韩钰
- 作品数：116 被引量：206H指数：6
- 供职机构：三峡大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HIV-1 p15(Gag)基因的克隆、蛋白表达及抗体制备被引量：1
- 2008年
- 目的为了研究HIV-1p15(Gag)的生物学活性,制备HIV-1p15(Gag)蛋白及其特异性抗体。方法用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达HIV-1p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的蛋白。以纯化目的蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性。结果原核表达载体pET28a(+)-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约20000的p15(Gag)蛋白经western blot鉴定正确。纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论得到纯化的HIV-1p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。
- 柳发勇刘朝奇史继静杨凡余枫华杨春秀韩莉任东明韩钰
- 关键词：HIV-1原核表达免疫原性多克隆抗体
- 多胺类似物BENS和TBP对胰腺癌PANC-1细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响被引量：3
- 2014年
- 为探讨多胺类似物BENS和TBP对胰腺癌PANC-1细胞生长的影响、促进细胞凋亡的机制以及迁移能力的影响,运用MTT法检测药物对细胞生长的影响;亚凋亡峰流式细胞分析法及TUNEL法检测细胞凋亡;Western blotting法测定Bax蛋白、细胞色素C蛋白的表达变化;Ranswell技术检测细胞迁移能力的改变。分析发现,两种多胺类似物均可显著抑制PANC1癌细胞增殖,抑制作用随药物浓度加大而增加,其细胞毒性大小依次为BENS>TBP。细胞凋亡分析发现,BENS和TBP均可诱导PANC1发生细胞程序性凋亡,导致亚凋亡峰出现和明显的DNA断裂现象。胞浆中Bax蛋白和细胞色素C含量显著增加,同时显著性抑制PANC1细胞的迁移能力。表明BENS和TBP能够抑制人胰腺癌PANC1细胞增殖;阻止PANC1细胞迁移的能力;同时诱导细胞发生凋亡,其作用机制可能与改变肿瘤细胞正常的细胞周期,活化线粒体参与的细胞凋亡途径相关。
- 杨建林韩钰王凯张贺吉张军王艳林
- 关键词：多胺类似物
- SSAT基因重组质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达
- SSAT(精胺/精眯 N1-乙酰转移酶)是多胺降解代谢的限速酶,多种肿瘤细胞内 SSAT 的诱导性高表达, 可决定肿瘤对 Polyamine Analogue 类抗癌药物的敏感性,提示 SSAT 可能成为抗肿瘤治疗的潜在...
- 韩钰王亚芬曹春雨袁太宁王艳林
- 文献传递
- CPENSpm对非小细胞性肺癌细胞的生长抑制及其作用机制
- 肿瘤细胞的快速生长极大地依赖于细胞内小分子多胺(腐胺,精脒,精胺)的含量, 由此,多胺代谢途径已成为当前抗肿瘤研究和药物设计的新靶点。已经设计和合成出一批与天然多胺有类似化学结构的多胺类似物(Polyamine Anal...
- 王艳林韩钰袁太宁曹春雨周永芹
- HIV-1Nef调节内皮细胞黏附分子ICAM-1的表达被引量：4
- 2010年
- 目的研究HIV-1的调节基因Nef对ECV304细胞ICAM-1表达的影响,从而为分析HIV-1感染引起内皮细胞生物学活性的变化,以及为阐明Nef参与HIV-1致病的分子机制奠定基础。方法应用本实验室已经建立保存的HIV-1Nef基因在内皮细胞的稳定表达细胞株ECV304-Nef和其阴性对照细胞株ECV304 pcDNA 3.1(+),通过RT-PCR、实时定量PCR(real-time PCR)、Western blot、FCM和细胞黏附试验分析ECV304-Nef细胞ICAM-1的表达水平。结果 RT-PCR、real-time PCR结果显示ECV304-Nef细胞ICAM-1 mRNA表达水平明显升高,为对照组的(4.3±0.2)倍;Western blot结果示ECV304-Nef细胞I-CAM-1蛋白的表达水平高于对照组;FCM分析显示ECV304-Nef细胞和对照组细胞ICAM-1阳性细胞百分率分别为(35.3±2.2)%和(12.5±0.8)%(P<0.01),两组间ICAM-1表达有显著差异。细胞黏附实验观察到ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞数明显多于对照组,荧光仪定量分析结果显示ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞的荧光强度值显著高与对照组(P<0.05)。结论本实验证实了HIV-1Nef基因可以上调血管内皮细胞细胞黏附分子ICAM-1的表达。
- 杨凡刘朝奇覃晓琳吕佰瑞周永芹韩钰
- 关键词：HIV-1NEFICAM-1血管内皮细胞
- 高表达精脒/精胺N^1-乙酰基转移酶对人肺癌A549细胞株生长的影响
- 2011年
- 旨在研究人精脒/精胺N1-乙酰基转移酶(spermidine/spermine N1-acetyltransferase,SSAT)高表达对人肺癌A549细胞生长的影响。以pCR2.1-SSAT质粒为模板,PCR法扩增人SSAT基因并克隆至pcDNA3.1表达载体。重组质粒转染A549细胞后,RT-PCR法和Western blotting法筛选SSAT高表达的细胞株。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。成功构建pcDNA3.1-SSAT重组质粒,用该质粒转染A549细胞后,筛选获得稳定高表达SSAT的细胞株。SSAT高表达导致细胞生长抑制,S期细胞减少和自发性凋亡细胞增多。结果显示,稳定高表达SSAT可在A549肺癌细胞中部分模拟多胺类似物类抗癌药物的药理活性,导致瘤细胞生长抑制和细胞凋亡。
