黄海
- 作品数：2 被引量：24H指数：2
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 鸡胚胎原始生殖细胞体外培养被引量：11
- 2005年
- 以14￣15期鸡胚血液为材料,采用Ficoll密度梯度离心方法,提取鸡胚胎原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),在无基质细胞和基质细胞上分别进行体外培养。从实验结果可以看出:在含有胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、鸡血清(chicken serum,CS)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人胰岛素样生长因子(hIGF-1)、小鼠白血病抑制因子(mLIF)和青、链霉素双抗的M199培养液中培养时,鸡PGCs最多能够存活4天;当采用细胞因子和5天鸡胚胎性腺基质细胞共培养时能存活23代且每代细胞增殖可达近10倍。提纯后的PGCs细胞冻存复苏后,经台盼蓝染色鉴定存活率可达80%左右。
- 谢蓓黄海胡小芬曹祥荣黄启忠李震
- 关键词：胚胎原始生殖细胞体外培养转基因动物
- 猪IFNα基因在毕赤酵母中的高效分泌表达被引量：13
- 2005年
- 巴斯德毕赤酵母载体质粒 pPICZαA含有强启动子 PAOXⅠ和α MF信号肽序列,构建猪 IFNα基因的重组质粒pPICZαA IFNα,并转入E .coli JM109中,得到转猪IFNα基因工程菌,经酶切鉴定克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为猪 IFNα基因。通过电击将经 SacⅠ酶切后线性化的 pPICZαA IFNα质粒转化到巴斯德毕赤酵母 KM71中。SDS PAGE和Western blot鉴定表达产物的结果表明,分泌于胞外的猪 IFNα蛋白分子量比猪IFNα理论值分子量稍大,估计是糖基化的原因。表达的蛋白可发生正确的抗原 抗体反应,表达量为 0.45 mg/mL。将蛋白表达上清经细胞毒性实验检测表达产物的抗病毒活性为2.1×104 IU/mL。
- 黄海谢蓓于瑞嵩刘惠莉张德福曹祥荣李震
- 关键词：IFNΑ巴斯德毕赤酵母基因重组分泌表达
