＣ细胞的存在，并与其他血清标记物比较．方法ＨＣＣ患者２２例，肝硬变和慢性乙型肝炎患者各１０例，健康成人受试者（对照）５例．取患者和对照的外周血，分离单核细胞，提取总ＲＮＡ并作电泳鉴定，用合成的两对引物进行巢式ＲＴＰＣＲ扩增ＡＦＰｍＲＮＡ，同时分析血清ＡＦＰ和乙肝标记物．结果ＡＦＰｍＲＮＡ在１３例ＨＣＣ（５９１％），２例肝硬变（２００％）患者外周血中测到，其余标本均为阴性．ＡＦＰｍＲＮＡ阳性的１３例患者肿瘤均大于５ｃｍ，为晚期患者．在该１３例患者中仅有６例（４６１％）在血清中测到ＡＦＰ，但有１２例（９２３％）ＨＢｓＡｇ，抗ＨＢｅ，抗ＨＢｃ全阳性，而ＡＦＰｍＲＮＡ阴性的５例该３标记物全阴性．结论ＲＴＰＣＲ扩增ＡＦＰｍＲＮＡ是检测ＨＣＣ和肝硬变患者循环肝癌细胞的敏感方法．患者外周血中的ＡＦＰｍＲＮＡ有可能作为肿瘤转移和复发的标记对ＨＣＣ诊断、随访观察和疗效评定有较大临床意义．
- 邬光惠陈乃玲范公忍田惠英熊锦华黄耀煊
- 关键词：肝肿瘤甲胎蛋白乙型肝炎
- 慢性乙型肝炎和肝硬化中乙型肝炎病毒X抗原表达的分析被引量：6
- 1995年
- 用基因工程技术由大肠杆菌合成重组乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）并制备兔抗－ＨＢｘＩｇＧ以检测ＨＢｘＡｇ，合成一对以ＨＢＶＸ基因序列为模板的引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增ＨＢＶＤＮＡ。免疫组织化学和血清学方法分别用以分析肝病患者肝组织中的ＨＢｘＡｇ和血清标本中的ＨＢｘＡｇ、抗－ＨＢｘ。发现ＨＢｘＡｇ在慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）患者肝组织中检出率为７２．７％，在肝炎后肝硬化（ＬＣ）中为９２．６％，而乙型肝炎核心抗原（ＨＢｃＡｇ）在ＬＣ中检出率为４７．８％。在ＣＡＨ、慢性迁延性肝炎和ＬＣ的血清中ＨＢｘＡｇ的阳性率分别为４４．４％、６６．６％和３３．３％，与ＨＢｅＡｇ的阳性率相似，而且在这些ＨＢｘＡｇ阳性的血清中可检出ＨＢＶＤＮＡ的存在，ＨＢｘＡｇ的表达与ＨＢＶ复制紧密相关，ＨＢｘＡｇ可能是一慢性ＨＢＶ感染的重要标志物。
- 黄耀煊邬光惠王锡育吴霞范公忍邓燕林皋岚湘黄洁
- 关键词：乙型肝炎肝硬变乙型肝炎病毒X抗原
- HBV X基因在大肠杆菌中高效表达及血清抗X抗体检测被引量：2
- 1993年
- 本文分别用大肠杆菌(E.colf)的Lpp启动子和M13噬菌体的geneⅡ启动子表达了分子量约为17 kDa的HBx蛋白,并以抗合成X多肽抗血清和抗X融合蛋白抗血清对该重组蛋白进行了分析鉴定(用ELISA法和Western印迹法),然后用重组X蛋白检测肝病病人血清中抗X抗体。我们采用一种改进的ELISA方法检测了212份血清标本,结果表明:肝硬化,慢活肝、肝癌、慢迁肝和急性乙型肝炎病人血清中抗X抗体阳性率分别为49.3%、47.6%、37.8%、29.6,6和40.0,6,高滴度的抗体主要存在于肝硬化和慢活肝病人血清中。
- 童贻刚黄耀煊邬光惠
- 关键词：乙型肝炎病毒基因表达
- 乙型肝炎病毒X基因的表达产物对HLA-DR表达的效应被引量：2
- 2001年
- 邬光惠黄耀煊孙殿兴胡学玲
- 关键词：HLA-DR基因