- 柳蔚韩钰蔡富强王艳林
- 关键词：SSAT肺癌细胞
- 尼可地尔对哮喘气道重塑大鼠肺组织Toll样受体4以及核因子-κB p65表达的影响被引量：5
- 2012年
- 目的观察尼可地尔对哮喘气道重塑大鼠肺组织中Toll样受体4(TLR-4)及核因子(NF)-κBp65的作用以及对Bax/Bcl-2的调节情况。方法 32只清洁级SD雄性大鼠,随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组和尼可地尔组。采用5点注射和雾化吸入鸡卵清蛋白+氢氧化铝的方法复制大鼠哮喘模型,地塞米松组予地塞米松0.5 mg.kg-1.d-1雾化吸入,尼可地尔组予尼可地尔3 mg.kg-1.d-1雾化吸入,正常组与哮喘组雾化吸入生理盐水,共4 wk。观察大鼠肺组织病理学改变,NF-κB p65、Bax、Bcl-2的含量,以及TLR-4 mRNA的表达。结果与哮喘组相比,尼可地尔组大鼠的肺部组织炎症细胞浸润较少,肺泡的组织结构较为完整。哮喘组大鼠肺组织NF-κB p65、Bcl-2、TLR-4 mRNA表达高于正常组,Bax表达量较正常组低,差异均有显著意义(P<0.05)。尼可地尔组和地塞米松组大鼠NF-κB p65、Bcl-2、TLR-4mRNA表达低于哮喘组,Bax表达量较哮喘组高,均有显著差异(P<0.05)。结论尼可地尔能逆转哮喘大鼠肺组织病理变化,降低TLR-4介导的NF-κB p65表达,改善Bax/Bcl-2表达失调为其可能机制。
- 李杰周鑫韩钰王志强
- 关键词：尼可地尔哮喘TOLL样受体4K通道
- 人抗酶抑制因子-1的克隆与原核表达
- 2010年
- 目的:克隆人抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)cDNA,建立在大肠杆菌中原核表达并纯化人OAZI-1蛋白的实验技术。方法:巢式RT-PCR法从人A549总RNA中扩增人OAZI-1 cDNA并构建pET-28a/OAZI-1原核表达质粒。该质粒转化大肠杆菌原核表达菌BL21(DE3)后IPTG诱导表达。诱导表达出的重组蛋白用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。SDS-PAGE和Western法检测重组OAZI-1蛋白的表达和纯化。结果:成功克隆出编码全长人OAZI-1的cDNA序列,并构建出原核表达质粒pET-28a/OAZI-1。DNA测序分析,重组质粒中的OAZI-1 cDNA无突变,与6×His标签框架对接正确。重组质粒转化入大肠杆菌表达菌BL21(DE3)中后,可用IPTG诱导表达出重组OAZI-1蛋白,该重组蛋白可用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。结论:成功建立了人抗酶抑制因子的原核表达和纯化的实验方法,为后续OAZI-1的功能研究奠定了基础。
- 何玲韩钰王艳林
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 多胺类似物双乙基去甲精胺联合阿司匹林高效杀伤宫颈癌Caski细胞的研究被引量：2
- 2013年
- 目的:研究多胺类似物双乙基去甲精胺(BENS)与阿司匹林联用对宫颈癌Caski细胞的生长影响以及可能的细胞学机制。方法:多胺类似物BENS联用阿司匹林孵育体外培养的人宫颈癌Caski细胞,采用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞存活率,DNA Ladder以及流式细胞术观察各组细胞周期和凋亡率变化,Western blot检测Bcl-2、Bax和cyt-C凋亡相关基因的表达情况,化学发光法测定精胺氧化酶(SMO)活性。结果:BENS与阿司匹林联用能显著降低单用BENS的细胞存活率(P<0.05),同时低剂量阿司匹林就能显著增强BENS诱导细胞凋亡作用(P<0.01)。联合用药组与单独用药组相比较,细胞G0/G1期比例明显升高,S期和G2/M期比例下降;诱导细胞凋亡发生;胞浆中Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,cyt-C由线粒体释放。且SMO活性无明显改变。结论:联用低剂量阿司匹林能有效增强BENS诱导人宫颈癌Caski细胞凋亡的作用,但与多胺代谢过程无关。
- 杨建林韩钰王艳林张伟
- 关键词：阿司匹林CASKI细胞
- HIV-1 p15（Gag）基因的克隆、蛋白表达及抗体制备被引量：1
- 2007年
- 目的：构建HIV-1p15（Gag）原核表达载体，诱导蛋白表达及制备多克隆抗体。方法：用PCR的方法扩增编码p15（Gag）基因序列，将其克隆到原核表达载体pET28a（＋）中，利用大肠杆菌表达系统表达HIV-1p15蛋白，分别用His抗体和HIV阳性血清做westernblot鉴定目的蛋白的免疫原性。纯化目的蛋白免疫家兔，制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验（ELISA），细胞免疫组织化学法检测抗体滴度及其特异性。结果：原核表达载体pET28a（＋）-p15（Gag）成功构建，可在大肠杆菌BL2。（DE3）中用IPTG诱导表达，得到相对分子质量约20KD的p15（Gag）蛋白，经westernblot鉴定正确。纯化蛋白免疫家兔，制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论：得到纯化的HIV-1p15蛋白，制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15（Gag），为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。
- 柳发勇刘朝奇史继静杨凡余枫华杨春秀韩莉任东明韩钰
- 关键词：HIV-1原核表达免疫原性多克隆抗体
